478 a 501 - Reproduçao Animal - Hafez & Hafez

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478 GLOSSÁRIO
Ocular.1)Relacionadoaoolho.2)A peçadeummicroscópio.
Oócito.Célulano ovárioderivadadeumoogônioque,após
a meiose,produzumóvulo;umovoprimitivono ovário.
Opsonização.Processopeloqualaspartículassãoengloba-
dascomanticorposoucomplementosparaaumentaraafini-
dadede fagócitosqueapresentamreceptoresde anticorpos
ou complementosparaapartícula.
Orquite. Inflamaçãodos testículos.Tambémchamadade
testistite.
Ovariectomia.Remoçãodosovários.
Ovelha.Fêmeaadultado carneiro.
Oviduto. Tubo atravésdosqual o óvulo é transportadoao
úteroeondenormalmenteocorrea fertilização.
Ovulatória, onda. Liberaçãoabundantede GnRH e de
gonadotrofinaem respostaà retroalimentaçãopositivade
estradiolparainduzira ovulação.
Paracelular,transporte.Movimento transepitelialde flui-
dosesolutosatravésdosespaçosintercelulares.
Parácrino.Produzidopor umacélulaatuandosobrecélulas
adjacentesparamodificaroumodularo desenvolvimentode
proliferação.
Parto.Processofisiológicopeloqualo úteroprenheexpulsao
fetoe aplacentadoorganismomaterno(trabalhodeparto).
Pedigree.Umaárvorefamiliardesenhadacomsímbolosgené-
ticospadrões,mostrandomodelosdeherançaparacaracteres
fenotípicosespecíficos.Uma representaçãodosancestraisde
umindivíduooudeumafamília;umaárvoregenealógica.
Pineal, glândula.Glândulaendócrinalocalizadana basedo
cérebroequesecretao hormôniomelatonina.
Piometra.Acúmulo de pusdentroda luz uterinaassociado
cominfecção.
Pirexia.Elevaçãodatemperaturacorporalacimadonormal.
Tambémchamadadefebre.
Placenta.Aposiçãooufusãodasmembranasfetaisaoendo-
métrioparapermitirtrocasfisiológicasentreo fetoe amãe.
É resultantedeváriosgrausde interaçõesfeto-maternase é
ligadaao embriãoporumcordãodevasossangüíneos.
Placentoma.Em ruminantes,o cotilédonefetal fusiona-se
comascarúnculas,quesãoprojeçõesespecializadasdamuco-
sauterina,paraformarplacentomasouunidadesfuncionais.
Plasmalema.Membranacelular.
Plasmática,célula.Uma célulaB ativadaquesintetizagran-
desquantidadesdeanticorpos.
Poliespermia.Imediatamenteapósafertilização,asuperfície
do ovo (zonapelúcida)modifica-separaimpedira fusãode
espermatozóidesadicionais.Quando essemecanismofalha,
um ou mais espermatozóidesentram no ovo formando
embriõespoliplóides.
Poliéstricos estacionais.Animais que começamo ciclo
estralduranteestaçõesespecíficasdereprodução.
Porcentagemdenascimentode cordeiros.Númerodecor-
deirosnascidosde 100ovelhasexpostasao acasalamento.
Pré-parto.Antes do parto/trabalhodeparto.
Primípara.Animal prenhepelaprimeiravez.
Primordial. 1)Relativoaogrupoembrionáriodecélulasque
sedesenvolveemumórgãoou estrutura.2) Formadoduran-
te o estágioinicial dedesenvolvimento.
Progesterona.1) Principal esteróideovariano produzido
pelocorpolúteo,secretadopelofolículoà épocadaondade
gonadotrofina.2) Esteróidesexual secretadopelo tecido
luteínicoe pelaplacenta.Age comoo "hormôniodagesta-
ção"esuprimeaatividadedo miométriodurantea gestação.
Prostaglandina.1) Substânciaquímicaproduzidapeloorga-
nismoe queprovocacontraçõesdamusculaturauterina.2)
Grupo de ácidosgraxoshidróxi não-saturadosde vinte car-
bonoscomum anel ciclopentano.Mais intimamenteasso-
ciadascom,areproduçãoestãoaPGFza,quedesempenhaum
papelna luteólisee no parto,e aprostaglandinaEz.
Protamina.Qualquerumadeumgrupodeproteínassimples,
altamentebásicas,ricasemargininaesolúveisemágua;elas
neutralizama açãoanticoagulantedaheparina.
Pseudogestação.Falsagestaçãodevidaaoprolongamentoda
açãoluteínica(persistênciado corpolúteo,diestroprolonga-
do). Persistênciado corpolúteoalémdesuavidaútil cíclica
(égua)ouassociadacomacúmulodefluidosno útero(cabra).
Puberdade.1) Modificaçõesfísicase bioquímicas,associadas
com a ativaçãodo eixo hipotálamo-hipófise-gonadal,que
levamà funçãoreprodutivado adulto.2) A idadeemqueos
órgãosreprodutivostornam-sefuncionalmenteativos.
Puerpério. Período pós-parto,definido como o espaçode
tempoentreo partoe a voltado organismomaternoaoseu
estadonormaldenão-gestante.
Purulento. Contendo,expurgandoou produzindopus.
Quimera. Indivíduo com populaçõescelularesde maisde
umgenótipo,produzidopordoisou maiszigotos.
Reabsorção.Absorção de restosteciduaisou fluidospelo
organismo.
Receptor. Proteína presentena membranacelular que se
liga a um hormônio cognatoe controla seuefeitosobrea
morfologiacelulare/ouatividade.
Receptor de célula T. Molécula presentena superfíciede
célulasT que se liga especificamentea um determinado
antígenoquandoesteestálocalizadocomum complexode
histocompatibilidademaior de proteínaspresenteem uma
célulaqueapresentaantígeno.O receptordecélulaT, queé
umaproteínadiméricaformadapor umasubunidadea e ~,
ou uma subunidade y e °, confereespecificidadedirecionada
àscélulasT, assim,elasreconhecemapenasum ou poucos
antígenos.Sob condiçõesapropriadasa ligaçãodo receptor
decélulasT aoseuantígenolevaà ativaçãodacélulaT.
