Teste de Elisa

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ATIVIDADE P2 – IMUNOLOGIA BÁSICA E CLÍNICA INSTRUÇÕES:
A atividade pode ser respondida e enviado por meio da sala de Classroom, até o dia 11/06/2021. Elabore uma pesquisa sobre 01 (um) teste imunológico apresentado nas últimas duas aulas (por ex.: Elisa, PCR). O texto deve conter, principalmente, as seguintes informações:
Para as respostas a seguir foi escolhido o teste de Elisa, em função de ser um dos mais utilizados nos dias atuais, pelo seu baixo custo em relação a outros testes e sua elevada sensibilidade diagnostica e especifica diagnostica nos resultados.
1. Conceito do teste;
R: O teste de ELISA baseia-se em reações antígeno-anticorpo detectáveis por meio de reações enzimáticas (teste imune enzimático). A enzima mais comumente usada nesta prova á a peroxidase, responsável por catalisar a reação de desdobramento da água oxigenada (H2O2) em H2O mais O2.
2. Metodologia;
R: O antígeno purificado fica aderido aos poços da microplaca de poliestireno (fase sólida). Em seguida, adiciona-se o soro do paciente e, caso a amostra seja positiva, anticorpos específicos se ligam aos antígenos da fase sólida. Na segunda etapa, inclui-se um segundo anticorpo dirigido contra as imunoglobulinas da espécie, que é ligado à peroxidase (conjugado). Ao adicionar-se o substrato apropriado para a enzima, ocorre a reação de cor. Os orifícios onde ocorreu a reação antígeno-anticorpo apresentam uma coloração. A intensidade da cor produzida é proporcional à concentração de anticorpos na amostra de soro.
3. Aplicabilidade;
R: O teste de Elisa é bastante utilizado a muito tempo, tanto na medicina quanto na indústria conforme destacaremos alguns exemplos abaixo:
a) Alérgenos do alimento
ELISA é bastante utilizado na indústria alimentar para detectar a presença de alérgenos para a rotulagem legalmente exigida dos ingredientes. Esta aplicação tira proveito extremamente da sensibilidade de ELISA e pode detectar níveis de contaminadores potenciais do alérgeno do alimento em concentrações nas baixas partes por milhão (ppm) escalas.
 Elisa também tem a vantagem em teste de petróleos e derivados e em teste de substancias em claras de ovos ou o leite, onde os métodos alternativos tais como o PCR são incapazes de detectar.
b) VIH
Este é o teste de primeira linha no diagnóstico da infecção pelo HIV (vírus da SIDA/AIDS). Estes testes até a sua terceira geração só detectavam a presença de anticorpos (IgG e IgM) três ou quatro semanas após o contato. No entanto, os testes de quarta geração já detectam tanto anticorpos quanto um dos antígenos do HIV (a proteína p24), fato esse que diminuiu sensivelmente o período de janela imunológica. Este é o teste de primeira linha no diagnóstico da infecção pelo HIV (vírus da SIDA/AIDS). Um resultado reagente num teste de HIV por ELISA é sempre confirmado por outros testes específicos, como é o caso do Western Blot, que detecta proteínas deste vírus, e do PCR, que detecta os seus ácidos nucleicos virais. 
c) Vírus do Nilo Ocidental
A detecção de vírus do Nilo Ocidental é realizada por ELISA, onde através do teste pode confirmar se a infecção progrediu ao sistema nervoso central do paciente.
4. Vantagens e Desvantagens;
R: Como uma das principais vantagens, utiliza-se muito o ELISA pela combinação do custo baixo e elevada sensibilidade e especificidade. Com ele é possível evidenciar em amostras de sangue variáveis quantitativas, como antígenos e anticorpos. Porém, um resultado positivo num teste de ELISA, geralmente, será confirmado por outros testes específicos como, Western blot, que detecta proteínas de vírus, e do PCR (Reação em Cadeia da Polimerase), que detecta os ácidos nucleicos virais. Como desvantagens podemos destacar no momento como exemplo atual a covid-19, onde o uso de Elisa como teste rápido pode gerar um elevado numero de falsos negativos, considerando que os sintomas só aparecem em alguns dias.
 5. Equipamentos necessários para execução;
R: Independente do método utilizado, a leitura das placas é realizada por um espectrofotômetro (com programa específico para a leitura de ELISA), que permite uma análise quantitativa. Geralmente, se faz uma CURVA PADRÃO, na qual 8 “poços” de uma fileira com concentrações crescentes e conhecidas de antígeno são preenchidos. A curva servirá como um padrão de comparação para as quantidades de antígenos nas soluções-testes, e o próprio programa fornece o gráfico para a leitura e compreensão do resultado.
 6. Bibliografia utilizada (muito importante).
Fontes:
https://www.evidenciasaude.com.br/blog/entenda-o-metodo-elisa-2/
http://www.bloodjournal.org/content/bloodjournal/57/1/32.full.pdf?sso-checked=true
http://www.microbiologynotes.com/elisa-principle-types-and-applications/
http://www.elisa-antibody.com/ELISA-applications/virus-test
http://www.elisa-antibody.com/index.php?page=food-industry
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24817055
https://oglobo.globo.com/sociedade/coronavirus-servico/conheca-as-vantagens-desvantagens-dos-diferentes-tipos-de-teste-para-diagnosticar-coronavirus-24348396