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INTRODUÇÃO AO ESTUDO DAS CÉLULAS PROCARIOTAS As células vivas classificam-se em procariotas e eucariotas As células eucariotas são maiores e mais complexas do que as procariotas. O seu genoma é maior e possui mecanismos muito mais elaborados de regulação da expressão genética. O DNA das células eucariotas encontra-se confinado num compartimento próprio, delimitado por membranas, o núcleo. No citoplasma existem vários compartimentos (organelos) delimitados por membranas e especializados em funções específicas. Outra característica das células eucariotas é a presença, no citoplasma , de redes filamentosas (citoesqueleto) que servem tanto para apoio estrutural como para funções de trilhos e motores responsáveis pelos movimentos celulares. Célula procariota vs. Célula eucariota BACTERIOLOGIA Ultra-estruturas bacterianas a sua composição e funções Ultra estruturas bacterianas Nucleóide Sítio da célula onde se encontra o material genético bacteriano, DNA. Os procariotas são organismos haplóides, e geralmente apresentam apenas 1 único cromossoma sem membrana nuclear e de aparelho mitótico Em bactérias, o cromossoma não se apresenta associado a histonas, sendo estabilizado por outras proteínas de natureza básica Ao microscópio electrónico exibe uma estrutura fibrilar dispersa ao longo da célula. Plasmídeo • Molécula de DNA de dupla cadeia, muito menor que o cromossoma bacteriano. • A maior parte dos plasmídeos bacterianos são moléculas de DNA circulares, mas algumas bactérias têm plasmídeos lineares. • Localização de muitos dos genes que conferem resistência aos antibióticos e disseminam facilmente entre espécies bacterianas. Ribossomas Estruturas muito abundantes, dispersas no citoplasma. São os locais de síntese proteica e são constituídos por duas subunidades, 30S e 50S, formados por proteínas e ácidos ribonucleicos. O ribossoma procariótico tem um coeficiente de sedimentação de 70S enquanto que o da célula eucariota é de 80S. Uma consequência importante desta diferença é que certas drogas interagem especificamente com os ribossomas das células procariotas sem interferir com os das células eucariotas. Muitos dos antibióticos usados em Medicina actuam por este mecanismo. Endosporos Presentes nas bactérias Grampositivas dos géneros Bacillus e Clostridium (bactérias do solo) Em condições adversas estas bactérias podem transformar-se num estado vegetativo ou dormente Localização no interior é uma característica da bactéria Estrutura desidratada de múltiplas camadas que protege a bactéria Contém uma cópia completa do cromossoma Concentrações mínimas de proteínas essenciais e ribossomas Alta concentração de cálcio ligado ao ácido dipicolínico Esporulação • A falta de nutrientes específicos do meios de cultura desencadeia o início do processo que está completo ao fim de 6 a 8 horas • Após a duplicação do cromossoma, o DNA e conteúdo citoplasmático (núcleo) são rodeados por peptidoglicano e pela membrana do septo • O núcleo do esporo é circundado pelo córtex, constituído por fina camada interna de peptidoglicano e uma camada externa frouxa de peptidoglicano • O córtex é rodeado por uma cápsula de proteína Esporulação 1. Formação do filamento axial 2. Formação do septo esporulativo 3. Formação do pré-esporo 4. Formação do cortex 5. Formação de túnicas 6. Maturação do esporo 7. Germinação Germinação • Transformação dos esporos no estado vegetativo é estimulada pela ruptura da cápsula externa por stress mecânico, pH, calor ou outro agente stressante, exigindo água e um nutriente em falta • Demora cerca de 90 minutos • Iniciado o processo, o esporo absorve a água, perde a sua cápsula e produz uma nova célula vegetativa idêntica à célula vegetativa original, completando assim todo o ciclo • Estando a sua cápsula fragilizada, o esporo fica enfraquecido e pode ser inactivado como outras bactérias Variação na morfologia e localização dos esporos Membrana citoplasmática Constituída por uma bicamada fosfolipídica onde se inserem proteínas integrais e associam proteínas periféricas, sem nenhum esterol ou colesterol Funciona como estrutura de permeabilidade selectiva. Desempenha também funções biosintéticas (peptidoglicano) e bioenergéticas (metabolismo oxidativo). • Organização equivalente à das células eucariotas embora com maior proporção proteína/fosfolípido • Contém proteínas de transporte de metabolitos e de outras substâncias, iões e enzimas Invaginação da membrana – mesossoma: 1) Mesossoma central – envolvido na replicação do DNA e na divisão celular 2) Mesossoma periférico – envolvido na secreção de certas enzimas • Porinas- proteínas que se organizam em poros ou canais que permitem a passagem de compostos hidrofílicos. • Proteínas- difusão específica de compostos • Proteínas OmpA-participam na conjugação bacteriana mediada por pilus F Parede Celular Esta estrutura constitui uma protecção mecânica eficaz contra a ruptura osmótica da célula em ambientes hipotónicos. É também responsável pela morfologia bacteriana e pelo duplo comportamento das bactérias em relação à coloração de Gram Excepções dos microrganismos pertencentes às Archaeobacteria que possuem pseudomureínas e micoplasmas que não possuem parede celular Peptidoglicano é constantemente sintetizado e degradado - autolisinas PEPTIDOGLICANO, MUCOPEPTÍDEO OU MUREÍNA • Heteropolímero rígido e insolúvel na água. • Responsável pela rigidez e forma das bactérias • Poroso para permitir a difusão de metabolitos para a membrana plasmática • É essencial para a estrutura, replicação