Recessivo.Alelo expressosomenteemcondiçãodehomo-
zigoto.
Retroalimentação,alça.Mecanismodecomunicaçãoentre
osováriose o eixohipotálamo-hipófise.
Retroalimentaçãonegativa,alça. Processopelo qual um
hormôniosecretadopor um órgão-alvo(p. ex.: o ovário)
emitesinal ao eixo hipófise-hipotálamoparasecretarhor-
môniosestimulantes(p. ex.:LH e FSH) paraseremreajus-
tadosaoestadoprimitivo.
Sangramento,metaestro.Presençadesangueno corrimen-
to vulvarde48 a 72horasapóso cio. É devidoa hemorra-
giaspetequiaisno endométrio.É apenasumaindicaçãode
quea vacaesteveemcio enão temqualquerrelaçãocoma
concepção.
Seminíferos,túbulos.T úbulosenroladospresentesnos tes-
tículosequecontêmcélulasqueproduzemespermatozóides.
Sephadex.Nome comercialdepartículasdegelcompostas
dedextranasligadasemcruzamento;usadascomopeneiras
molecularesnafiltraçãodegeleparapesquisaemtranspor-
tedeovos.
Sinapse.Pareamentoíntimodecromossomoshomólogosna
meiose.
Somáticas,células.Qualquercélulanão-germinativaque
compõeo corpodeumorganismo.
Taxa de nascimentode cordeiros(fecundidade).Número
decordeirosnascidosdeovelhasparidas.
Teca. Bainhade revestimento,tal comoaquelaquecobre
umtendãoou umfolículoovarianovesicular.
Tendão.Faixade tecidofibrosoclaroe resistenteque liga
ummúsculoa um osso.As fibrasmuscularessefundemna
extremidadedeumtendão,enquantoaoutraextremidadeé
ligadaa umosso.
Testículo. Uma de duasglândulasem formade ovo, que
produzespermatozóides,normalmentesituadano escroto.
Testosterona.Hormônio esteróideproduzidopor células
dos testículos,independentesdas células que produzem
espermatozóides.Um estrógenocirculanteprimário.
Tiroxina. Hormônioativoquecontémiodo,produzidonor-
malmentenaglândulatireóide,queauxilianaregulaçãodo
metabolismo;produzidasinteticamenteouextraídadaglân-
dulatireóideemformacristalinaparao tratamentodedis-
túrbios tireoidianos,como hipotireoidismo,cretinismoe
mixedema.Tambémchamadadetetraiodotironina.
Toracolombar.Relaciona-seàsregiõestorácicae lombarda
espinha.
Transuterina, migração. Migração de embriõesde um
cornouterinoparao outro,poiso espaçouterinoé comum
emsuínosfacilitandoa distribuiçãoigualnosdoiscornos.
GLOSSÁRIO 479
Trofoblasto. No início do desenvolvimento,é a camada
externado blastocisto,quedáorigemàsmembranasextra-
embrionárias.No desenvolvimentoposterior,o termorefe-
re-seàscélulasepiteliaisdocórion.
Túnica. Camadaderevestimentodetecido.
Ultra-sonografiatransretal.Examedeultra-somatravésdo
reto.
Vesicular. 1) De, ou relacionadoa, vesículas.2) Quecon-
témvesículas.
Viviparidade.Nascimentodedescendentesvivos,emcom-
paraçãocomovoviviparidade(posturadeovos).
GLOSSÁRIO DEABREVIAÇÕES COMUNS
ACTH
ADH
AFP
AlDS
AMH
AMP
AMPc
ARC
ATP
BBB
BBT
bFGF
BP
BSA
CDP
ClC
CL
CRH
CSF
D&C
D&E
DES
DHEA
DHT
DMB
DMSO
DNA
DNAc
EF
EGF
ELISA
Hormônioadenocorticotrófico
Hormônioantidiurético
a-proteínafetal
Síndromeda imunodeficiênciaadquirida
(HIV)
Hormônio antimülleriano
Monofosfatodeadenosina
AMP cíclico
ComplexorelacionadoàAidsTrifosfatodeadenosina
Barreiracérebro-sangüínea
Temperaturabasaldo corpo
Fatordecrescimentodefibroblastobásico
Pressãosangüínea
Albumina séricabovina
5'-fosfatodecitidina
Imunocomplexoscirculantes
Corpo lúteo(singular)
Hormônio liberadordecorticotrofinas
Fatorestimulantedecolônias
Dilataçãoe curetagemdoútero
Dilataçãoe evacuaçãodo útero
Dietilestilbestrol
Diidroepiandrosterona
Diidrotestosterona
Diazobenziloximetil
Dimetil sulfóxido(MelSO)
Ácido desoxirribonucléico
DNA complementaraoRNA
Fatordealongamento
Fatordecrescimentoepidérmico
Ensaioimunoabsorventeligadoa enzimas
480 GLOSSÁRIO
FCF
FCS
FGF
FIV
FRP
FSH
FSH-RH
GnRH
GHRH
GLC
GM-CSF
GTT
hCB
hCG
hMG
hMT
HPLC
HSV
IA
ICM
IF
IFN
IFN-g
Ig
IGFS
IL-l
IL-6
1M
IRM
IUGR
IUGR-LBW
IV
kDa
LBW
LH
LH-RH
LH-RF
LI
LPS
Freqüênciacardíacafetal
Sorofetalbovino
Fatordecrescimentodefibroblastos
Fertilizaçãoin vitro
Proteínaderegulaçãofolicular
Hormôniofolículoestimulante
Hormônio liberadordohormôniofolículo
estimulante
Hormônio liberadordegonadotrofinas
Hormônioliberadordohormôniodocres-
cimento
Cromatografiadegáslíquido
Fatorestimulantedecolôniasdegranuló-
citos-macrófagos
Testedetolerânciaàglicose
Sanguedo cordãoumbilicalhumano
