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1 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica Perfil metabólico COMPOSIÇÃO SANGUE COMPOSIÇÃO DO PLASMA • Solutos em plasma representam 10% do volume, compostos por: o Proteínas (albumina, globulinas, fibrinogênio) → 7% o Eletrólitos (Na, K, Cl) → 1% o Outras substâncias (ureia, aminoácidos, glicose, bilirrubina, creatinina, lipídios) → 2% ANTICOAGULANTES • Para análises bioquímicas no plasma → heparina (sódio) • Para gasometria no plasma → heparina (lítio) • Para análises bioquímicas em soro → sem anticoagulante • Para acelerar a formação de coágulo → gel sem anticoagulante • Para hemograma → EDTA • Para glicose e lactato → fluoreto • Para testes de hemostasia → citrato HEMÓLISE • Intravascular → condição clínica do paciente • Extravascular → principal erro de manejo na coleta de amostra • Causas: o Vácuo muito forte no tubo o Agulhas muito finas o Jato de sangue no fundo do recipiente o Tubo úmido, sujo ou contaminado o Agitação brusca da amostra o Choque térmico o Estresse do animal SORO X PLASMA • Soro o Sangue sem anticoagulante o Não contém fibrinogênio (2-4 g/L) → corresponde de 3 a 5% da proteína total (70-80 g/L) o Separação requer esperar a formação do coágulo (60 min); com gel 30 min • Plasma o Plasma: sangue com anticoagulante o Valor mais correto da proteína total o Maior rapidez de separação COLETA E CONSERVAÇÃO • Após coleta → enviar amostra ao laboratório em até uma hora • Análises bioquímicas: 8 analitos → 3-5 mL de plasma (7-10 mL de sangue) • Sistema vacutainer: encher o tubo na capacidade total para manter a proporção de anticoagulante 2 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica • Evitar exposição ao calor ou ao sol direto • Enquanto não chega ao laboratório: refrigerar (5°C) • No laboratório, separar imediatamente plasma/soro (2.500-3.000 rpm por 10-15 min) • Enquanto não analisa, congelar (-20°C) e guardar em tubos eppendorf COMPONENTES DO PERFIL METABÓLICO NITROGENADOS • Proteínas totais • Albumina • Globulinas • Fibrinogênio • Ureia • Creatinina • Bilirrubina GLICÍDICO • Glicose • Fructosamina • Hemoglobina • glicosilada • Lactato LIPÍDICO • Ácidos graxos livres • Triglicerídeos • Colesterol • Corpos cetônicos ENZIMAS • Aspartato aminotransferase • Alanina aminotransferase • Lactato desidrogenase • Fosfatase alcalina • Gama-glutamil transferase • Creatina quinase • Amilase • Lipase • Tripsina imunomediada NITROGENADOS ALBUMINA • Sintetizada no fígado • Peso molecular= 69 kDa • Funções o Transporte de ácidos graxos, minerais, hormônios esteroides, bilirrubina o Reserva de aminoácidos o Manutenção da pressão oncótica do plasma • Valores de albumina e globulinas em neonatos são menores que em adultos • Durante gestação e lactação valores de albumina são menores • Considerar valores de cálcio e de fructosamina com albumina • Falsa hipoalbuminemia: hiperbilirrubinemia, drogas que concorrem pelo verde de bromocresol (aspirina, anticonvulsivantes) AUMENTADA • Desidratação • Administração de fluidoterapia com soluções coloidais DIMINUÍDA • Por síntese diminuída o Insuficiência hepática (com mais de 70% do fígado afuncional) o Estados inflamatórios (proteína de fase aguda negativa) o Subnutrição (dieta baixa em proteína) o Deficiência de zinco 3 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica • Por perda excessiva o Síndrome nefrótico (glomerulonefrite) → com proteinúria o Gastroenteropatia (falha de absorção de nutrientes) o Má digestão por insuficiência pancreática → com perda de peso, diarreia e esteatorreia o Hemorragia GLOBULINAS • Obtidas por cálculo → proteína total – albumina Ou Determinadas por eletroforese (proteinograma) AUMENTO DE GLOBULINAS Α1 E Α2 • Processos inflamatórios agudos • Síndrome nefrótico (com proteinúria) • Vacinações recentes • Animais mais velhos • Tratamento com corticoides (fração alfa 2: aumento de haptoglobina) DIMINUIÇÃO DE GLOBULINAS Α2 • Hemólise intravascular (com baixo hematócrito) →formação de complexos hemoglobina-haptoglobina, causando diminuição de haptoglobina AUMENTO DE GLOBULINAS BETA • Anemia ferropriva → por aumento da transferrina AUMENTO DE GLOBULINAS GAMA • Processos inflamatórios crônicos • Gamapatia monoclonal: