Métodos de estudo em Histologia

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métodos de estudo
 em 
histologia
É UMA ÁREA DA CIÊNCIA QUE ESTUDA
COMO UM AGRUPAMENTO DE CÉLULAS
ORIGINAM OS TECIDOS DO CORPO,
ASSIM COMO A DIFERENÇA ENTRE ESSES
TECIDOS E SUAS RESPECTIVAS FUNÇÕES
NA HISTOLOGIA SÃO DEFINIDOS 4 TIPOS
DE TECIDOS, SENDO ELES: EPITELIAL,
CONJUNTIVO, MUSCULAR E NERVOSO
O Q U E É A H I S T O L O G I A ?
PARA ADENTRAR NO ESTUDO DOS
TECIDOS SE É NECESSARIO QUE
FAÇAMOS USO DE ALGUMAS
FERRAMENTAS E TECNICAS QUE
PERMITAM OSERVAR ESSE TECIDO DE
FORMA ADEQUADA, COM AS
ESTRUTURAS INTACTAS E COM BOA
RESOLUÇÃO, DENTRE ESSES MEIOS ESTÁ
O PREPARO DE LÂMINAS HISTOLOGICAS
QUE PROPORCIONARÁ UM OBJETO A SER
OBSERVADO, A LÂMINA, COM A
INTEGRIDADE DAS ESTRUTURAS
INTACTAS.
O PREPARO DE LÂMINAS É FEITO EM 
 CINCO ETAPAS (COLETA, FIXAÇÃO,
INCLUSÃO, COLORAÇÃO E MONTAGEM),
ENTRETANTO A TERCEIRA ETAPA SE
SUBDIVIDE EM 4 PROCESSOS
(DESIDRATAÇÃO, DIAFANIZAÇÃO OU
CLAREAMENTO, INCLUSÃO OU
IMPREGNAÇÃO E MICROTOMIA).
COM ISSO TEMOS A SEGUINTE SUCESSÃO
DE PROCESSOS: COLETA, FIXAÇÃO,
DESIDRATAÇÃO, DIAFANIZAÇÃO OU
CLAREAMENTO, INCLUSÃO OU
IMPREGNAÇÃO, MICROTOMIA, 
 COLORAÇÃO E MONTAGEM.
P R E P A R O D E L Â M I N A S
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É O PROCESSO QUE VISA CONSERVAR O
TECIDO E TODAS AS SUAS ESTRUTURAS,
DE PROCESSOS DE DEGRADAÇÃO, SEJAM
POR ENZIMAS PRESENTES NA PRÓPRIA
CÉLULA, AUTÓLISE, OU A DEGRADAÇÃO
POR AGENTES EXTERNOS, BACTÉRIAS,
ASSIM COMO CONFERIR UMA
DETERMINADA RIGIDEZ A AMOSTRA.
F I X A Ç Ã O
EXISTEM DOIS TIPOS DE FIXAÇÃO:
A FIXAÇÃO QUÍMICA, QUE BASEIA-SE NA
ULTILIZAÇÃO DE FIXADORES,
SUBTANCIAS QUÍMICAS QUE CONFEREM
AO TECIDO ESTABILIDADE ESTRUTURAL,
CABE PONTUAR 3 TIPOS DE FIXADORES,
SENDO ELES O FORMOALDEIDO A 4%, O
GLUTARALDEIDO E O LIQUIDO DE BOUIN
OBS: O FIXADOR MAIS ULTILIZADO É O
FORMOALDEIDO A 4%, OU MAIS
COMUNMENTE CONHECIDO COMO
FORMO. 