Gonadotrofinacoriônicahumana
Gonadotrofinadamenopausahumana
Tumormamáriohumano
Cromatografialíquidadealtapressão
Vírus herpessimples
Inseminaçãoartificial
Massacelularinternadeblastocistos
Técnicasde imunofluorescência
Interferon
Interferon-g
Imunoglobulina
Fatorsérico decrescimentosemelhanteà
insulina
Interleucina-l
Interleucina-6
Intramuscular
Imagemderessonânciamagnética
Retardamentodocrescimentointra-uterino
Baixopesoaonascerpor retardamentodo
crescimentointra-uterino
Intravenoso
Quilodálton
Baixopesoaonascer
Hormônio luteinizante
Hormônio liberadordohormônioluteini-
zante
Fator de liberaçãodo hormônio luteini-
zante
Inibidor luteinizante
Lipopolissacarídeos
MI
MIS
MT
NA
NGF
NK
PAF
PAGE
PBL
PBS
PDGF
PG
PGEz
PGFz
PIF
PMSG
PVS
RNA
RNAr
RRA
SMC
STH
TBG
TC
TDF
TGF
TGF-a
TGF-b
TNF
VIP
Macrófagos
SubstânCiainibidoramülleriana
Mitocôndria
Anticorpo neutralizador
Fatordecrescimentonervoso
Célula matadoranatural
Fatordeativaçãodeplaquetas
Eletroforesedegelpoliacrilamida
Linfócitosdo sangueperiférico
Soluçãosalinatampãofosfatada
Fatorde crescimentoderivadodeplaque-
tas
Prostaglandinas
ProstaglandinaEz
ProstaglandinaFz
Fator inibidordeprolactina
Gonadotrofinaséricadeéguaprenhe
Espaçoperivitelino
Ácido ribonucléico
RNA ribossômico
Ensaioderadiorreceptor
Somatomedina-c
Hormônio somatotrófico
Globulina carreadorade tiroxina
Tomografiacomputadorizada
Fatordedeterminaçãotesticular
Fatordecrescimentotransformador
Fator-adecrescimentotransformador
Fator-bdecrescimentotransformador
Fatordenecrosetumoral
Peptídeointestinalvasoativo
UNIDADES DEMEDIDA
mg
}J.g
ng
pg
UI
Miligrama(10-3g)
Micrograma(10-6g)
Nanograma(10-9g)
Picograma(10-1Zg)
UnidadeInternacional
KPEND1cEs - .I
ApÊNDICE I
NúmerodeCromossomosdasEspéciesBovinae,Equinaee Caprinae
NOME COMUM
NÚMERO
FUNDAMENTALNOME CIENTÍFICO
NÚMERO DE
CROMOSSOMO (2N)
Bovino doméstico
Bantengo(bovinoselvagemdeJava,Bornéu)
Zebu
Iaque(bovídeoselvagemdaÁsia Central)
Bisãoeuropeu
Bisãoamericano
Gaur,bisãoindiano
Niala
Búfalodo Congo
Búfaloafricano
Búfaloasiático
Anoa
N ilgai
Antílope dequatrocornos
Sitatunga
Bostaurus
Bosbameng
Bosindicus
Bosgrunniens
Bisonbonasus
Bisonbison
Bosgaurus
Tragelaphusangasi
Synceruscaffernanus
Synceruscaffercaffer
Bubalusbubalis
Anoadepressicornis
Boselaphustragocamelus
Tetracerusquadricornis
Tragelaphusspekei
60
60
60
60
60
60
58
55
54
52
48
48
46
38
30
62
62
62
62
62
62
62
58
60
60
58
60
60
38
58
Cavaloselvagemda Mongólia
Eqüinodoméstico
Jumento
Jumentoafricano
JumentoselvagemdaMongólia
Jumentoselvagemdo Tibet
JumentoselvagemdaPérsia
ZebradeGrevy
Zebraafricana
ZebradeGrant
Zebradasmontanhas
Equusprzewalskii
Equuscaballus
Equusasinus
Equusasinusafricans
Equushemionus
Equuskiang
Equusonager
Equusgrevyi
Equusburchelli
Equusburchelliboehmi
Equuszebra
66
64
62
62
56
56
56
46
44
44
34(?)
94
94
104
104
104
104
104
78
82
82
60
Caprinodoméstico
Ibex
Marcar
Antílope de Saiga
Aoudad
Carneirodo Afeganistão
Ovino Kara-Tau
Ovino doméstico
Muflon, carneiroselvagem
Carneiroocidental
Carneirocanadense
CarneirodeLaristan
Carneiro almiscarado
Tahr do Himalaia
CabradasMontanhasRochosas
Caprahircus
Capraibex
Caprafalconeri
Saigatatarica
Ammotraguslervia
Ovis ammoncycloceros
Ovis ammonnigimontana
Ovis aries
Ovis musimon
Ovis orientalis
Ovis canadensis
Ovis ammonlaristanica
Ovibosmoschatus
Hemitragusjemlahias
Oreamnosamericanus
60
60
60
60
58
58
56
54
54
54
54
54
48
48
42
60
60
60
60
60
60
60
60
60
60(?)
60
60
60
60
60
481
ApÊNDICEII
NúmerodeCromossomose HabilidadeReprodutivaemHíbridosdeEqüinos,
Bovinose Caprinos
Pai
ESPÉCIE E NÚMERO DE CROMOSSOMOS(2N)
Mãe
HÍBRIDOS,
NÚMERO DE
CROMOSSOMOS(2n) HABILIDADE REPRODUTIVA
Cavalo selvagemdaMongólia,
66 (E. przewalskii)
Jumento,
62 (E. asinus)
Eqüinodoméstico,
64 (E. caballus)
Jumentoafricano,
62 (E. asinusafricanus)
JumentoselvagemdaMongólia,
56 (E. hemionus)
ZebradeGrevy,
46 (E. grevyi)
Zebraafricana,
44 (E. burchelli)
Jumento,
62 (E. asinus)
Eqüinodoméstico,64
(E. caballus)
Eqüino doméstico,64
(E. caballus)
Jumento,62
(E. asinus)
65
63
(Mulaouburro)
63
(Bardoto)
Fertilidade(?)
Estéril
Machosestéreis,fêmeasférteis
sóemcondiçõesmuito
excepcionais
Fértil
Fértil (?)