células neoplásicas de linfócitos B • Mieloma múltiplo • Leucemia linfocítica de células B DIMINUIÇÃO DE GLOBULINAS TOTAIS • Deficiência de zinco • Final da gestação (passagem de IgG para o colostro) • Imunodeficiência PROTEÍNA TOTAL • Proteína total (plasma) = albumina + globulinas + fibrinogênio • Proteína total (soro) = albumina + globulinas • Dosagem o Refratometria: Rápido, barato, resultados reproduzíveis. Falsos aumentos em amostras hemolisadas, ictéricas e lipêmicas o Espectrofotometria: Método de Biuret FIBRINOGÊNIO • Glicoproteína sintetizada no fígado • Participa da coagulação sanguínea (fator I): • Fibrinogênio ─ ─ (trombina) ─ → fibrina • Primeira proteína de fase aguda conhecida • Aumentos significativos em processos inflamatórios agudos ou crônicos • Diminuição em insuficiência hepática e deficiência de zinco UREIA • Originada no fígado (ciclo da ureia) a partir da amônia endógena proveniente do catabolismo de aminoácidos e da amônia exógena produzida no rúmen e no intestino • Uso no perfil o Avaliação do volume circulante 4 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica o Função renal o Nível de proteína na dieta o Função hepática AUMENTO DE UREIA • Azotemia pré-renal o Falha circulatória o Hipotensão o Desidratação o Aumento do catabolismo proteico o Excesso de proteína na dieta o Falta de energia na dieta (ruminantes) o Uso de ureia como suplemento • Azotemia renal o Distúrbio renal (menos sensível em ruminantes) • Azotemia pós-renal o Obstrução do trato urinário DIMINUIÇÃO DE UREIA • Insuficiência hepática (com aumento de amônia) → sinais de encefalopatia hepática • Sobreidratação • Dieta com baixa proteína • Período anterior ao parto (vacas) → baixa consumo de alimento Em ruminantes, menos energia na dieta – mais NH3 absorvido no rumen – mais ureia no sangue. Também em casos de deficiência de ptn na dieta – catabolismo de aa – aumento de ureia. Analisar ureia junto com balanço energia/proteína da dieta. CREATININA • Creatinina origina-se da creatina, a qual é sintetizada no fígado e no rim, a partir de aminoácidos: • A creatina vai ao tecido muscular para atuar como reserva energética (síntese de fosfocreatina) • Em torno de 2% da creatina muscular é catabolizada diariamente a creatinina • Valor de creatinina é afetado pela massa muscular mas não pela alimentação • Creatinina aumenta com maior massa muscular • Melhor indicador que ureia principalmente em ruminantes. CREATININA AUMENTADA • Pré-renal o Falha circulatória o Desidratação o Atividade muscular intensa • Renal o Insuficiência renal (melhor indicador que ureia em ruminantes) • Pós-renal o Obstrução do trato urinário 5 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica CREATININA DIMINUÍDA • Menor valor clínico • Falha hepática • Desnutrição • Sobreidratação • Caquexia • Perda de massa muscular • Doença muscular degenerativa BILIRRUBINA Determinação • Técnica colorimétrica de Sims-Horn (kit) Bilirrubina direta (solúvel) reage diretamente com diazo (ácido sulfanílico e nitrito de sódio) • Bilirrubina total (direta + indireta) reage depois de tratamento com “acelerador” (cafeína, benzoato de sódio, acetatode sódio e surfactante) • Bilirrubina indireta obtida por diferença → Total – Direta ❖ Bilirrubina direta = conjugada (solúvel) ❖ Bilirrubina indireta = livre (ligada a albumina) AUMENTO DE BILIRRUBINA GLICÍDICO GLICOSE • Considerar falsa hipoglicemia por manejo das amostras: glicose diminui 10% por cada hora a temperatura ambiente: usar fluoreto de sódio • Medição com glicosímetros → boa correlação com medição química (método enzimático-colorimétrico) HIPOGLICEMIA • Déficit de energia o Cetose dos bovinos o Toxemia da gestação (pequenos ruminantes) o Desnutrição severa o Jejum prolongado • Perdas de glicose o Falha tubular renal o Síndrome de má absorção o Verminoses severas • Falha na glicogenólise o Transtornos do glicogênio (falhas de enzimas da glicogenólise) • Falhas na gliconeogênese o Doença hepática o Insuficiência hepática o Intoxicação hepática o Hipoadrenocorticismo (falta de cortisol) 6 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica • Aumento de utilização periférica de glicose o Endotoxemia o Leucocitose o Policitemia • Excesso de captação