Aula_4_-_MICROSCOPIA

Prévia do material em texto

MICROSCOPIA 
Profa. Núbia Pereira da Costa 
MICROSCOPIA 
É a ciência que estuda os métodos e aplicações 
do microscópio para observações de objetos 
menores que o limite de resolução do olho 
humano (0,1mm) 
MICROSCÓPIO – Instrumento óptico que 
serve para o estudo de objetos pequenos, 
menores que o limite do olho humano. 
MEDIDAS EM MICROSCOPIA 
DIMENSÕES RAMO ESTRUTURA MÉTODO 
>0,1mm Anatomia Órgãos 
 
Olho e lentes 
100-10µm Histologia Tecidos Vários microsc. 
ópticos 
10-0,2 µm Citologia Células , 
Bactérias 
Vários microsc. 
ópticos 
200-0,4nm Morfologia 
submicroscópica 
Componentes 
celulares 
Microscópio 
eletrônicos 
<1nm Estruturas 
molecular 
Posição dos 
átomos 
Difração de raios X 
1mm = 1.000 µm; 1 µm = 1.000nm 
Olho humano=0,1mm = 100µm ; Microscópio óptico = 0,2µm; M. eletrònico = 0,1nm 
 
 
 CONTEXTO HISTÓRICO 
 
 - MICROSCÓPIO - APÓS 4 SÉCULOS DA 
DESCOBERTA DAS LENTES 
 
 - 1590 CRIAÇÃO MICROSCÓPIO POR HANS E 
ZACHARIAS JANSEN 
 
 - 1665 OBSERVAÇÃO DA CÉLULA ROBERT 
HOOKE 
 
 -1930 DESENVOLVIMENTO MICROSCÓPIO 
ELETRÔNICO. 
 
TIPOS DE MICROSCÓPIO 
MICROSCÓPIO SIMPLES – 1 SISTEMA LENTES 
 * LUPA OU MICROSCÓPIO ESTEREOSCÓPICO 
MICROSCÓPIO COMPOSTO – 2 SISTEMAS LENTES 
 
SIMPLES COMPOSTO 
MICROSCÓPIO COMPOSTO 
# MICROSCÓPIO ÓPTICO OU LUMINOSO 
# MICROSCÓPIO ELETRÔNICO 
PRINCÍPIO DE ILUMINAÇÃO: 
MICROSCÓPIO ÓPTICO - 
COMUM 
 - MECÂNICA 
CONSTITUIÇÃO 
 - ÓPTICA ÓPTICO DE OBSERVAÇÃO 
 SISTEMA ILUMINAÇÃO 
 
 
JUNQUEIRA & CARNEIRO, 2004 
LÂMPADA 
ESPELHO 
ESPÉCIME 
PRISMA TUBO OU 
CANHÃO 
REVOLVER 
PARAFUSO MACRO 
E MICROMÉTRICO 
BRAÇO 
PARAFUSO CONTROLE 
PLATINA CHARRIOT 
BASE 
DIAFRAGMA 
CONDENSADOR 
PLATINA 
OBJETIVAS 
OCULAR 
CONSIDERAÇÕES E CARACTERÍSTICAS 
DO MICROSCÓPIO ÓPTICO COMPOSTO 
 - COMO SE FORMA O OBJETO 
 - IMPLICAÇÕES DA IMAGEM INVERTIDA 
 - OBJETOS EM TRÊS DIMENSÕES 
 
 
 - AMPLIAÇÃO E VISUALIZAÇÃO 
CONCEITOS IMPORTANTES EM 
MICROSCOPIA 
 PODER DE RESOLUÇÃO DO MICROSCÓPIO 
 É A CAPACIDADE QUE O MICROSCÓPIO TEM DE VISUALIZAR 
BEM DOIS PONTOS PRÓXIMOS NO OBJETO OBSERVADO 
 LIMITE DE RESOLUÇÃO DO MICROSCÓPIO 
 É A MENOR DISTÂNCIA QUE PODE EXISTIR ENTRE DOIS 
PONTOS PARA SER VISUALIZADO E APARECEREM 
INDIVIDUALIZADOS NA IMAGEM DO SISTEMA ÓPTICO 
 
 LR = K x λ 
 AN 
K= 0,61 
λ= 0,55 (comprimento onda verde amarelo) 
AN= abertura numérica da lente 
 
5x AN=0,12 → LR= 0,61 x 0,55 = 2,8μm 
 0,12 
100x AN=1,3 → LR= 0,61 x 0,55 = 0,26μm 
 1,3 
LR NO MOC =0,2 
MICRAS 
CONCEITOS IMPORTANTES EM 
MICROSCOPIA 
 DISTÂNCIA FOCAL 
 AUMENTO 
 
 
 