Estéril
Estéril
Estéril
Bisãoamericano,
60 (Bisonbison)
Bisãoamericano,
60 (Bisonbison)
Bovino doméstico,
60 (Bostaurus)
Jumento,62
(E. asinus)
Jumento,62
(E. asinus)
Eqüino doméstico,64
(E. caballus)
Jumento,62
(E. asinus)
Zebradasmontanhas,34(?)
(E.zebra)
62
59
55
(Zebróide)
53
(Zebronkey)
48
Fêmeasférteis
MachosFI estéreis
MachosFI estéreis
Caprinodoméstico,
60 (Caprahircus)
Caprinodoméstico,
60 (Caprahircus)
Ovino doméstico,
54 (Ovisaries)
Carneirocanadense,
54 (Oviscanadensis)
Zebu,60
(Bosindicus)
Bovinodoméstico,60
(Bostaurus)
Bisãoamericano,60
(Bisonbison)
60
60
(Catalo)
60
(Catalo)
Fetosa termo,mashíbridosnão
sobrevivem
Embriõessãoreabsorvidosou
abortadosàs6 semanasde
gestação
Ambos os_sexosférteis
Fertilidadereduzida
482
Ovino Barbary,58
(Ammotraguslorvia)
Ovino doméstico,54
(Ovisaries)
59(?)
57
Muflon,54
(Ovismusimon)
Ovinodoméstico,54
(Ovisaries)
54
54
ApÊNDICElU
PreparodeSoluçõesFisiológicas
SOLUÇÃO TAMPÃO FOSFATADA DULBECCO (PBS)
Parafazer10I:
CaClz.2HzO
MgS04' 7HzO
NaCI
KCI
NazHP04
KHzP04
Glicose
Sulfatodeestreptomicina
PiruvatodeNa
PenicilinaG sódica
1,32g
1,21g
80 g
2g
11,5g
2g
lOg
0,5g
0,36g
1.000.000unidades
a Podeserpesadaantecipadamenteeguardadaindefinidamenteemvidra-
ria estérilsobrefrigeração.
bPodeserpesadaantecipadamentee guardadaemvidrariaestérilsob
refrigeraçãopor um mês.Não adicionaro CaClz e o MgS04 a não ser
poucoantesdo uso.
Antes deusar:
1. Dissolva NaCl, KCl, NazHP04' KHzP04' glicose,
estreptomicina,piruvatode Na e penicilinaem 8 1de
águadistiladae deionizada.
2. DissolvaCaClz e MgS04.7HzO em2 1de águadestila-
dae deionizada.
3. Adicione 2 1 a 8 1 com agitaçãoconstante.(Outros
métodospara dissolveressesingredientesfreqüente-
mentelevamà formaçãodeumprecipitado.)
4. Adicionesoro bovino tratadopor aquecimento(1%)
imediatamenteantesdo uso para a recuperaçãodos
embriõese adicione10%de soroparaa estocagemdos
embriões.
PreparodeSoluçõespara Estocagem
Duassoluçõesparaestocagem:
1. Soluçãotampãofosfatadamodificada
Sorofetalbovino (FCS)
PBS +20%FCS
2. PBS +20%FCS
Glicerol
Meio deresfriamento(10%glicerol,v/v)
40ml
10ml
50ml
45ml
5 ml
- 50ml
COMPOSIÇÃO DE ALGUMAS SOLUÇÕES E
SOLUÇÕES TAMPÃO COMUNS
SoluçãodeBaker:
Glicose
NazHP04
KHzPO4
NaCl
Adicione águadestiladaa 100ml
3g
0,6g
0,01g
0,2g
SoluçãodeJoel:
80 ml dedextrosea 5,42%emáguadestilada
20 ml de0,125NzMgClz emáguadestilada
a
b
SoluçãodeLocke:
CaClz
KCl
NaHC03
NaCl
Adicioneáguadestiladaa100ml
0,24g
0,42g
0,1g
9,0g
Soluçãofisiológica:
NaCl
, Adicione águadestiladaa 100ml
0,85g
SoluçãotampãodeRingermodificada:
NaCl
KCl
KHzPO 4
MgSO4. 7HzO
HCl tris
120mM
5mM
10mM
5mM
1mM
SoluçãodeRinger-Locke:
NaCl
KCl
CaClz
NaHC03
Glicose(opcional)
Água
9,5g
0,075g
0,1-0,2 g
0,1-0,2 g
1,0g
1.000ml
SoluçãodeRinger-Tyrod:
NaCl
KCl
CaClz
MgSO4
NaHC03
Glicose (opcional)
Água
8,0g
0,2g
0,2g
0,1-0,2g
0,5-1,0g
1,0g
1.000ml
SoluçãodeScott:
Bicarbonatodesódio
Sulfatodemagnésio
Água destilada
3,5g
20,0g
1.000ml
A soluçãodeScottdeveserusadaapenasquandoa água
detorneirafor "dura"e devesertrocadacomfreqüência,p.
ex.,apósa lavagemde 20a 25diapositivos.
483
484 ApÊNDICES
BSS deHankssembicarbonato(previamenteesteriliza-
daporautoclave):
Penicilina 250unidades/ml
Estreptomicina 250J-Lg/ml
Kanamicina 100J-Lg/ml
ou gentamicina 50 J-Lg/ml
AnfotericinaB 2,5 J-Lg/ml
(Todasaspreparaçõesestéreis,guardara -20°C.)
Dexametasona1mg/ml(100x).
Estajá vemesterilizadaemfrascosdevidro.Paradissol-
ver,adicione5 ml deáguacomseringa,removaediluapara
atingirumaconcentraçãode1mg/ml.Façaalíquotaseguar-
de a -20°C. Betametasonae metilprednisolonapodemser
preparadasdamesmamaneira.
Penicilina (p. ex.,cristapenbenzilpenicilinasádica).
1.000.000unidadesporfrasco
Use 4 frascose 400ml deBBS deHanks
Preparecomoparakanamicina;concentraçãofinal de
10.000unidades/ml.
Soluçãotampãofosfatada(PBS) (Dulbecco"A"):
Tabletesoxáide,Code BR14a, 1 tabletepor 100ml de
águadestilada
Distribuae autoclave.
