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INTERNAL Avaliação: 10,0 Nota Partic.: Av. Parcial.: 2,0 Nota SIA: 10,0 pts ENSINEME: AMPLIFICAÇÃO IN VITRO DE DNA 1. Ref.: 4119325 Pontos: 1,00 / 1,00 A amplificação e quantificação de ácidos nucleicos através da PCR e suas variações têm sido utilizadas nas situações clínicas. É esperado de um biologista molecular saber em quais delas cada variação melhor se aplica, e como interpretar corretamente os resultados ao mesmo tempo em que altos padrões de controle de qualidade são mantidos. Sobre as aplicações de PCR em tempo real, é correto afirmar que: A identificação de organismos fastidiosos por PCR somente é possível após reação de transcrição reversa (RT). O diagnóstico de SARS-CoV2 é feito por uma reação de transcrição reversa (RT) seguida de PCR quantitativo, pois seu genoma é um RNA de polaridade positiva. O diagnóstico de SARS-CoV2 não pode ser feito por PCR quantitativo, pois seu genoma é um RNA de polaridade positiva que não pode ser amplificado de forma segura. A técnica de TaqMan não pode ser usada na identificação de diferentes alelos, pois é sua fluorescência é emitida de forma inespecífica. A expressão de um gene pode ser quantificada por qPCR, porém seu uso é restrito à pesquisa científica. 2. Ref.: 4119323 Pontos: 1,00 / 1,00 Sobre o tema Biologia Molecular, analise as afirmativas a seguir: 1. A síntese do DNA é semiconservativa, ou seja, ela conserva metade da fita mãe incorporada na fita filha de DNA, a replicação precisa que desoxirribonucleotídeos livres sejam posicionados sobre uma cadeia polinucleotídica molde, e estejam unidos entre si, formando uma nova cadeia complementar à cadeia mãe que serve como molde. A enzima que atua nesse processo é a polimerase. 2. As polimerases do DNA atuam adicionando um nucleotídeo por vez na extremidade 3¿OH livre de uma cadeia polinucleotídica em formação, que se encontre emparelhada com a cadeia molde. Por isso dizemos que a síntese de DNA ocorre no sentido 5 →→ 3. 3. No processo de transcrição, toda a informação genética contida no DNA é transcrita para uma molécula de RNA mensageiro, que, no citoplasma, norteará o processo de tradução. 4. A técnica de PCR consiste em amplificar todo o DNA de um ser vivo, usando uma DNA polimerase que atua em altas temperaturas e é chamada de Taq polimerase, encontrada em procariotos do tipo arquea. Assinale a alternativa que indica todas as afirmativas corretas. São corretas as afirmativas 1, 2, 3 e 4. São corretas apenas as afirmativas 1, 3 e 4. É correta apenas a afirmativa 3. É correta apenas a afirmativa 1. São corretas apenas as afirmativas 1, 2 e 3. ENSINEME: INTRODUÇÃO À BIOLOGIA MOLECULAR 3. Ref.: 3992603 Pontos: 1,00 / 1,00 O resveratol é um polifenol presente em uvas e vinho tinto, dentre suas diversas funções foi observado que é capaz de ativar a expressão do gene Slc2a4, auxiliando no controle da diabetes, considerando noções de epigenética assinale a alternativa correta: O resveratrol pode ser considerado um fator de transcrição uma vez que modula um gene. O consumo de determinados nutrientes, podem afetar nosso padrão genético através de mudanças nos marcadores epigenéticos, esses são restritos a cada indivíduo e não hereditários. A alimentação pode influenciar na expressão gênica, inclusive a nutrigenômica é o estudo do impacto dos nutrientes na expressão genica. A ativação do fator transcricional do gene Slc2a4 mediada por resveratrol não é relacionada a fatores epigenéticos e sim apenas ao consumo da uva e do vinho. O uso do resveratrol pode alterar de forma permanente os marcadores epigenéticos, sendo impossível retornar a expressão basal de Slc2a4. 4. Ref.: 3992606 Pontos: 1,00 / 1,00 Os RNAs de interferência conhecidos como miRNA e siRNA, são muito importantes para regulações pós transcricionais, devido sua capacidade de estimular a degradação RNAm, sobre esses RNAs assinale a alternativa errada: O miRNA e o siRNA são pequenos trechos de RNA com capacidade de degradar o RNAm, logo são responsáveis por alterações pós-traducionais. O siRNA e miRNA, possuem capacidade de serem utilizados como tratamento para algumas patologias, entretanto ainda precisamos compreender melhor como funcionam. A descoberta do miRNA e siRNA nos levou a compreensão de mais um mecanismo de regulação gênica dos eucariotos. O siRNA e miRNA são trechos de RNA produzidos na de forma exógena e endógena, respectivamente, a partir de quebra de sequencias de RNA dupla fita por uma endonuclease Dicer. O miRNA tem origem endógena e siRNA exógena ou endógena. 