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FORMAÇÃO DE BIOFILME EM DIFERENTES MATERIAIS USADOS NA REABILITAÇÃO ORAL
O objetivo deste estudo foi avaliar a densidade e os aspectos morfológicos de biofilmes aderidos a diferentes materiais aplicados na reabilitação oral suportada po odontologia implantes. Sessenta amostras foram divididas em quatro grupos: porcelana à base de feldspato, liga CoCr, titânio comercialmente puro grau IV e zircônia estabilizada com ítria. A saliva humana foi diluída em BHI suplementado com sacarose para crescer biofilmes por 24 ou 48 h. Após este período, biofilme foi removido por tratamento com 1% de protease e então analisado por espectrofotometria (absorbância), método de unidade formadora de colônia (CFU.cm-2) e varredura de armas de emissão de campo microscopia eletrônica (FEG-SEM). Os maiores valores de absorbância e CFU.cm-2 foram registrados em biofilmes cultivados em ligas de CoCr, quando comparados com os outros materiais de teste para 24 ou 48 h. Além disso, as imagens FEG-SEM mostraram uma alta densidade de biofilme no CoCr. Não havia diferenças significativas na absorbância e CFU.cm-2 entre biofilmes cultivados em zircônia, porcelana e titânio (p <0,05). Ensaios microbiológicos associados a análises microscópicas análises detectaram um maior acúmulo de biofilmes orais em materiais à base de CoCr do que em titânio ou zircônia que são usados ​​para estruturas protéticas. 
INTRODUÇÃO 
A cavidade oral é um ambiente complexo que reúne várias substâncias que vão desde alimentos até a saliva, biofilmes orais e seus metabólitos (1,2). Biofilmes orais são comunidades bem organizadas de microrganismos circundados por uma matriz à base de polissacarídeos contendo ácidos nucléicos, proteínas e H2O, que estão aderidos ao dente, estruturas restauradoras dentárias ou tecidos moles orais (1,2). Como consequência, o pH da cavidade oral é frequentemente alterado, atingindo valores baixos após a ingestão de substâncias ácidas e / ou liberação de ácidos do metabolismo microbiano oral (1-4). A temperatura também varia temporariamente durante a ingestão de alimentos quentes ou frios. Além disso, existe uma variação de oxigênio na cavidade oral, como por exemplo a baixa presença ou ausência de conteúdo de oxigênio nas áreas abaixo da margem gengival. Como consequência, a colonização microbiana na boca segue a variação do oxigênio e do pH que promove o crescimento preferencial de microrganismos aeróbios ou anaeróbios (1-4). Na verdade, a cavidade oral possui uma microbiota específica que envolve uma relação harmoniosa com os tecidos do hospedeiro em um estado saudável. No entanto, um desequilíbrio entre os microrganismos e os tecidos do hospedeiro pode levar a doenças bucais, como gengivite e periodontite (1,3,4).
A formação do biofilme na cavidade oral é um processo gradativo que consiste em quatro estágios distintos (2): (a) formação da película adquirida; (b) colonização primária (precoce); (c) colonização / co-agregação secundária; e (d) estabelecimento de biofilme maduro. A saliva humana fornece a principal fonte de nutrientes para a adesão dos microrganismos e permite o revestimento de superfícies duras ou moles por uma película fina (5-10 µm de espessura), heterogênea e acelular, denominada película adquirida ou filme condicionador. A partir daí, a colonização precoce começa pela ligação da bactéria primária à película adquirida (1). As primeiras bactérias aderentes (Streptococcus sanguinis, S. oralis, S. gordonii, S. mitis, Actinomyces naeslundii, Capnocytophagaochraceae, S. mutans e S. sobrinus) estão fracamente e reversivelmente ligadas à película adquirida por adesinas, embora possam permanecer e proliferar, dando início aos fenômenos de coagregação microbiana (2,5). As espécies de Steptococcus representam 60-80% de todos os colonizadores primários. Essa coagregação é mediada por trocas metabólicas e genéticas conhecidas como quorum sensing (6). A colonização secundária ocorre 3 a 5 dias após o início da deposição da película adquirida (1). Nesse processo, os microrganismos começam a se multiplicar e a se coagular com as espécies parceiras levando à organização estrutural do biofilme. A maturação do biofilme é alcançada em 2 a 3 semanas (1,2,5).
A formação de biofilme em materiais para reabilitação oral também depende de oxigênio, nutrientes e pH (2,7,8). Em um dentista prótese implantossuportada, a colonização microbiana começa nas áreas protéticas expostas ao ambiente oral levando em consideração que a formação de biofilme depende de o desenho protético, as condições de superfície e a forma oral microbiota. Na verdade, a microbiota presente no peri-implantar parece depender dos mesmos fatores relacionados à microbiota de superfícies de dentes naturais (1-4). O crescimento de biofilmes em materiais restauradores varia dependendo da superfície aspereza que determina o intertravamento inicial do biofilme que auxilia no processo de maturação (2,7,9). Teughels et al. (2) enfatizar que a rugosidade da superfície (rugosidade Ra acima de 0,2 µm), energia livre de superfície, molhabilidade e produtos químicos composição de materiais metálicos são fatores dominantes que influenciar a formação de biofilme supra ou subgengival áreas. Estudos anteriores relataram o efeito de misturas e biofilmes de uma espécie na degradação e desgaste de materiais à base de titânio (13-15). Biofilme de uma espécie composto por S. mutans crescem como aglomerados enquanto o biofilme misto cobriu toda a superfície de titânio por 48 h de crescimento (13-15). A diminuição do pH foi detectada após 24 h que pode induzir a corrosão do titânio (14,15). 