Guardena temperaturaambiente,pH 7,3,osmolalidade
280mOsm/LKg
PBSB contémcálcioe magnésioe deveserpreparadoe
esterilizadoseparadamente.Se necessário,misture com
PBSA poucoantesdo uso.
ApÊNDICEIV
Técnicaparaa DeterminaçãodaConcentraçãoEspermática
comHemocitômetro
EQUIPAMENTO RECOMENDADO
Platelet/WBC Unopette@ Microcollection system
(Becton-Dickinson,Rutherford, New Jersey)
- Reservatóriosplásticoscontendo1,98ml de oxalato
deamôniotampãoa 1%
- Pipetascapilaresdevidrode 20).lIcomprotetoresde
plástico
Câmara de contagem(hemocitômetro)de Neubauer e
lamínulas
Calculadora de laboratório com unidade de contagem
(variaçãode0-999)
TÉCNICA
1. Misture muito bem o sêmenpara uma distribuição
homogêneadascélulasespermáticas.
2. Mistureo sêmencomumdiluenteadequado(tal como
o oxalatode amôniotampãoa 1%) a umadiluiçãode
1:100(p.ex.,20).l1desêmenpara1,98ml dediluente).
3. Coloque um hemocitômetró limpo (câmara de
Neubauer)sobreumasuperfície'planae cubracomuma
lamínulaapropriada.
4. Misturemuitobemo sêmendiluídoepreenchaimedia-
tamenteas duas câmarasdo hemocitômetrocom o
material.Não preenchaascâmarasdemasiadamente.
5. Espere5 minutosparao sêmenassentarantesde iniciar
a contagem.O hemocitômetropode ser colocadoem
umaplacadePetri umidificadae cobertaparaprevenir
desidrataçãoduranteo períododeespera.
6. A câmaradeNeubauerconsistede9 quadradosgrandes.
Com um microscópiode contrastede fasede 200X,
conte todasascabeçasde espermatozóidesque estive-
remdentrodo grandequadradocentral,queé subdivi-
dido em 25 quadradosmenores.As cabeçasdosesper-
matozóideslocalizadassobreaslinhasdecadaumdesses
quadradosdevemserincluídasnacontagemsomentese
estiveremsobrea bordasuperiorou esquerda.As cabe-
çassobrea bordainferior ou direitade cadaquadrado
não devemsercontadas.
7. A contagemdosespermatozóidesdeveserfeitasepara-
damenteemcadaumadascâmarasdo hemocitômetro.
Se a contagemespermáticade duascâmarasvariarem
maisde 10%,desprezeos resultadose preparecâmaras
dehemocitômetrosadicionaisparaa recontagem.
8. Certifique-sedefinalizaro processodecontagemfocali-
zandologoabaixoda lamínula,porquealgumesperma-
tozóidepoderáteraderidodo ladodebaixodela.
CÁLCULO DA CONCENTRAÇÃO ESPERMÁTICA
1. Estabeleçaa médiada contagemespermáticade duas
câmaras.
2. As dimensõesda grandeárea central da câmarade
Neubauersão I mm (largura)X 1 mm (altura) X 0,1
mm (espessura)paraum volumede 0,1 mm3.Como a
concentraçãoespermáticaé normalmenteregistradaem
númerodeespermatozóidesporcentímetrocúbico(cc),
eladevesermultiplicadapor umfatorde 10.000.
3. Comoo sêmenfoi diluídonaproporçãode 1: 100antes,
a contagemespermáticafinal devesermultiplicadapor
umfatoradicionalde 100.
4. EXEMPLO:
Contagemdo sêmendiluído na câmara1 = 240
Contagemdo sêmendiluído na câmara2 =250
Contagemespermáticamédia=245
Concentraçãoespermáticacelular=
245 X 104X 102Jccou
245 X 106Jcc
485
ApÊNDICEV
PreparodeColoraçõesEspermáticas
COLORAÇÃO DE PAPANICOLAOU
O corantedePapanicolaoudistinguecommuitaclareza
componentescelularesbasófilosde acidófilose permiteum
examedetalhadodo padrãoda cromatinanuclear.Por esse
motivo,essemétodoérotineiramenteusadoparao diagnós-
tico citológico.A técnicada coloraçãode Papanicolaoué
útil tambémpara a análiseda morfologiaespermáticae,
ainda,no examedecélulasgerminativasimaturas.
1. Preparodo espécime.O esfregaçodevesercuidado-
samentesecadoao ar e, então,fixadoem partesiguaisde
etanol(95%)e éterde5 a 15minutos.
2. Coloração.Os esfregaçosfixadosdevemsercorados
daseguintemaneira:
Etanol80%1
Etanol70%
Etanol50%
Águadestilada
HematoxilinadeHarrisouMayer
Águacorrente
Etanolácido
Águacorrente
SoluçãodeScott3
Águadestilada
Etanol50%
Etanol70%
Etanol80%
Etanol95%
OrangeG6
Etanol95%
Etanol95%
EA-504
Etanol95%
Etanol95%
Etanol95%
EtanoI99,5%
Xilol (3 cubascomcorante)
10dipS2
10diPs
10diPs
10diPs
Exatamente3 minutos
3 a 5 minutos
2 diPs
3 a 5 minutos
4 minutos
1dip
10diPs
10dips
10diPs
10diPs
2 minutos
10diPs
10diPs
5 minutos
5 diPs
5 diPs
5 diPs
2minutos
Aproximadamente
1minutoemcadacuba
Troqueo xilol casoele fique leitoso.Monte imediata-
mentecomDepexou qualqueroutromeiodemontagem.
SOLUÇÕES DE ESTOCAGEM
Preparesoluçõesa 10%separadasdecadaumdoscoran-
tesdaseguintemaneira:
EosinaY 10g em 100ml deáguadestilada
BismarckmarromY 10g em 100ml deáguadestilada
Verde-claroSF 10g em 100ml deáguadestilada
Parapreparar200ml de
acimadaseguintemaneira:
EosinaY
BismarckmarromY
Verde-claroSF
corante, misturea solução
50ml
10ml
12,5ml
Completepara2.000ml cometanol95%;adicione4 g
de ácidofosfotungsticoe 0,5 ml desoluçãosaturadadecar-
bonatode lítio. Misturebeme guardea soluçãoa tempera-
tura ambienteem vidros de cor castanho-escura(âmbar)
muito bemfechados.A soluçãoé estávelpor 2 a 3 meses.