HÁ TAMBÉM A FIXAÇÃO FÍSICA, QUE
CONSISTE BASICAMENTE EM CONGELAR
A AMOSTRA RECOLHIDA
ESSA PROCESSO CONSISTE EM
SUBSTITUIR A ÁGUA PRESENTE NO
TECIDO POR ÁLCOOL, ETANOL,
MERGULHANDO A AMOSTRA EM
DIVERSOS BANHOS DE CONCENTRAÇÃO
CRESCENTE DA SUBSTÂNCIA (ÁCOOL A
70, 80, 90 E 100 %)
D E S I D R A T A Ç Ã O
ESSE PROCESSO TEM COMO FINALIDADE
PROPORCIONAR, NA ETAPA DE
INCLUSÃO, UM TECIDO QUE CONSIGA
SER INFILTRADO POR PARAFINA, DESTE
MODO, DURANTE A DIAFANIZAÇÃO SERÁ
ULTILIZADO UMA SUBSTÂNCIA
ORGÂNICA PARA SUBSTITUIR O ÁLCOOL
QUE IMPREGNOU O TECIDO NA ETAPA
ANTERIOR, UMA VEZ QUE A PARAFINA
NÃO SE MISTURA COM O ALCOOL. AO
FINAL DO PROCESSO DE DIAFANIZAÇÃO
OBTEMOS UMA AMOSTRA TRASNLÚCIDA.
AS SUBSTÂNCIAS MAIS USADAS SÃO O
XILOL E O TULOL.
D I A F A N I Z A Ç Ã O
O U
C L A R E A M E N T O
A AMOSTRA VAI SER MERGULHADA EM 
 UMA FORMA COM PARAFINA A 60° C,
ELIMINANDO ASSIM A SUBSTÂNCIA
ORGÂNICA PRESENTE E ASSUMINDO O
SEU LUGAR,APÓS IMPREGNADO COM A
PARAFINA A FORMA SERÁ LEVADA A
TEMPERATURA AMBIENTE PARA QUE
POSSA DESSE MODO SOLIDIFICAR,
CONFERINDO AO TECIDO CERTA
DUREZA.
I N C L U S Ã O
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histologia
O BLOCO DE PARAFINA CONTENDO O
TECIDO SERÁ AGORA LEVA A UMA
MAQUINA CHAMADA MICRÓTOMO, ONDE
SERÁ SECCIONADO POR UMA LÂMINA DE
VIDRO/AÇO DE MODO A FORNECER
CORTES DE 1 A 10 MOCRÔMETROS DE
ESPESSURA, CORTES MAIORES QUE ESSE
PODEM GERAR PROBLEMAS NA HORA DE
OBSERVAR A LÂMINA EM MICROSCOPIO
ÓPITICO.
M I C R O T O M I A
A MAIORIA DOS CORANTES SE
COMPORTAM COMO ÁCIDOS OU BÁSICOS
E TENDEM A FORMAR LIGAÇÕES
ELETROSTÁTICAS (SALINAS) COM
RADICAIS IONIZANTES DOS TECIDOS
OS COMPONENTES DO TECIDOS QUE SE
CORAM BEM COM CORANTES BÁSICOS
SÃO CHAMADOS DE BÁSOFILOS, E OS
QUE TÊM GRANDE AFINIDADE POR
CORANTES ÁCIDOS, DE ÁCIDOFILOS.
OBS: OS OPOSTOS SE ATRAEM.
CORANTE BÁSICO + COMPONENTE ÁCIDO
CORANTE ÁCIDO + COMPONENTE BÁSICO
CORANTES BÁSICOS: AZUL DE
TOLUIDINA, AZUL DE METILENE &
HEMATOXILINA
CORANTES ÁCIDOS: ORANGE G, EOSINA,
& FUCSINA ÁCIDA
C O L O R A Ç Ã O
NA IMAGEM PODEMOS VER A
HEMATOXILINA CORANDO O NUCLEO
DAS CELULAS EM ROXO, ISSO SE DÁ
DEVIDO AOS CONSTITUINTES ÁCIDOS
DESSA ESTRUTURA, E A EOSINA
CORANDO O CITOPLASMA EM ROSA,
DEVIDO OS COMPONENTES BÁSICOS DO
CITOPLASMA.
CORANTES TRICÔMICOS: MALLORY E
MASSON
OBS: OS CORANTES TRICOMICOS SÃO
CORANTES ESPECIASI USADOS PARA
EVIDENCIAR COMPONENTES DO TECIDO
CONJUNTIVO COMO MUSCULOS, FIBRAS
DE COLAGENO, AS FIBRINAS E OS
ERITROCITO. 