periférica de glicose o Insulinoma o Terapia insulínica inadequada HIPERGLICEMIA • Hiperglicemia fisiológica (transitória) o Pós-prandial (2-4 h monogástricos) o Induzida por catecolaminas: estresse, medo, cansaço, dor o Induzida por glicocorticoides: estresse crônico • Hiperglicemia farmacológica (transitória) o Glicocorticoides (corticosteroides sintéticos) o Catecolaminas (adrenalina) o Sedativos (xilazina, ketamina) o Fluidoterapia (dextrose) • Hiperglicemia endocrinológica (permanente) o Diabetes mellitus (falta de insulina) o Hiperadrenocorticismo (excesso de cortisol) o Hipertireoidismo (excesso de tiroxina) o Acromegalia (excesso de GH) PROTEÍNAS GLICOSILADAS – FRUCTOSAMINA • Proteínas plasmáticas glicosiladas (basicamente albumina) • Reação reversível não enzimática de moléculas de glicose com grupos aminas de lisina das proteínas, formando complexos de aldimina (base de Schiff) que se convertem em composto estável de cetoamina • Valor corresponde à concentração de glicose durante o período da meia-vida da proteína → albumina ≈ 20 dias • Variação de fructosamina acompanha variação permanente de glicemia DIMINUIÇÃO • Hipoalbuminemia • Hipertireoidismo AUMENTO • Diabetes mellitus • Hiperadrenocorticismo • Hipotireoidismo (menor turnover de proteínas) HEMOGLOBINA GLICOSADA • Corresponde à fração glicosilada da hemoglobina, principalmente da fração HbA1 (HbA1c) • Valor é diretamente proporcional à concentração de glicose sanguínea • Valor de HbA1c revela valores conforme o período de meia-vida das hemácias • Cães: meia-vida de 60 dias → HbA1c revela glicemia dos últimos dois meses antes da coleta • Gatos: meia-vida de 70 dias • Método de análise: cromatografia + espectrofotometria → mais oneroso que da fructosamina • HbA1c diminuída em anemias • Não se utiliza tanto na Veterinária LACTATO AUMENTO DE LACTATO • Estados hipóxicos o Anemia severa o Hipóxia tissular o Insuficiência pulmonar o Insuficiência cardíaca • Deficiência de tiamina (coenzima da reação piruvato → acetil-CoA) 7 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica • Acidose láctica ruminal (consumo excessivo de concentrados) • Excessivo exercício físico • Armazenamento inadequado da amostra (usar fluoreto de sódio) LIPÍDICO TRIGLICERÍDEOS AUMENTO • Alimentação rica em gordura • Diabetes mellitus → deficiência da atividade da enzima lipase lipoproteica (insulino- dependiente) DIMINUIÇÃO • Lipidose hepática → falha na síntese de lipoproteínas • Subnutrição COLESTEROL • Origem exógena → alimentação • Origem endógena → sintetizado a partir de acetilCoA em fígado, gônadas, intestino, glândula adrenal e pele • Circula no plasma unido a lipoproteínas (HDL e LDL) • Precursor de ácidos biliares, hormônios esteroides • Constituinte de membranas biológicas • Coletas para medir colesterol devem ser em jejum de 12 horas AUMENTO DE COLESTEROL • Hipotireoidismo • Obstrução biliar • Diabetes mellitus • Pancreatite • Alimentação com dietas ricas em glicídios e gordura • Nível é maior em animais mais velhos • Durante a gestação (aumento da síntese de hormônios sexuais) • Durante a lactação (aumento da síntese de lipoproteínas) DIMINUIÇÃO DE COLESTEROL • Lesão hepatocelular • Insuficiência hepática • Hipertireoidismo • Alimentação pobre em energia • Doenças genéticas relacionadas com síntese diminuída de apolipoproteínas do plasma • Lipidose hepática → falha na síntese de • lipoproteínas • Durante o período ao redor do parto • Início da lactação CORPOS CETÔNICOS • Produto do metabolismo dos ácidos graxos • BHB provém do butirato ruminal (condições normais) • Aumentam em situações de deficiência de energia • Cetose / acetonemia → condição caracterizada por aumento anormal na concentração de corpos cetônicos em fluidos corporais 8 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica AUMENTO DE CC • Diabetes mellitus (associado a hiperglicemia) • Cetose da vaca leiteira (associado a hipoglicemia) • Toxemia da gestação (associado a hipoglicemia) • Balanço energético negativo • Subnutrição • Jejum ENZIMAS • No plasma são encontradas enzimas com função intracelular que saem na circulação após morte celular. • Atividade no plasma é baixa em condições normais • Danos celulares/proliferação nos tecidos levam