Filtre antesdeusar.
Constituintesdo OG6:
CristaisOrangeG
Água destilada
Etanol95%
Ácido fosfotungstico
10g
100ml
1.000ml
0,15g
Soluçãodeestocagemnúmero1:
Prepareumasoluçãoaquosaa 10%conformesegue:Cristal
OrangeG 10gem100mldeáguadestilada.Agitebemedeixe
descansarà temperaturaambienteemfrascosdecorcastanho-
escura(âmbar)duranteumasemanaanteS"deusar.
Soluçãode estocagemnúmero2 (OrangeG, soluçãoa
0,5%):
Soluçãodeestocagemnúmero1
Preparecometanol95% para1.000ml
50ml
1Verifiquea acidezdaáguaantesdeprepararosdiferentesgrausdo etano\.
O pH deveser7,0.
ZUm dipcorrespondea aproximadamente1segundo.(Dip significamergu.
lhar a lâminaemsoluçãoe retirá-Iaemseguida- N.T.).
3A soluçãode Scott é usadaquandoaáguadetorneiraé "dura".
4O corantedePapanicolaoupreparado(EA50 eOG6) podeseradquiridono
comércio.Geralmente,asmesmascompanhiasmanufaturamo preparadode
hematoxilina.Usualmente,oscorantesdisponíveiscomercialmentesãosatis-
fatórios,porémelespodemserpreparadosno laboratórioa um preçobem
menor.Os corantespodemserpreparadosdaseguintemaneira:
EosinaY
486
10g
BismarckmarromY 10g
Verde-claroSF, amarelado 10g
Água destilada 300ml
Etanol95% 2.000ml
Ácido fosfotungstico 4g
Soluçãosaturadadecarbonatode lítio (emáguadestilada) 0,5 ml
BelseyMA, Elliasson R, GallegosAJ, Moghissi KS, PaulsenCA, Prasad
MRN. Laboratory Manual for the Examination of Human Semen and
Semen-Cervical Mucus Interaction, WHO Special Programme of
Research,Developmentand ResearchTraining in Human Reproduction.
Singapore:PressConcern, 1980.
Para preparara soluçãofinal de 1.000ml do corante,
adicione0,15g deácidofosfotungsticoa 1.000ml da solu-
çãodeestocagemnúmero2; misturebememfrascoscasta-
nho-escurosbemfechadosà temperaturaambiente.Filtre
antesdeusar.A soluçãoé estávelpor 2 a 3 meses.
HematoxilinadeHarrissemácidoacético:
Hematoxilina(cristaisescuros)
Etanol95%
Sulfatoamôniodealumínio
Águadestilada
Óxido demercúrio
8g
80ml
160g
1.600ml
6g
Paraprepararamisturacorante,dissolvao sulfatoamônio
de alumínioem águadestiladaporaquecimento.Dissolvaos
cristaisdehematoxilinaemetanol95%.Adicioneasoluçãode
hematoxilinaaosulfatoamôniodealumínio.Aqueçaamistura
a 95°C. Removadachamae,sobagitação,adicionevagarosa-
menteoóxidodemercúrio.A soluçãoadquirecorpúrpura-escu-
ra.Mergulheimediatamenteorecipienteembanho-mariafrioe
filtrequandoasoluçãoestiverfria.Guardeemfrascosescurosà
temperaturaambientee deixedescansarpor48horas.Diluaa
quantidadenecessáriaempartesiguaiscomáguadestiladaefil-
trenovamente.
CoranteGiemsa:
Coloque uma camadade álcool metílico não-diluído
sobrea lâmina.
Deixedescansarpor 10minutos.
Drenee sequeao ar.
Cubraa lâminacomcoranteGiemsa(17gotasdasolu-
çãode estocagemGiemsaemáguadestiladasuficiente
paraobtero volumefinal de5 ml).
Deixedescansarpor20 minutos.
Lavecomáguadestilada.
CorantedehematoxilinadeMeyer:
Coloque uma camadade formaldeídoa 10% sobrea
lâmina.
Deixedescansarpor 1minuto.
Lavecomáguadestilada.
Core por2 minutoscomhematoxilinadeMeyer.
Lavecomáguadestilada.
Corantecristalvioleta-rosabengala:
Coloqueumacamadade clorazene(cloraminaT) (5%
emáguadestilada)sobrea lâmina.
Deixedescansarpor5 minutos.
Lavecomálcool95%.
Mergulheemcristalvioleta(25%emáguadestilada)
Deixedescansarpor8 minutos.
Lavecomálcool95%.
Mergulheemrosabengala(1% em águadestilada)por
8 segundos.
Lavecomáguadestilada.
ApÊNDICES 487
CorantedeBryanparaespermatozóides,corantedeGraham
e Leishmanparasangues:
Fixe a lâminaemformalina(10%por3minutosesub-
seqüentementeem etanol95% por 3 minutose etanol
70%por3 minutos,troqueemcadaterceiravez).
Lave com águadestiladapor 3 minutose megulheem
alfanaftolpor4,5minutos.
Lave em águade torneirapor 15 minutose adicione
pironinaB por 2 minutos.
Mergulhe3 vezesemáguadetorneira.
Adicione corantede Bryanmodificadopor 15minutos
(descriçãoa seguir).
Mergulhe3 vezesemácidoacéticoa 1%.,
Lave em águade torneirapor 1 minuto e adicioneo
corantedeLeishmanparasanguepor5 minutos.
Mergulhe3 vezesemáguadetorneirae sequeaoar.
Coranteparaespermatozóides(Bryanmodificado):
Ácido acéticoa 1%
Eosinaamarela
Verderesistente
Naftol amareloS
1.500ml
0,5g
0,5g
0,5g
Misture muito bem e guardeem frascofechado.Filtre o
coranteantesdeusar.
CorantedeLeishmanparasangue(soluçãodeestocagem):
Junte 0,5 g de azulde metilenoeosinadoe 300 ml de
álcoolmetil absoluto(MeOH).
