RELATÓRIO DA PRÁTICA DE CITOLOGIA

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UNIVERSIDADE PAULISTA - UNIP
  
  
  RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA
 
 
 
CURSO: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS 
 
DISCIPLINA: CITOLOGIA
ALUNA: ELIZABETH GUIMARÃES FERREIRA VIEIRA 
R.A: 2109096 POLO: DUTRA SÃO JOSE DOS CAMPOS
DATA: 06 / 11 e 13/11 / 2021
 
 
 
 
 
 
INTRODUÇÃO
O presente estudo feito na aula prática da disciplina de Citologia, permitiu aos alunos aprenderem na prática o que foi visto anteriormente nas aulas teóricas. 
Os alunos foram orientados quanto ao uso dos IPIS de segurança, devido a todo material biológico coletado para análise ser potencialmente infectante. Foram obrigatórios o uso de jaleco, máscara de proteção e luvas descartáveis.
Com o auxílio do Microscópio óptico composto (MOC), foi possível observar as células que são invisíveis a olho nu.
Para o estudo da aula 1 foi demostrado as partes do Microscópio óptico composto (MOC) e também foi ensinado como manuseá-lo de forma correta e para a observação dos materiais coletados, os alunos foram orientados quanto ao uso dos materiais como as lâminas, lamínulas, o uso de corantes, entre outros. 
Os materiais estudados foram: as células epiteliais da mucosa bucal, iogurte natural, letra de jornal, folha, lâmina pronta com o esôfago de uma rato e amostra de sangue.
Para o estudo da aula 2 foram observados: Lamina 1 - Fígado de porco na técnica H/E, lâmina 2 - coração (Não identificado) na técnica H/E, lâmina 3 - Coração (Não identificado) na técnica Masson, lâmina 4 - Língua de gato na técnica H/E (Obs: Todas as lâminas anteriores foram cedidas pela professora), lâmina 5 - Preparação da Lâmina da folha da Elódea (Egeria densa), lâmina 6 - Preparação da lâmina de raiz de cebola.
Os corantes usados foram: a Hematoxilina e Eosina que evidenciam características estruturais. A hematoxilina cora as estruturas em azul e a eosina cora as estruturas em vermelho ou rosa. Corantes ácidos reagem com componentes catiônicos das células e tecidos. Quando se juntam a hematoxilina e a eosina, coram o citoplasma, filamentos citoplasmáticos e fibras extracelulares. Outro corante usado foi o Masson que é uma coloração especial usada principalmente para caracterizar e discriminar diferentes tecidos conjuntivos e componentes de tecidos moles. 
AULA 1 - IDENTIFICAÇÃO DE PEÇAS E FUNCIONAMENTO DO MICROSCÓPIO ÓPTICO COMPOSTO (MOC) E OBSERVAÇÃO DE CÉLULAS EPITELIAIS DA MUCOSA BUCAL PELA TÉCNICA DO AZUL DE METILENO.
Nessa etapa do estudo foi apresentado aos alunos como identificar peças e o funcionamento do Microscópio Óptico Composto. Posteriormente foi feita a coleta da mucosa bucal de cada aluno separadamente para observação de células epiteliais.
PARTE A: Foi feita a identificação das peças e funcionamento do MOC. 
Material e métodos
Microscópio óptico composto (MOC), lâminas, lamínulas. O Microscópio óptico permite a visualização de material que não é possível ser visto a olho nu. (Figura 1).
Figura 1 - Microscópio óptico composto (MOC)
Fonte: Elizabeth Guimarães
O MOC possue as seguintes peças: Peças ópticas (Oculares e Objetivas), Condensador, Sistema iluminador e/ou espelho plano-côncavo, Peças mecânicas (Tubo ou canhão), Revólver, Braço ou Estativo, Parafusos macrométricos e micrométricos, Sistema Charriot, Lâmina sobre a platina, Mesa ou platina, Base ou pé, Parafuso do sistema condensador e diafragma. 
Focalização: Foi mostrado aos alunos o passo a passo para iniciar o uso do Microscópio, nas seguintes etapas: 
Etapa 1: Ligar a fonte luminosa sempre verificando a voltagem correta;
Etapa 2: Abaixar a platina utilizando o parafuso macrométrico;
Etapa 3: Colocar a lâmina já preparada sobre a platina;
Etapa 4: Ajustar o condensador, o diafragma para obter uma boa iluminação;
Etapa 5: Olhando em direção à platina, girar o parafuso macrométrico para aproximar o material existente na lâmina da objetiva de menor aumento (4x),
Etapa 6: Olhe pelas oculares e gire o parafuso macrométrico no sentido contrário até obter a imagem do material. Depois gire o parafuso micrométrico para obter a imagem bem nítida do material, se houver a necessidade de obter uma imagem mais ampliada para do aumento de 40x para 100x, girando o revólver e assim por diante se houver a necessidade, repetindo o tal procedimento até obter o aumento de 400x.
PARTE B: Observando o material coletado da mucosa bucal 
Foram coletadas as células epiteliais da mucosa bucal de cada aluno individualmente para ser feita a observação.
Material e métodos
 Foram usados os seguintes equipamentos: MOC, espátula de madeira, lâminas, lamínulas, corante azul de metileno, papel filtro e conta-gotas.