a aumentos significativos das enzimas no plasma. Medição • Espectrofotometria por métodos cinéticos • Unidade de atividade: U/L → Quantidade de enzima que catalisa a conversão de 1 mmol de substrato por minuto Katal → Quantidade de enzima que catalisa a conversão de 1 mol de substrato por segundo • Controle rigoroso de pH e temperatura • Compostos mais lábeis do perfil • Cofatores minerais: não usar quelantes na coleta ALT – ALANINA AMINOTRANSFERASE • GPT (glutamato piruvato transaminase) • Enzima citoplasmática de hepatócitos e miócitos • Mais usada em pequenos animais como indicador de lesão hepática • Induzida por drogas (paracetamol, barbitúricos, glicocorticoides, cetoconazol, mebendazol, fenobarbital, fenilbutazona) AUMENTO DE ALT • Necrose hepatocelular • Obstrução biliar • Lipidose hepática • Necrose muscular • Trauma muscular • Hemólise AST – ASPARTATO AMINOTRANSFERASE • TGO (glutamato oxalacetato transaminase) • Enzima citoplasmática e mitocondrial de hepatócitos e miócitos. • Abundante em eritrócitos • Mais usada em grandes animais como indicador de lesão hepática e muscular AUMENTO DE AST • Necrose hepatocelular • Lipidose hepática • Necrose muscular • Deficiência de selênio e/ou vitamina E • Exercício físico intenso • Hemólise (in vivo ou in vitro) • Intoxicação por cobre (ovinos) LDH – LACTATO DESIDROGENASE • Enzima citoplasmática. Abundante nos eritrócitos • Pouco específica • Isoenzimas (análise específica) • Coração • Fígado 9 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica • Músculo • Indicador de desempenho esportivo (equinos) AUMENTO DE LDH • Dano hepatocelular • Dano muscular • Infarto do miocárdio • Deficiência de selênio e/ou vitamina E • Hemólise GGT (GAMA-GLUTAMIL TRANSFERASE) • Encontra-se associada a membranas: epitélios dos dutos biliares, renais, mamários • Somente GGT hepática aparece no plasma • GGT renal é excretada na urina • GGT mamária aparece no leite • Em gatos pode ser utilizada no lugar da FA com maior sensibilidade e especificidade • Em caninos, induzida com corticoides• Valores em filhotes caninos pode alcançar até 25 vezes valor para adultos • Ligada a membranas de: o Hepatócitos o Células epiteliais biliares o Células epiteliais dos túbulos renais o Células epiteliais mamárias • GGT urinária indicativa de dano renal • GGT em plasma de terneiros → indica consumo de colostro AUMENTO DE GGT • Colestase • Hiperplasia biliar (proliferação de dutos biliares) • Drogas que induzem sua secreção: corticosteroides FA – FOSFATASE ALCALINA • Ligada a membranas em: fígado, osso, intestino, rim, placenta • Isoenzimas: hepática, óssea, induzida por corticosteroides • Valores maiores em animais jovens (crescimento ósseo) e gestantes (isoenzima placentária) • Indicador de pasteurização inadequada (inativa-se no processo) AUMENTO DE FA • Colestase • Patologias ósseas (osteomalácia, hiperparatireoidismo, fraturas) • Hiperadrenocorticismo • Estresse crônico • Tratamento com corticoides GDH – GLUTAMATO DESIDROGENASE • Enzima mitocondrial • Presente no fígado e no rim • Considerada hepato-específica • Indicadora de necrose hepática e obstrução • biliar • Kit comercial de difícil disponibilidade e alto custo 10 Rúbia Rogovski Medicina Veterinária UFRGS I Bioquímica Clínica CK – CREATINA QUINASE • Principal atividade → tecido muscular (esquelético e cardíaco) • Em menor quantidade: rim, cérebro, trato gastrointestinal, útero e bexiga • Indicador de lesão muscular AUMENTO DE CK • • Isquemia muscular por decúbito prolongado • Necrose muscular • Convulsões, tremores • Traumas, excesso de exercício • Cirurgias, injeções intramusculares • Miopatias nutricionais (deficiência de vitamina E e selênio) • Leptospirose (caninos) • Transporte de caminhão (bovinos) • Infarto cardíaco • Em problemas musculares, medir CK e AST ENZIMAS PANCREÁTICAS LIPASE • Pancreatite aguda • Falha renal • Doenças hepáticas • Indução por glicocorticoides • Obstrução intestinal • Insuficiência renal AMILASE • Pancreatite aguda • Lesões intestinais (obstrução, úlceras) • Obstrução urinária • Hiperadrenocorticismo • Obstrução da glândula salivar • Insuficiência renal TRIPSINA IMUNORREATIVA (TLI) • Pancreatite aguda
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