Sequenciamento Genético (4)

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SEQUENCIAMENTO 
GENÉTICO
Alunos: Camila Mendes, Cinthia Catharina, Lucas Campos, Victor
Orientadora: Prof. Alzira
PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE MINAS GERAIS
Programa de Graduação em Biomedicina
Introdução
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• 1953 Watson e Crick desvendaram a estrutura tridimensional do 
DNA ;
• Muitos avanços aconteceram e contribuíram para elucidar a 
replicação do DNA;
• Os cientistas conseguiam mensurar a composição dos nucleotídeos, 
mas não a sua ordem;
• Na década de 70 os primeiros métodos para sequenciamento de DNA 
foram criados.
O que é o sequenciamento?
• O sequenciamento de DNA tem por finalidade determinar a ordem 
dos nucleotídeos (guanina, citosina, adenina e timina) em 
amostras de DNA, e isso se dá por meio de vários processos 
bioquímicos.
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Método de Sanger
• Primeiro e mais utilizado método de sequenciamento;
• Desenvolvido pelo bioquímico britânico Frederick Sanger na década 
de 70;
• O método consiste na adição de nucleotídeos modificados, chamados 
didesoxiribonucleotídeos (ddNTP’s);
Método de Sanger
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• O DNA é formado por moléculas de desoxirribonucleotídeos
• 1 fosfato
• 1 desorribose
• 1 base nitrogenada (A ou G ou C ou T)
• Para este método é necessário:
• 1 amostra de DNA
• Enzima DNA polimerase
• Primer
• Desorribonucleotídeos (dNTPs)
• Didesoxiribonucleotídeos (ddNTPs)
Método de Sanger
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Ion Torrent 11
• Plataforma de sequenciamento atualmente distribuída pela Thermo Fisher 
• Baseada em sequenciamento semicondutor (por pH). 
• Plataforma focada em velocidade e praticidade (é considerada a mais rápida para 
sequenciamento de genomas).
• Parecido com o pirosequenciamento.
• Ideal para DNA pequeno e médio.
• Evolução do processo acompanha a informática.
• Análises rápidas ~2H
• Elevada sensibilidade e baixo custo.
Ion Torrent funcionamento
• DNA é fragmentado
• Adição de marcadores.
• Cada fragmento liga-se a um “bead”.
• “Beads” são posicionados em poços.
• Ocorre replicação do fragmento.
• Cobre o “bead”.
• Poços individuais
• Banho de dNTP, caso dNTP ligue-se libera H+.
• O chip detecta variaçao de pH
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Método Ion Torrent 13
Pirosequenciamento 
• Proposto por Mostafa Ronaghi (1996) no instituto Real Tecnológico da Suécia.
• Pesquisador na Universidade de Stanford.
• Vice-presidente da Illumina Company.
• Primeira alternativa ao método de Sanger para sequenciamento do DNA.
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Pirosequenciamento - Princípios 
• Detecção através da Luz.
• Liberação de Pirofosfato na adição de um nucleotídeo.
• Ação de 4 diferentes enzimas: DNA polimerase, ATP sulfurilase, Luciferase, 
Apirase.
• Substratos utilizados: Adenosina 5’ fosfossulfato (APS), Luciferina.
• Resultados obtidos rapidamente.
Pirosequenciamento 
Conclusão
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Referências
Referências
PINTO, S.; KREMER, F, S. Plataformas de Sequenciamento de Nova Geração & 
Préprocessamento de dados. Disponível em: : 
<http://labbioinfo.ufpel.edu.br/aulas_2016/Capitulo%203.pdf>.
Acesso em : 04 out. 2018
RONAGHI, M. Pyrosequencing sheds light on DNA sequencing.
Genome research, v.11, p.3-11, 2001. Disponível em: 
<http://genome.cshlp.org/content/11/1/3.long>. Acesso em: 04 out. 2018