Os alunos foram orientados a raspar com uma espátula de madeira, suavemente, a mucosa que reveste a bochecha. Posteriormente espalhar o material contido na ponta da espátula no centro da lâmina de vidro. Depois colocar uma gota do corante sobre o material coletado (células epiteliais). No procedimento seguinte em um ângulo de 45º deixar a lamínula cair sobre o material bruscamente. O preparo foi colocado no MOC nos aumentos 40x, 100x e 400x para observação das células epiteliais, isoladas ou aglomeradas.
Pode-se observar a membrana plasmática, o citoplasma e o núcleo, notando que as células epiteliais da bochecha são poliédricas. (Figura 2).
Figura 2 - Células epiteliais da mucosa bucal
Fonte: Elizabeth Guimarães
PARTE C: Observando a letra de jornal
Nessa parte foi feita a focalização de uma lente de jornal. Cada aluno foi orientado a coletar uma letra de jornal, fornecida pela professora, depois o material foi colado em uma lâmina para observação.
Material e métodos
 Foram usados os seguintes equipamentos: MOC, lâminas; lamínulas; tesoura; pinça; pipeta; recipiente com água; folha de jornal.
Os alunos foram orientados da seguinte forma: Foi recortada uma letra pequena de jornal, em seguida a letra foi Colocada na lâmina em posição de leitura, em cima da letra foi adicionada uma gota de água sobre a lâmina, com o auxílio de uma pipeta, depois colocando a lamínula em posição de 45° e deixar a lamínula cair sobre o material bruscamente. Após a coleta do material usando os materiais disponíveis, o mesmo foi colocado no microscópio de luz para ser observado. Foram usados os procedimentos de focalização do material: O preparo foi colocado no MOC nos aumentos 40x, 100x e 400x para observação das células da celulose presentes no papel e também foi observado que a letra é visualizada inversamente. (Figura 3)
Figura 3 - Letra do jornal
Fonte: Elizabeth Guimarães
PARTE D: Observando a Célula procariótica: bactéria do iogurte
Nessa parte foi feita a coleta de uma gota de iogurte natural para a observação das bactérias presentes. Cada aluno foi orientado a coletar uma gota de iogurte e posteriormente depositar em lâmina para observação.
Material e métodos
 Foram usados os seguintes equipamentos: microscópio de luz; óleo de imersão, lâminas; lamínulas; palito, papel filtro e pipeta.
Os alunos foram orientados da seguinte forma: 
Colocar uma gota de iogurte natural sobre uma lâmina, pingar uma gota de água e homogeneizar com o auxílio de um palito, coloca a lamínula em posição de 45º, rebaixando, lentamente, até que a mesma fique, totalmente, sobre a lâmina, evitando a formação de bolhas de ar.
Proceder à etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x, e analisar na objetiva de 100x, colocando o óleo de imersão para observar o transporte de água pelas bactérias e seus tipos morfológicos. Foram observadas as bactérias do iogurte. (Figura 4).
Figura 4 - Bactérias do iogurte natural
Fonte: Elizabeth Guimarães
PARTE E: Observação de um esfregaço de sangue periférico segundo a técnica de Leishman.
Nessa parte foi feita a coleta de uma gota de sangue de cada aluno ou feito o uso do sangue disponível no laboratório para a observação dos tipos de leucócitos. Cada aluno foi orientado a coletar uma gota de sangue e posteriormente depositar em lâmina para observação.
Material e métodos
 Foram usados os seguintes equipamentos: lâmina limpa e seca, lanceta especial esterilizados, lâminapara o esfregaço, algodão, álcool, corante de Leishman, papel de filtro, água destilada com conta-gotas, caixa para o descarte e pia para a lavagem das lâminas utilizadas, MOC e óleo de imersão.
Os alunos foram orientados da seguinte forma: Fazer assepsia digital na polpa do dedo com uma solução de álcool 70%. (Os alunos que não utilizaram o próprio sangue, utilizaram o disponível em laboratório). Com a lanceta, pique a polpa interna da falange do dedo mínimo, espere sangrar, coletar a gota e colocando-a na extremidade da lâmina, fazer bruscamente o procedimento do esfregaço. A lâmina deve ficar na pia, depois deve-se cobrir o esfregaço com o corante Leishman e aguardar por cinco minutos, passado os cinco minutos, deve-se gotejar a água destilada sem tirar o corante, com uso da pipeta , escorrer e lavar com água destilada, deixar o esfregaço secar ao ar ambiente e após a secagem da lâmina, proceder à etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x, observando-a no aumento de 1000x utilizando o óleo de imersão sem o uso da lamínula. Observe os glóbulos vermelhos, em maior número, e os glóbulos brancos, em roxo e em menor número. (Figura 5)
Figura 5 - Sangue 
Fonte: Elizabeth Guimarães
 