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histologia
A MONTAGEM CONFIGURA O ULTIMO
PROCESSO ANTES DA LÂMINA ESTAR
PRONTA PARA SER OBSERVADA EM
MICROSCÓPIO ÓPTICO. NESSE PROCESSO
UMA GOTA, OU DUAS, DE RESINA,
BÁLSAMO DO CANADÁ, SERÁ COLOCADO
SOBRE A AMOSTRA DE TECIDO,
POSICIONADA SOBRE A LÂMINA, OU NA
LAMÍNULA, APÓS ISSO BASTA
PRESIONAR A LÂMINA PARA RETIRADA
DE BOLHAS DE AR ,QUE POSSAM TER SE
FORMADO, E DEPOIS LEVA-LÁ PARA
SECAGEM EM ESTUFA OU PODE-SE
DEIXAR SECAR AO AR LIVRE, PARA
FINALIZAR BASTA ETIQUETAR A
LÂMINA. 
M O N T A G E M
É UMA ÁREA DAS CIÊNCIAS VOLTADA
PARA A OBSERVAÇÃO DE COMPOSTOS E
ESTRUTURAS QUE NÃO PODEM SER
VISTOS A OLHO NU. A PRINCIPAL
FERRAMENTA USADA NOS ESTUDOS DA
MICROSCOPIA É O MICROSCÓPIO.
O Q U E É A M I C O R S C O P I A ?
O MICROSCÓPIO MAIS ULTILIZADO
DENTRO DOS ESTUDOS DE MICROSCOPIA
NA GRADUAÇÃO É O OPTICO, ELE É
COMPOSTO POR UM CONJUNTO DE
LENTES QUE PROPICIAM A AMPLIAÇÃO
DOS OBJETOS QUE ESTÃO SENDO
ESTUDADOS, E COM O AUXILIO DE UMA
FONTE DE LUZ ELE EVIDÊNCIA AS
ESTRUTURA PRESENTES NAS LÂMINAS
HISTOLOGICAS.
M I C R O S C Ó P I O Ó P T I C O
OCULARES : LANTES SITUADAS
PRÓXIMAS AOS OLHOS DE QUEM
OBSERVA. AMPLIFICA AS IMAGENS
CAPTADAS PELAS OBJETIVAS
REVÓLVER : SUPORTE ONDE AS
OBJETIVAS FICAM ACOPLADAS.
OBJETIVAS : LENTES PRÓXIMAS DA
AMOSTRA QUE SERVEM PARA AMPLIAR
A IMAGEN DO OBJETOS DE ESTUDO.
PLATINA : LOCAL ONDE SE COLOCA A
LÂMINA PARA OBSERVAÇÃO.
CHARRIOT : PERMITE QUE A LÂMINA
POSSO SER MOVIDA QUANDO COLOCADA
SOBRE A PLATINA.
C O M P O N E N T E S 
D O 
M I C R O S C O P I O
CONDENSADOR : PARTE DO
MICROSCÓPIO QUE TEM A FUNÇÃO DE
CONCENTRAR A LUZ QUE INCIDE SOBRE
A LÂMINA
DIAFRAGMA DO CONDENSADOR :
REGULA A QUANTIDADE DE LUZ QUE
ENTRA NO CONDENSADOR.
BOTÃO MACROMÉTRICO : REGULAR A
ALTURA DA PLATINA.
BOTÃO MICROMÉTRICO : TEM COMO
FUNÇÃO AJUSTAR O FOCO DA IMAGEM.
FONTE DE LUZ : PARTE QUE FORNECE A
LUMINOSIDADE NECESSÁRIA PARA A
OBSERVAÇÃO EM MICROSCÓPIO DE LUZ.
BOTÃO LIGA/DESLIGA : LIGAR OU
DESLIGAR A FONTE DE LUZ.
SUPORTE : SUSTENTA A PARTE ÓPTICA.
E É DIVIDIDO EM DUAS PARTES: O PÉ,
OU BASE, E O BRAÇO.
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histologia
1 – ocular
2 – revólver
3 – objetiva
4 – platina
5 – charriot
6 – condensador
7 – diafragma do condensador
8 – botão para regular a altura do
condensador
9 – macrométrico
10 – micrométrico
11 – botão liga/desliga fonte de luz
12 – controle de intensidade da
iluminação
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ÓPTICA
CONTRASTE DE FASE
CONTRASTE DIFERENCIAL DE
INTERFERÊNCIA
CONFOCAL
FLUORESCÊNCIA
ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
ELETRÔNICA DE VARREDURA
RADIOAUTOGRAFIA
T I P O S D E M I C R O S C O P I A
M. ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO:
FEIXES DE ELÉTRONS SERÃO LANÇADOS
SOBRE A AMOSTRA ATRAVESSANDO O
TECIDO, SENDO ASSIM DIRECIONADOS
PARA UM RECPETOR PARA QUE POSSA
PRODUZIR UMA IMAGEM.