Avanços nas porcelanas dentais desde a década de 60 e um aumento substancial nos custos das estruturas de ouro na década de 70 levaram ao desenvolvimento de ligas alternativas, como paládio, cobalto-cromo, níquel-cromo e ligas de titânio (10,11). O titânio comercialmente puro e as ligas de titânio tornaram-se os metais industriais mais importantes devido às suas atrativas propriedades mecânicas (resistência à tração 450-950 MPa), densidade (4,5 g.cm-3), alta biocompatibilidade e resistência à corrosão (10,11). Recentemente, há uma tendência de desenvolvimento de novos implantes ou abutments feitos de zircônia para melhorar os resultados estéticos e também para reduzir o acúmulo de biofilme nas áreas peri-implantar (4,12). No entanto, poucos estudos relataram a adesão de biofilmes orais em estruturas à base de zircônia. Existem diferentes metodologias in vitro e in vivo para avaliar a densidade, composição e morfologia do biofilme, utilizando saliva humana ou artificial modificada (13-16). Uma combinação de diferentes abordagens experimentais, incluindo técnicas microbiológicas e microscópicas, pode ser útil para avaliar o crescimento do biofilme in vitro em novos materiais ou estruturas aplicadas na reabilitação oral. O objetivo principal deste estudo foi avaliar a densidade e os aspectos morfológicos de biofilmes in vitro cultivados em diferentes materiais utilizados na reabilitação oral suportada por implantes dentários.
MATERIAIS E MÉTODOS
Preparação das Amostras:
Sessenta amostras cilíndricas (10 mm de diâmetro e 2 mm em altura) foram divididos em quatro grupos: porcelana à base de feldspato; Liga CoCr; titânio comercialmente puro grau IV; e policristal de zircônia tetragonal estabilizado com ítria. Os detalhes sobre os materiais metálicos e cerâmicos testados neste estudo estão descritos na Tabela 1. As amostras foram moídas por úmido até 4000 Mesh usando lixas de SiC presas a uma máquina de polimento (DPU; Struers, Copenhagen, Dinamarca). Em seguida, as amostras foram limpas por ultrassom em álcool isopropílico por 10 min, seguido de limpeza em água destilada por 5 min em banho ultrassônico (Izasa Jouan J12). Em seguida, as amostras foram secas em ar quente e esterilizadas em autoclave a 121 ° C por 15 min. Os valores de rugosidade das amostras foram obtidos em relação ao parâmetro de rugosidade Ra que consiste no valor médio aritmético entre os valores das alturas de pico e vale no perfilde rugosidade efetivo. A rugosidade Ra foi registrada em cinco áreas diferentes de cada material (n = 25) usando um perfilômetro óptico (Dektak 150; Veeco, North Bergen, NJ, EUA). O comprimento da medição foi de 2 mm e cortado em 0,25 mm durante 30 s de medição.
Formação de biofilme:
A saliva humana foi obtida de três participantes diferentes com idades entre 20 e 31 anos para a formação de biofilme. Cada participante estava em boas condições de saúde bucal e dentária, sem história de tratamento com antibióticos durante os 6 meses anteriores. Nenhum dos participantes sofria de qualquer doença sistêmica ou das glândulas salivares que pudesse afetar a secreção salivar. Antecedentes de periodontite ou profundidade de sondagem superior a 6 mm foram os critérios de exclusão. A saliva foi estimulada por goma de mascar neutra previamente imersa em água deionizada por 24 horas. Durante o primeiro minuto, a saliva foi deglutida, em seguida, 3 mL foram retirados de cada indivíduo e misturados sob vórtice. Após a mistura, a saliva foi diluída (1: 5) em meio de cultura (BHI, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) contendo 5% de sacarose (BHI 5% S) (16). Para esta diluição, 6 mL foram coletados da saliva e misturados em 24 mL de BHI 5% S. O pH do meio de cultura com saliva foi registrado no primeiro momento e após 24 ou 48 h de crescimento do biofilme por meio de potenciômetro digital (Inolab1 e eletrodo sensix 41; WTW Measurement Systems, Inc., Ft. Myers, FL, Alemanha). Os cupons de material foram colocados em placas de 24 poços contendo 2 mL de BHI 5% S e 0,1 mL de saliva humana. As placas de 24 poços foram subsequentemente incubadas a 36,8 ºC em condições microaerofílicas (CO2 5%) para simular as condições do ambiente oral.