PARTE F: Observação de corte transversal do esôfago de uma rato (material preparado por técnicas diferentes de coloração). Técnicas de H&E e H + PAS.
Material e métodos
A lâmina já confeccionada foi cedida pela professora para a observação. Foram usados os seguintes métodos da etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x. Foi observado o esôfago. (Figura 6)
Figura 6 - Esôfago
Fonte: Elizabeth Guimarães
PARTE G: Observação de uma pequena fração de uma folha da Tradescantia palida ( Popularmente conhecida como trapoeraba-roxa ou coração-roxo).
Material e métodos
 Foram usados os seguintes equipamentos: microscópio de luz; copo com água, lâminas; lamínulas; papel filtro e pipeta.
A lâmina foi preparada sem corante e somente foi adicionado uma gota d’água. 
Foram usados os seguintes métodos da etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x.
Foram observados os estômatos, e com a ampliação do mesmo pode-se observar as células guarda e o núcleo. (Figura 7).
Figura 7 - Estômatos da Tradescantia palida
Fonte: Elizabeth Guimarães
AULA 2 - Observação das lâminas prontas Fígado de porco, coração, Língua de gato, Folha da Elódea. Preparação da lâmina de raiz de cebola para a observação do ciclo celular mitótico. 
Nessa etapa foram cedidos para os alunos lâminas prontas contendo fragmentos microscópios para a observação. Posteriormente feita a preparação da lâmina de raiz de cebola. 
PARTE A: Observação da lâmina de fígado de porco pronta, usando a técnica de H/E (Hematoxilina-Eosina). 
Material e métodos
Foram usados os seguintes equipamentos: microscópio de luz e óleo de imersão.
Foram usados os seguintes métodos da etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x (com óleo de imersão).
Foram observados os hepatócitos (células do fígado do porco) e os lóbulos hepáticos. (Figura 8). 
Figura 8 - Fígado de porco
Fonte: Elizabeth Guimarães
PARTE B: Observação da lâmina de coração pronta, usando a técnica de H/E (Hematoxilina-Eosina). 
Material e métodos
Foram usados os seguintes equipamentos: microscópio de luz e óleo de imersão.
Foram usados os seguintes métodos da etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x (com óleo de imersão).
Foi observado o músculo estriado cardíaco. (Figura 9). 
Figura 9 - Coração (não identificado) Técnica H/E
Fonte: Elizabeth Guimarães
PARTE C: Observação da lâmina de coração pronta, usando a técnica Masson. 
Material e métodos
Foram usados os seguintes equipamentos: microscópio de luz e óleo de imersão.
Foram usados os seguintes métodos da etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x (com óleo de imersão).
Com a técnica de Masson o músculo estriado cardíaco fica mais fácil de se observar. (Figura 10). 
Figura 10 - Coração (não identificado) Técnica Masson
Fonte: Elizabeth Guimarães
PARTE D: Observação da lâmina de lingua de gato pronta, usando a técnica Masson. 
Material e métodos
Foram usados os seguintes equipamentos: microscópio de luz.
Foram usados os seguintes métodos da etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x.
Foram observadas as papilas gustativas filiformes, valadas e fungiformes. (Figura 11). 
Figura 11 - Lingua de gato Técnica H/E
Fonte: Elizabeth Guimarães
PARTE E: Preparo e observação da lâmina da folha da Elódea. 
Material e métodos
Foram usados os seguintes equipamentos: microscópio de luz; copo com água, solução salina a 1,5%, lâminas; lamínulas; papel filtro e pipeta.
Foram usados os seguintes métodos da etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x. Foi usada a solução salina a 15% na segunda observação.
Pode-se observar o cloroplasto, o citoplasma e o núcleo. Com a solução hipertônica pode-se observar a plasmólise. (Figura 12). 
Figura 12 - Folha da Elódea
Fonte: Elizabeth Guimarães
PARTE F: Observação de hemácias em meios hipertônico, isotônico e hipotônico.
Material e métodos
Foram usados os seguintes equipamentos: microscópio de luz; lâminas e lamínulas, pipetas Pasteur, tubo de ensaio, seringa e agulhas decartáveis com solução de NaCl 2%, 0,9% e 0,4%.
Foram usados os seguintes métodos da etapa da focalização, utilizando as objetivas de 4x, 10x, 40x e 100x.
Foram registrados a concentração de cada solução utilizada em cada uma das lâminas, posteriormente pingado uma gota de sangue no centro da lâmina e sobre a gota de sangue foi pingado uma solução de NaCl 2% e depois coberto com uma lamínula. (Figura 13).
Foram observados as hemácias (Figura 14) em meio isotônico e hipertônico. 
Figura 13 - Hemácias em meio Isotônico e hipertônico
Fonte:http://carlamcnascimento.blogspot.com/2014/03/1-semestre-de-ef-aula-pratica.html
Figura 14 - Hemácias 
Fonte: Akemy
PARTE G: Preparo e observação da lâmina da raiz da cebola (Allum cepa), ela técnica de esmagamento de meristema apical para a observação do ciclo celular mitótico (interfase, prófase, metáfase, anáfase e telófase).
Material e métodos
Foram usados os seguintes equipamentos: microscópio de luz; cebola, béquer, papel-alumínio, pregador de madeira, água, orceína acética, pinça, pincel, gilete ou bisturi, vidro, placa de Petri, tubo de ensaio, bico de Bunsen, lâminas e lamínulas.
Foi cortada algumas pontas das raízes da cebola, a seguir as raízes foram mergulhadas num tubo de ensaio com 2 a 3 ml de orceína acética, posteriormente levada ao bico de Bunsen até ferver (2 a 3 minutos) (Figura 15). Após esse procedimento o material foi despejado numa placa de Petri, e com a pinça as raízes foram conduzidas as lâminas. Depois sobre cada raiz foi colocado uma gota de orceína acética fria e deixada em repouso durante 5 minutos. Após esse prazo foi colocado uma lamínula sobre o material e com cuidado foi feito o esmagamento da raiz.
Foram observadas as fases da mitose e da interfase. (Figura 16)
Figura 15 - Bico de Bunsen
Fonte: Mirelle 
Figura 16 - Raiz da cebola (metáfase e anáfase)
Fonte: Mirelle 
Resultados e Discussão
 