M. ELETRÔNICA DE VARREDURA: FEIXES
DE ELETRÓNS SÃO LANÇADOS SOBRE A
AMOSTRA MAS NÃO A ATRAVESSAM, O
QUE OCORRE E A PASSAGEM DESSES
ELETRÓNS SOBRE A SUPERFICIE DA
LÂMINA, DEVIDO A UMA CAMADA FINA
DE METAL IMPREGNADA NA LÂMINA,
DEPOIS DE VARREREM O TECIDO OS
ELETRONS SÃO ENCAMINHADOS A
RECPTORES ELETRÔNICOS PARA
PRODUZIREM UMA IMAGEN.
M I C R O S C O P I A E L E T R Ô N I C A
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V S
M I C R O S C O P I A E L E T R Ô N I A
D E V A R R E D U R A
PROCESSO FISÍCO PELO QUAL É USADA A
FORÇA CENTRÍFUGA PARA SEPARAR
ORGANELAS E COMPONENTES
CELULARES EM FUNÇÃO DE SEUS
COEFICIENTES DE SEDIMENTAÇÃO, OU
SEJA, QUANTO MAIS DENSA FOR A
MOLÉCULA MAIS PRÓXIMA DO FUNDO
ELA SE LOCALIZARÁ , ENQUANTO QUE,
AS MENOS DENSA VÃO SE LOCALIZAR
NA SUPERFICIE DO ESCIPIENTE.
F R A C I O N A M E N T O C E L U L A R
ESSE PROCESSO CONSTITUIE-SE EM 
 RETIRAR UMA AMOSTRA DE
TECIDO/CÉLULA E COLOCA SOBRE UMA
PLACA, ESTERELIZADO, E FORNECER
DURANTE O TEMPO NECESSARIO:NUTRIÇÃO, OXIGENAÇÃO E
TEMPERATUTRA SIMILARES AOS DO
LOCAL DE ONDE ELE FOI RETIRADO,
VISANDO MANTER ESSA AMOSTRA VIVA,
MESMO QUE FORA DO CORPO, PARA QUE
SE POSSO ESTUDAR SEU
FUNCIONAMENTO, OU NO CASO DOS
TECIDOS, TEMPO SUFICIENTE PARA A
REALIZAÇÃO DO ENXERTO.
C U L T U R A D E C É L U L A S E
T E C I D O S
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 em 
histologia
É UMA METODOLOGIA QUE POSSIBILITA
IDENTIFICAR, POR MEIO DE
ANTICORPOS, MÓLECULAS EM CORTES
OU EM CÉLULAS CULTIVADAS, APARTIR
DA LIGAÇÃO QUE SE FORMA QUANDO
UM ANTICORPO É EXPOSTO A UM
ANTIGENO.
CADA ANTICORPO É DESENVOLVIDO
PARA COMBATER UM TIPO ESPECIFICO
DE ANTIGENO. NA IMUNOCITOQUIMICA
USAMOS DESSA AFINIDADE PARA
IDENTIFICAR O AGENTE PATOGÊNICO.
NESSE PROCESSO É FEITO A COLORAÇÃO
DO ANTICORPO COM SUBSTÂNCIAS
FLUORECENTES ASSIM QUANDO ESSA
MOLECULA FOR COLOCADA SOBRE A
PLACA NA QUAL O ANTIGENO ESTÁ, ELA
SE LIGARÁ A UMA PROTEINA
ESPECIFICA DO PATOGENO INDICANDO
POR MEIO DOS MARCADORES
FLUORENCENTES O LOCAL EM QUE O
ANTIGENO SE ENCONTRA.
I M U N O C I T O Q U Í M I C A
REFERÊNCIAS 
JUNQUEIRA, L. C.;
CARNEIRO, J.
Histologia básica.
8.ed. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan,
1995.
MARINI, G. et al.
Morphological
changes
 
Atlas, citologia e 
 histologia
2021.