Misturemuitobeme deixeenvelheceremlocalescuro
na temperaturaambientedurante7 dias.
Coloqueo coranteemumaestufa(35°C a37°C) por2
dias.
A soluçãodeestocagemestáprontaparausoe deveser
guardadaemfrascoescurobemfechado,longedo calor
edaluz. .
Soluçõesde estocagemalternativasparacorarsangue
podemseradquiridasno comércio,comoo corantede
Jennere o deWright parasangue.A duraçãodetempo
envolvidocom essescorantesdeveservariadana fase
Leishmando procedimentopara conseguirresultados
comparáveis.
Soluçãotampão:Junte 2 tabletestampão,pH 6,8,com
200ml deáguadestilada.(Não sendousadade imedia-
to, verifiqueo pH antesdo uso.)
Corante de Leishmanparasangue(soluçãode execu-
ção):Junte 10ml desoluçãodeformaldeídocom90IT,l1
deEI0H 95%.(0,1gdeacetatodecálciopodeseradi-
cionadapor 200ml desoluçãoparaassegurarpH neu-
tro 7,0).
5UlsteinM, Capell, HolmesK, PaulsenCA. Nonsymptomaticgenital
tract infection andmale infettility.ln: Human Semenand Fettility
Regulationin Men. St. Louis:Mosby, 1976.
488 ApÊNDICES
Formalinaalcoólica:Junte 10ml desoluçãodeformal-
deídocom90ml deEtOH 95%;0,1g deacetatodecál-
cio podeseradicionadapor200ml desoluçãoparaasse-
guraro pH neutro7,0.
Alfanaftol:Dissolva1gdealfanaftolem100mldeálcool
etílico40%(EtOH). Poucoantesdousoinicial,adicione
0,2ml desoluçãodeperóxidodehidrogênioa3%.
PironinaY: Junte 1 g de pironina,4 ml de anilinae 96
ml deEtOH 40%.
Citrato desódiotampão:Misture7 g decitratodesódio
com 11deNaCl 0,9e ajusteo pH a 7,5.
CorantedeBryan/LeishmanparaEsfregaçosdaMorfologiadoFluidoSeminal
Nota:Useesfregaçosdeamostrasrecentes,secosaoar,elâminaslimpas.
Formalinaalcoólica10% 1minuto
Álcooletílico(EtOH)80% 5minutos
EtOH 70% 5minutos
EtOH 50% 5minutos
Alfanaftol 4minutos
Renovetodavez
Troquea cada3 vezesa
Troquea cada3 vezes
Troquea cada3 vezes
Troquea cada3 dias
Adicione 0,4ml deperóxidodehidrogênioa 3% a 200ml dealfanaftolpoucoantesdo usoinicial; asoluçãopermane-
ceativapor3 diasà temperaturaambiente.
Águacorrentedetorneira
PironinaY
Águacorrentedetorneira
Citrato desódiotampão
Águadestilada
CorantedeBryanmodificado
Ácido acético1%
Águacorrentedetorneira
Tampãoe corantedeLeishman
15minutos
4minutos
3dipsb
3 minutos
1minuto
15minutos
2diPs
1minuto
30minutos
Correntevagarosamente
Renovea cadasemana
Correntevagarosamente
pH 7,5j renovea cadavez
Renovea cadavez
Renovea cadaduasvezes
Renovea cadavez
Correntevagarosamente
Renovea cadavez
Filtre 50ml doestoquedeLeishman;adicionetampão150ml pH 6,8efiltre denovo imediatamenteantesdo uso.
Águacorrentedetorneira 1 a 2dips Correntevagarosamente
Secarao ar (nãosujar)
aTroqueacada30 lâminasseestiverusandoumacubapara10lâminas.
bCadadipdeveteraproximadamente1 segundodeduração.
CONSIDERAÇÕES ESPECIAIS
1. A pironina Y, os corantesde Bryanmodificadose de
Leishmandevemserfiltradosantesdousoinicial.Além
disso,o tampãoe o corantedeLeishmanemusodevem
serfiltradosantesdo usopararemovero corantepreci-
pitado.
2. A intensidadedocorantefinalpodeseraumentadapela
coloraçãopor tempomaior no corantede Leishman
tampãoou podeserdiminuídapor lavagensrepetidas.
Confiraa intensidadedesejadacomo microscópioantes
demontara lâmina.
3. o peróxidode hidrogêniodeteriora-serapidamentena
presençadeluz;assim,asoluçãodeestocagema3% deve
serguardadaemumrecipientedeâmbarno escuro.
O corantedeLeishmandeestocagémdeveserenvelhe-
cido antesdousoguardando-opor 7 diasna temperatu-
ra ambienteno escuroseguindo-seincubaçãode35°C
a 37°C por 2 diastambémno escuro.A soluçãoenve-
lhecidaé estávelpor 1 mêssemantidaemumrecipien-
te lacradono escuro.
4.
ApÊNDICEVI
PreparodeTripsinapara OócitoZona..freedeHamster
Diluentetampãodetripsina
Cloreto desódio
Citrato trisódico
Tricina [N-tris(hidroxi-metil)metilglicina]
Fenolvermelho
Águadestilada
6,0g
2,9g
1,79g
0,005g
1.000ml
Mexaos ingredientesatédissolução,ajusteo pH para7,8.
Filtre compapeldefiltro n° 1Whatman.
Avie e autoclave.
Osmolalidade=290nOsmfkg.
Tripsinaparaestocagem(2,5%em0,85%(0,14M) NaCl)
Soluçõesdetripsinapodemsercompradasno comércio.
Alternativamente,parafazerumasolução2,5%em 0,85%
N aCI, mexapor 1 hora na temperaturaambienteou10
horasa 4 oCoCasoa tripsinanão sedissolvacompletamen-
te,clareieporfiltraçãoempapeldefiltro Whatmann° 1.
Esterilizepor filtração,transformeem alíquotase con-
servea-20°C.
Nota: A tripsinaé disponívelem estadobruto (p. ex.,
Difco 1:250)oupreparaçõespurificadas(p. ex.,Sigma[3X]
recristalizada).