5. Ref.: 3992604 Pontos: 1,00 / 1,00 Quanto às características estruturais das moléculas de DNA e RNA é correto afirmar que: A base nitrogenada Uracila substitui a base nitrogenada Citosina na molécula de RNA. Diferem entre si, pela molécula do açúcar que compõe seus nucleotídeos. Citosina, Uracila Guanina e Timina são as bases nitrogenadas do DNA. As moléculas de DNA e RNA têm fita dupla de nucleotídeos. Os blocos constituintes das moléculas de DNA e RNA são chamados aminoácidos. ENSINEME: ISOLAMENTO DE ÁCIDOS NUCLÉICOS 6. Ref.: 4134263 Pontos: 1,00 / 1,00 Hoje em dia, o trabalho com material genético tornou-se rotineiro. Para uma correta extração de ácidos nucleicos, é importante a escolha adequada de protocolos e reagentes para aquele material que se quer extrair e para que fim se destina. Em um protocolo de extração de DNA ou RNA, não se deve usar como reagente: Tampão Proteases Álcool Sais Nucleases 7. Ref.: 4134265 Pontos: 1,00 / 1,00 A clonagem molecular tem demonstrado ser uma técnica excepcional para o isolamento de fragmentos de DNA específicos de um organismo. Os processos de clonagem e isolamento de tais fragmentos começam com a construção de bibliotecas de DNA, cDNA ou genômicas. Uma biblioteca de cDNA não apresenta íntrons porque: É construída a partir de DNA genômico. Os íntrons são degradados pela transcriptase reversa. Não podem ser construídas a partir de genes. É construída a partir de mRNA maduro. Os íntrons são retirados in vitro depois da construção do cDNA, por ação de nucleases. 8. Ref.: 4134260 Pontos: 1,00 / 1,00 Todas as alternativas abaixo são consideradas etapas do desenho experimental, exceto: Definir a relação causa-efeito Formular as conclusões Execução Divulgação científica Planejamento ENSINEME: SEQUENCIAMENTO, CLONAGEM E TÉCNICAS DE HIBRIDIZAÇÃO 9. Ref.: 4122295 Pontos: 1,00 / 1,00 Sequenciamento de nova geração, conhecido também como NGS ou sequenciamento profundo de ácidos nucleicos, é um termo geral utilizado para descrever uma série de tecnologias modernas de sequenciamento. Sobre esta tecnologia é correto afirmar que: As tecnologias recentes de sequenciamento de ácidos nucleicos permitem sequenciar tanto DNA como RNA de forma mais rápida e barata do que anteriormente era conseguido com o sequenciamento de Sanger e, por conta disto, estão revolucionando os estudos de genomas e a biologia molecular. Apesar dos inúmeros avanços gerados pelas técnicas de sequenciamento de nova geração, ainda é tecnicamente impossível utilizá-las para analisar os genes que estão sendo expressos em um determinado tecido ou condição. Uma das maiores vantagens das tecnologias de sequenciamento de nova geração é o fato de que as sequências obtidas geralmente são longas, contendo, ao menos, 1 Kpb. Illumina (Solexa) e 454 (Roche) são sequenciadores de nova geração que realizam o sequenciamento direto tanto de DNA quanto de RNA. Uma das restrições ao uso do sequenciamento de nova geração é a necessidade de serem utilizadas amostrasgrandes com alta concentração de ácidos nucleicos. 10. Ref.: 4116461 Pontos: 1,00 / 1,00 É de conhecimento mundial que o desafio central da moderna biologia celular é entender o funcionamento das células em seus detalhes moleculares. Esse objetivo requer técnicas que viabilizem a análise das moléculas envolvidas no processo de fluxo de informação do DNA para proteína e no controle desse fluxo. Muitas técnicas são baseadas em hibridização (ou hibridação). Em relação à hibridização in situ, é CORRETO afirmar: O resultado do experimento de hibridização in situ fluorescente deve ser analisado em microscópio eletrônico com fluorescência. A hibridização in situ não pode ser aplicada em preparações para avaliações dos cromossomos. O DNA é retirado de uma amostra tecidual, e passa por uma reação de PCR para incorporação de nucleotídeos marcados; As sondas utilizadas correspondem a segmentos de ácido nucleico no qual são incorporados nucleotídeos modificados. Os nucleotídeos marcados sempre apresentam um isótopo radioativo, que é detectado através de impressão em filme de raio-X.