 
OCULAR OBJETIVA AMPLIAÇÃO 
12 5x 60x 
12 10x 120x 
12 40x 480x 
12 100 1.200x 
TIPOS DE MICROSCÓPIO 
ÓPTICO 
 MICROSCÓPIO DE FLUORESCÊNCIA COMUM 
Foto de Shirlei Pimentel (Unicamp) 
Foto da Profª Adelina Ferreira (UFMT) 
 
 MICROSCÓPIO DE FLUORESCÊNCIA CONFOCAL 
 
 
 
Foto de Shirlei Pimentel (Unicamp) 
Foto de Maria Júlia (Unicamp) 
 
 MICROSCÓPIO DE POLARIZAÇÃO 
 
 
Microscopia de luz polarizada, 
revelando os grânulos de enxofre no 
interior da bactéria Thiomargarita 
namibiensis. 
www.portalsaofrancisco.com.br 
MICROSCÓPIO COMPOSTO 
 MICROSCÓPIO ÓPTICO 
 MICROSCÓPIO ELETRÔNICO 
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO 
 PRINCÍPIO FUNDAMENTAL ~ ÓPTICO 
 
 # LENTES ELETROMAGNÉTICAS 
 # FEIXES ELETRÓNS DE ALTA VELOCIDADE 
CANHÃO DE TUNGSTÊNIO 
↓ 
ELÉTRONS SÃO ABSORVIDOS PELOS ÁTOMOS 
 ↓ 
 FONTE - TELA VÁCUO 
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE 
TRANSMISSÃO 
MICROSCOPIA ELETRONICA 
TRANSMISSÃO - MET 
 
FILAMENTO DE 
TUNGSTÊNIO (CATODO) 
FEIXE DE ELÉTRONS 
ANODO 
LENTES CONDENSADORA 
ESPÉCIME 
LENTES OBJETIVAS 
ELETROMAGNÉTICAS 
LENTE PROJETORA 
TELA DE VISUALIZAÇÃO 
OU PELÍCULA FOTOGRÁFICA 
PODER DE RESOLUÇÃO DO MET 
-TEÓRICO: 40.000x 
-EFETIVAMENTE: 2.000x MOC 
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE 
VARREDURA 
MICROSCOPIA ELETRONICA 
DE VARREDURA - MEV 
FILAMENTO DE 
TUNGSTÊNIO (CATODO) 
FEIXE DE ELÉTRONS 
ANODO 
LENTES CONDENSADORA 
ESPÉCIME 
LENTES OBJETIVAS 
ELETROMAGNÉTICAS 
LENTE PROJETORA 
TELA DE VISUALIZAÇÃO 
OU PELÍCULA FOTOGRÁFICA 
BOMBINAS DE 
VARREDURA 
MICROGRAFIAS - MET E MEV 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 11 - Tricomas 
tectores (MEV). Foto 
de Barthlott, W. -
Nultsh, W. Botânica 
geral. Editora 
ArtMed 2000. 
Figura 12 - Tricoma 
secretor (MEV). Foto 
de Peterson , L. 
(www.uoguelp.ca/bot
any/courses/ BOT 
3410). 
Micrografia de vaso do xilema 
www.passeiweb.com/.../conducao
_da_seiva 
http://www.passeiweb.com/.../conducao_da_seiva
http://www.passeiweb.com/.../conducao_da_seiva
ALGUMAS CARACTERÍSTICA DOS 
PRINCIPAIS TIPOS DE 
MICROSCÓPIO 
CARACTERÍSTICAS MOC MET MEV 
TIPOS DE 
RADIAÇÃO 
LUZ ELÉTRONS 
 
ELÉTRONS 
 
TIPO DE LENTES DE VIDRO ELETRO -
MAGNÉTICA 
ELETROMAGNÉTICA 
 
PODER DE 
AMPLIAÇÃO 
1.500x 250.000x 25.000x 
LIMITE DE 
RESOLUÇÃO 
0,5nm 200nm 10nm 
IMAGEM (COR) 
 
GERALMENTE 
COLORIDA 
PRETO E BRANCO PRETO E BRANCO 
MATERIAL 
OBSERVADO 
 
VIVO OU NÃO VIVO 
LÂMINA VIDRO 
NÁO VIVO, 
DESIDRATADOS 
MUITO FINO 
IDEAL TOPOGRAFIAS 
DE SUPERFÍCIE DE 
OBJETOS NÃO 
SECCIONADOS 
APLICAÇÕES DE CADA TÉCNICA 
M. ÓPTICO M. ELETR. 
TRANSMISSÃO 
M. ELETRÔNICO 
VARREDURA 
- CÉLULAS INTRACELULARES SUPERFÍCIES DIVERSAS 
- CÓRTES 
HISTOLÓGICOS 
MORFOLOGIA CELULAR 
ORGANELAS PEQUENAS 
CLASSIFICAÇÃO E 
TAXONOMIA INSETOS, 
FUNGOS 
- INTERAÇÕES 
PARASÍTAS CÉLULAS 
MORFOLOGIA DE 
PÓLEM 
BIBLIOGRAFIA 
RECOMENDADA: 
LODISH et al., 2002