As observação realizadas no laboratório permitiu aos estudantes conhecer a células e suas estruturas. Permitiu-lhes aprender a preparar material biológico para observação, a manusear o microscópio que é peça fundamental para os estudos da biologia.
Conclusão
A aula prática permite aos alunos a observação cuidadosa e criteriosa dos materiais coletados e permite-os usar técnicas de observação que precisa ser consistente e coerente e que possa ser verificado em metodologias estudadas.
O presente estudo possibilitou-os aprender a preparar material biológico para a observação de suas estruturas microscópicas e também aprenderam a manusear o MOC, que é uma ferramenta fundamental. 
Diante disso, a prática de laboratório proporciona aos alunos a oportunidade de vivenciarna prática o que foi aprendido na teoria. 
REFERÊNCIAS
COLORAÇÕES ESPECIAIS: TRICRÔMICO DE MASSON. Disponível em: <https://patologiaveterinaria.paginas.ufsc.br/2020/04/>. Acesso em : 16/11/2021.
ESÔFAGO. Disponível em: <https://www.unifal-mg.edu.br/histologiainterativa/esofago/>. Acesso em:08/11/2021.
LÂMINA DE HEMÁCIAS EM HIPERTÔNICO, ISOTÔNICO E HIPERTÔNICO. Disponível em: <http://carlamcnascimento.blogspot.com/2014/03/1-semestre-de-ef-aula-pratica.html>. Acesso em : 16/11/2021.
PANORAMA HISTÓRICO DA TEORIA CELULAR. Disponível em:<file:///C:/Users/ELIZAB~1/AppData/Local/Temp/23734-Texto%20do%20artigo-79752-1-10-20161012-1.pdf>. Acesso em: 08/11/02021.
TEORIA CELULAR. Disponível em: <http://www.invivo.fiocruz.br/celula/teoria_03.htm>. Acesso em: 08/11/2021.