Principais métodos de coloração

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Principais métodos de coloração
 A coloração de Gram, descoberta há pouco mais de 100 anos
por Hans Christian Joaquim Gram é utilizada com muita
frequência para o exame microscópico direto de amostras e
subcultivos, para demonstrar as propriedades tintoriais de
todos os tipos de bactérias. As bactérias coradas por esta
técnica pertencem a duas categorias distintas: Gram positivas e
Gram negativas. A parede celular que diferencia uma da outra;
 O peptidioglicano é mais expeço nas Gram positivas, enquanto
as Gram negativas tem uma membrana extra externo formada
por lipopolissacarídeo, fazendo com que tenha mais resistência;
Métodos de coloração
Método de Gram - gram positivo e gram negativo
Método de Ziehl-Neelson - álcool-ácido resistentes
Método de gram
Realizar o esfregaço;
Secagem;
Fixação na chama do bico de bulsen - fixação adição do
material biológico, que irá fixar com calor;
Colorar a lâmina com cristal violeta e esperar por 1 minuto
(Todas as bactérias vão corar, principalmente as Gram
positivas pois a peptidioglicano já está exposto, então
absorvem melhor o cristal violeta);
Lavar a lâmina com água;
Fixação com lugol (mordente) iodo se liga ao cristal violeta;
Lavar com água;
Lavar com álcool, isso é para as Gram negativas remover o
corante (chamada LPS) tirando o cristal violeta;
Lavar com água;
A técnica consiste em:
 Esta técnica é utilizada para corar os bacilos álcool-ácido
resistentes (BAAR). Estes bacilos são assim denominados porque
possuem um envoltório céreo que é resistente a coloração. Para
o corante penetrar na célula é necessário calor ou detergente.
Uma vez coradas, as bactérias álcool-ácido resistentes resistem
à descoloração, enquanto outras bactérias descoram com o
álcool-ácido.
Coloração com Fucsina, colorar as Gram negativas por 30
segundos;
Lavar com água;
Deixar secar ao ar livre;
Levar para ser observada no microscópio na objetiva de 100x
com óleo de imersão;
Método de Ziel-Neelson
Esfregaço adiciona fucsina, leva ao calor (chama) por 5
minutos e depois lavar;
Descoloração álcool-ácido a 3% as bactérias resistentes a
álcool-ácido não irá perder a sua coloração e as não
resistentes irá perder a coloração;
Contra-corante - azul de metileno a 1% por 30 segundos, as
bactérias álcool-ácido resistentes irão permanecer coradas
de fucsina e as não resistentes irão corar de azul;
A técnica consiste em: