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PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO - POP PÁGINAS: 04 Código PPGPM-POP-IP&D 123 Data Emissão Data de Vigência Próxima Revisão Versão no 000 RESPONSÁVEIS: TÍTULO: VDRL NOTA: 2,0 SINONÍMIA O exame VDRL, significa Venereal Disease Researsh Laboratory (Laboratório de Pesquisas de Doenças Venéreas). Trata-se de um teste que serve para diagnosticar a sífilis, que é uma infecção sexualmente transmissível. Além disso, pode ser também utilizada para acompanhamento de pacientes já com o diagnóstico da IST. PRINCÍPIO Consiste em um teste de floculação que se trata de um tipo particular de aglutinação, não troponêmico, pois, pesquisa anticorpos não contra a bactéria Treponema pallidum em si, mas sim contra antígenos denominados cardiolipina, colesterol e lectina. A sensibilidade do teste é de 78% na fase primária, elevando-se nas fases secundária (100%) e latente (96%). Com mais de 1 ano de evolução, a sensibilidade cai progressivamente, fixando-se em média, em 70%. A especificidade desse teste é de 98%. SIGNIFICADO CLÍNICO: A sífilis é uma doença sexualmente transmissível cujo agente causal é a espiroqueta Treponema pallidum. As vias de transmissão da doença são: a) contato sexual, principal via; b) transfusão de sangue infectado, hoje praticamente eliminado através de triagem sorológica de rotina; c) transmissão pela placenta, da mãe para o feto, durante a gestação (sífilis congênita). O período de incubação varia de duas a quatro semanas. A lesão primária da sífilis é caracterizada pelo cancro duro, geralmente nos órgãos genitais, enquanto os gânglios linfáticos regionais ficam duros e indolentes. O período secundário manifesta-se de 6 a 8 semanas após a infecção e apresenta um exantema cutâneo generalizado (erupções cutâneas chamadas roséolas sifilíticas) e raramente pústulas e nódulos; alterações das mucosas (placas) na boca e na faringe. Sem tratamento, os exantemas continuam reincidentes durante 2 a 3 anos. Seguem anemia grave com linfocitose, esplenomegalia e hepatomegalia. Sem tratamento, cerca de um terço dos pacientes apresenta sífilis terciária entre o terceiro e o quinto ano, após a infecção, que pode manifestar-se como gomas na pele (15%), sífilis cardiovascular (10%) ou neuro sífilis (8 a 10%). Os testes sorológicos para sífilis são classificados como: a) não treponêmicos, usados mais comumente para triagem, como o VDRL (Venereal Disease Research Laboratory), RPR (Rapid Plasma Reagin); b) treponêmicos, usados como testes confirmatórios para os soros reativos nos testes de triagem, como o TPHA (Treponema pallidum Hemagglutination), FTA-Abs (Fluorescent Treponemal-Absortion) e ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). COLETA AMOSTRA O teste pode ser feito utilizando o soro, o plasma ou o liquido cefalorraquidiano Para o soro: Coletar amostra de sangue do paciente, em tubo sem anticoagulantes Deixar a amostra em temperatura ambiente até a retração do coágulo Centrifugar Para o plasma: Coletar o sangue do paciente, em tubo com anticoagulantes, como o EDTA Centrifugar Para o liquido cefalorraquidiano (LCR): Procedimento Médico Invasivo As amostras de LRC são previamente centrifugadas, mas não inativadas Obs.: Amostras hemolisadas ou lipêmicas não podem ser usadas para a realização do teste, pois podem resultar em floculação inespecífica. MATERIAL REQUERIDO ➢ Fornecido: • Conta gotas ➢ Não fornecido: • Tubos de ensaio, necessários para diluição e titulação; • Pipetas sorológicas; • Estante para tubos e rack de ponteiras; • Recipientes para descarte do material; • Placa escavada (tipo Kline); • Solução salina a 0,9%; • Agitador rotativo. EQUIPAMENTOS • Centrífuga; • Banho-maria; • Agitador tipo Kline ajustado a 180 rpm; • Microscópio com objetiva de 10 aumentos; • Lâminas ou placas de vidro transparente, com aproximadamente 14 mm de diâmetro ou placas com escavações circulares; • Tubos de ensaio; • Pipetas de 1 ml em centésimos e de 5mL em décimos; • Seringa tipo Luer, de 1ml ou 2ml. PROCEDIMENTO DETALHADO 1- Deixar a Suspensão Antigênica estabilizar à temperatura ambiente antes de utilizá-la. Homogeneizar bem. 2- Para evitar efeito pro-zona sugerimos que o teste qualitativo seja realizado com soro, plasma ou líquido cefalorraquidiano (LCR) puro e diluído a 1/8 com solução salina 0,9%. Teste Qualitativo: Objetivo: para triagem e eliminação de amostras não reagentes. 1. Pipetar 50 µL da amostra nas cavidades da placa escavada; 2. adicionar 20 µL da suspensão antigênica homogeneizada nas cavidades das amostras; Não é necessário misturar esses dois componentes. 3. Agitar a lâmina durante 4 minutos a 180 rpm; 4. Imediatamente após 4 minutos, observar ao microscópio. Leitura e interpretação de resultados: Reação negativa: Ausência de agregados (grumos). Suspensão de aspecto homogêneo. Reação fracamente positiva: Presença de pequenos agregados dispersos. Reação positiva: Presença de médios e grandes agregados. Teste Semi-Quantitativo: 1. Fazer diluição da amostra em solução salina 0,9% a 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64 e mais se necessário; 2. Pipetar 50 µL de cada diluição nas cavidades da placa escavada; 3. Adicionar 20 ųL da suspensão antigênica homogeneizada em cada cavidade contendo diluição; Não é necessário misturar esses dois componentes. 4. Agitar a lâmina durante 4 minutos a 180 rpm; 5. Imediatamente após 4 minutos, observar ao microscópio. Resultado do teste: O título da amostra será a maior diluição onde ainda se visualiza a presença de agregados. LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO • Ver substâncias Interferentes conhecidas em amostra • Resultados falsamente positivos podem ser observados em indivíduos com quadros patológicos diversos como: hepatite, gripe, brucelose, lepra, malária, asma, tuberculose, câncer, diabetes, doenças autoimunes, além de pacientes imunizados. Estes casos não são muitos comuns e geralmente apresentam reações com títulos baixos e um histórico clínico que não coincide com as características da sífilis. Por isso é imprescindível que frente a toda prova qualitativa reativa seja realizada a prova semiquantitativa. Resultados falsamente negativos podem ser observados quando se apresenta o fenômeno da pró-zona. Por este motivo é recomendável repetir a prova com soro diluído 1:5 em solução fisiológica, para conferir o resultado. Se nessa condição for observada floculação, a amostra é reativa. Apesar das vantagens desse método, seus resultados, como qualquer prova sorológica somente constitui um dado auxiliar no diagnóstico e deve ser comparado com o histórico clínico do paciente. CONTROLE DE QUALIDADE O laboratório clínico deve ter implementado um Programa de Garantia da Qualidade para assegurar que todos os procedimentos laboratoriais sejam realizados de acordo com os princípios das Boas Práticas de Laboratório Clínico (BPLC). Para controle e verificação do desempenho do kit testar amostras controle positivas e negativas. Controle Positivo (soro seguramente reativo) e um Controle Negativo (soro seguramente não reativo) utilizando-os da mesma forma que as amostras. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS: V.D.R.L. test. Suspensão antigênica estabilizada para realizar a prova VDRL modificada (USR) de detecção de sífilis. Wiener lab.2000.Rosario- Argentina. Disponível em: <http://www.wiener lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20portugues/vdrl_test_c_controles_po.pdf> Acesso em: 20 de março de 2021. SÍFILIS-VDRL. Kit para triagem na detecção de anticorpos da sífilis no soro, plasma ou líquen. GOLD ANALISA. Belo Horizonte MG Brasil. Edição: 08/12. Disponível em: <http://www.goldanalisa.com.br/arquivos/%7BEF7C06F8-47DE- 444B-8A0D-E5237990336A%7D_SIFILIS_VDRL.PDF> Acesso em: 20 de março de 2021. BRASIL. Ministério da Saúde. Manual de Procedimentos para Testes Laboratoriais. Brasília, 1992. Disponível em:< https://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/manual_procedimentos_testes_laboratoriais.pdf > Acesso em: 20 de março de 2021 TELESSAÚDE. Como interpretar os testes laboratoriais e prescrever o tratamento para sífilis?. Santa Catarina, 2016. Disponível em: < https://telessaude.ufsc.br/como-interpretar-os-testes-laboratoriais-e-prescrever-o-tratamento-para- sifilis/#:~:text=A%20sorologia%20n%C3%A3o%20trepon%C3%AAmica%20(VDRL,%25)%20e%20latente%20(96% 25).> Acesso em: 20 de março de 2021.
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