e sobrevivência em condições adversas • Estrutura básica contém: 1. Dois tipos de açúcares unidos por uma ligação β(1-4): 1. N-acetilglucosamina (NAG) 2. N-acetilmurâmico (NAM) 2. Um peptídeo de 4 aminoácidos ligados ao NAM (contém alguns D-aminoácidos) • Biosíntese do peptidoglicano: Fase citoplasmática, Fase membranar e Fase parietal Parede celular A ligação β (1-4) é susceptível à acção da lisozima (presente nas lágrimas, saliva, secreções da mucosa e clara do ovo) O 3º aminoácido é um diaminoácido: • lisina • ácido diaminopimélico • ácido diaminobutírico Pontes interpeptídicas entre cadeias lineares vizinhas fazemse entre o grupo –NH2 do 3º aminoácido (diaminoácido) e o grupo –COOH do 4 aminoácido (D-alanina) Bactérias Gram-positivas: Apresentam múltiplas camadas enormalmente ligações cruzadas nas três dimensões – parede celular muito forte e rígida Bactérias Gram-negativas: Espessura constituída por uma única camada Composição da parede celular das bactérias Gram positivas e Gram negativas Composição da parede celular das bactérias Gram positivas Ácidos teicóicos e ácidos lipoteicóicos Heteropolímeros firmemente associados ao peptidoglicano mas não participam na rigidez da parede celular. A zona hidrófila dos ácidos teicóicos é acessível a anticorpos específicos nas bactérias Gram positivas Importantes factores de virulência Composição da parede celular das bactérias Gram negativas • Contém duas camadas externas à membrana citoplasmática • Não contém ácidos teicóicos ou lipoteicóicos • Na superfície externa da camada de peptidoglicano encontra-se a membrana externa • Área entre a superfície externa da membrana citoplasmática e a face interna da membrana externa – espaço periplasmático • Membrana externa mantém a estrutura bacteriana e proporciona uma barreira de permeabilidade a macromoléculas, protege de condições adversas (sistema digestivo do hospedeiro) • Actua como barreira contragrandes antibióticos e proteínas como lisozima • Membrana externa possui uma dupla camada de lípidos: Folheto interno – contém fosfolípidos normalmente encontrados nas membranas bacterianas Folheto externo – lipopolissacarídeo (LPS) (molécula anfipática – possui extermidades hidrofóbicas e hidrofílicas) LIPOPOLISACARÍDEO • Principal endotoxina das bactérias Gram negativas. • 3 regiões (polisacarídeo O - ligado ao núcleo estende-se para o exterior da bactéria, core polisacarídeonúcleo de polissacarídeo – essencial para a estrutura e viabilidade bacteriana, lípido A – actividade de endotoxina Morfologia bacteriana Cápsula • Estrutura justaposta externamente à parede celular. • Desempenha um papel de protecção contra a desidratação. • É uma barreira importante à fagocitose - Antifagocítica • Pouco antigénica - Factor de virulência • Barreira contra moléculas hidrofóbicas tóxicas • Aderência a outras bactérias ou ao hospedeiro Composição da cápsula Geralmente de natureza polisacarídica mas também pode ter origem polipeptídica Estruturas análogas á cápsula • Glicocálice - material viscoso de natureza polisacarídica que rodeia a célula e promove a aderência a outras superfícies celulares. • Slime layer – estrutura de superfície difusa, não organizada e também de natureza polisacarídica. • S-layer – camada adicional, bem organizada, de origem proteica ou glicoproteica e cuja função não está bem definida (C. difficile) Apêndices bacterianos FIMBRIAE (SING.,Fimbria) São estruturas filamentosas da superfície bacteriana só visíveis ao M.E. constituídas por subunidades proteicas pilina. Reconhecem receptores celulares nas superfícies epiteliais viabilizando a colonização e infecção das mucosas do hospedeiro PILI ( SING., PILUS) • São estruturas filamentosas da superfície bacteriana sónvisíveis ao M.E. constituídas por subunidades proteicas pilina. • Os pili medeiam o contacto entre bactérias de sexo diferente, F+ e F- permitindo durante a conjugação, a aproximação das células bacterianas e a transferência de DNA entre células FLAGELLA (SING., FLAGELLUM)-flagelos • Órgãos de locomoção - conferem mobilidade, permitindo a quimiotaxia em direcção ao alimento ou afastamento do veneno • São longos apêndices, constituídos por subunidades proteicas, flagelina. • A sua disposição tem um significado taxonómico Movimento dos flagelos Classificação das bactérias consoante o número e disposição de flagelos: Monótrica – 1 flagelo terminal Anfítrica – 1 flagelo em cada extremidade Lofótrica – 1 tufo de flagelos numa extremidade Anfótrica – 1 tufo de flagelos em cada extremidade Perítrica – muitos flagelos em toda a periferia Outras estruturas intracitoplasmáticas Vacúolos de gás: Vesículas gasosas constituídas por proteínas Impermeáveis à água mas permeáveis aos gases Podem regular a intensidade luminosa, concentrações de oxigénio e níveis de nutrientes na célula Produzidos por procariotas presentes na água, permitindo a mobilidade das células bacterianas, em resposta aos factores ambientais (cianobatérias) Divisão celular • Produção de células-filhas exige o crescimento e a extensão dos componentes da parede celular • Há produção de um septo (parede transversal) para dividir as células-filhas em duas bactérias F • Septo – duas membranas separadas por duas camadas de peptidoglicano • A formação do septo é iniciada na membrana celular • Cresce a partir dos lados opostos em direcção ao centro da célula até à clivagem das células-filhas • A clivagem incompleta faz com que as células permaneça unidas, formando cadeias (estreptococos) ou cachos (estafilococos)
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