ApÊNDICEVII
AvaliaçãodosCromossomosdosÓvulos
Mórulasoublastocistossãoincubadospor2horasa37°C
emmeiodeculturadetecido(TC) 199ao qual foi adicio-
nado Colcemid (0,5 g/ml). Então, eles são colocadosem
citratode sódio0,9% em tubosde centrífugasiliconizados
por 10minutose dissociadoscuidadosamentepor aspiração
comumapipetaPasteursiliconizada.Depoisdenova incu-
baçãopor10minutos,o tubodeensaioécentrifugadoa 800
rpmpor 5 minutos,e o sobrenadanteremovidoé substituí-
do porálcoolacéticofixador.
As preparaçõesem estadobruto contêmváriasoutras
proteasesquepodemserimportantesna dissociaçãocelular,
masquetambémpodemserprejudiciaisparacélulasmais
sensíveis.A práticacomuméempregara tripsinaemestado
brutoa não serqueo dano celularreduzaa viabilidadeou
queocorraumcrescimentoreduzido,quandoentãosedeve
usara tripsinapurificada.A tripsinapurapossuiatividade
específicamaiore por issodeveserusadaemconcentração
proporcionalmentemaisbaixa,p. ex.,0,05%ou 0,01%.
Tripsinafosfatoverene(TVP)
Tripsina(Difco 1:250) 25mg(ou1ml
Fluirou
Gibco2,5%)
SoJuçãosalinatampão
fosfatada(PBS)
EDTA dissódico(2 HzO)
Sorodepintainho(fluir)
98ml
37mg
1ml
Misture PBS e EDTA e autoclave,então,adicioneo
sorodepintainhoe a tripsina.
Quandoestiverusandotripsinaempó,esterilizeporfil-
traçãoantesde adicionaro sorode pintainho. Divida em
alíquotase guardea-20°C.
As preparaçõessãoguardadasdurantea noite a 4 °C e,
apósaremoçãodofixadorporcentrifugação,adicioneácido
acéticoaquosoa 45%.As célulasdissociadassãoressuspen-
didasem seguidaa umasegundatrocade ácidoacético,e
pequenasgotasdasuspensãosãocolocadassobreumalâmi-
na devidro aquecidaa 56°C sobreumaplacaaquecedora.
As lâminassão,então,coradascomcarbolfucsina.
489
ApÊNDICEVIII
Livros/Companhiasde FIV
490
Zygote:TheBiologyofGametesand Early Embryos
(Zigoto:A BiologiadosGametas e EmbriõesNovos)
Essaobracompreende:.gametogênese;
. interação espermatozóide-ovo;
. ativaçãodegametas;.polaridadeemoócitose zigotos;.controle do ciclo celular;. interaçõescélula-célula;.geraçãodenovaslinhagenscelulares.
A estruturabásicade umembriãoé estabelecida
logoapósafertilizaçãoegeralmenteemdiversasdivi-
sõesde clivagem.Essa publicaçãocentraliza-sena
regulaçãoespacial/temporaldoscomponentescelula-
resdentrodo oócito/zigoto,vai da programaçãodas
informaçõesemdesenvolvimentodurantea oogêne-
se,atravésdesuasmodificaçõesduranteafertilização,
atéa integraçãodosprimeirosgenomasembrionários
maternos.
a. Células espermatogênicashumanas imunorrotuladas
paraproacrosinacom 404 mAb (fluorescênciaamarela)e
contracoradascombrometodeetídio(fluorescênciaverme-
lha). Célulasbinucleadas,provavelmenteumaespermátida
gigante arredondada,mostrando imunorreaçãoem duas
áreasnão-comunicantesadjacentesacadanúcleo(setas).A
maior célula adjacentedo monócito nuclear (acima,à
esquerda)não mostraqualquerimunorreaçãoà proacrosina.
A escalarepresenta5}.1m.
b. Avaliaçãodamaturidademeióticadecélulasespermato-
gênicas humanas usando dupla cor FISH com sondas
015Z1 (manchasfluorescentesazul-claras).Os núcleossão
contracorados com OAPI (fluorescência azul-escura).
Espermatócitosprimários na primeira prófase meiótica
mostrandoquatrocópiasde ambasasseqüênciasvisualiza-
dasde ONA, correspondentesa doisbivalentes,consistin-
do cadaum emduascromátides.
c. Célulasdo ovo e outrascélulasderivadasdo tecidoovu-
lar deBrassicanapus.Barras= 10}.1m.Célula do ovo in situ
(setapreta)emumsacodeembrião(setabranca)apóstrata-
mentoparaclarear.
CambridgeUniversity Press,North American Branch,40
West 20thStreet,New York, NY 10011-4211,USA.
ApÊNDICES 491
In Vitro Fertilizations(FertilizaçãoIn Vitro)
BRIAN DALE
DiretordepesquisaStazioneZoologia,NáPoles
e KAY ELDER
Diretordetreinamento,BournHall Clinic, Cambridge
D CAMBRIDGE~ UNIVERSITY PRESS
1. Técnicasde microinseminaçãoinclueminjeçãosubzonal(SZI), injeçãointracitoplasmáticade espermatozóides
(lCSI), perfuraçãozonal(ZD) edissecçãoparcialzonal(PZD).
2. VariaçõesdefertilizaçãoapósICSI.
PN: pronúcleo;CP: corpopolar
a.doispronúcleos;doiscorpospolares
b. trêspronúcleos;umcorpopolar
c. umpronúcleo;doiscorpospolares
d. sempron6cleo;umcorpopolar
e.clivageminicial
3. Variaçõesnamaturidadedoovoencontradasapóstratamentocomhialaseedissecçãodacorona.
a.vesículagerminativa
b.metáfaseI
c. metáfase11
4. GradientesdedensidadeBoyant.
(a-b)duasfasesdegradientesantesedepoisdacentrifugação.
c. minigradiente
5. TesteARIC: umapopulaçãodeespermatozóidesésubmetidaaocálcioionóforoA23187erotuladacomlectinafluo-
rescenteparaaçúcaresdesuperfícieespecíficos.A áreabrancaindicafluorescência.
I. acrossomaintacto
11. reaçãoincompletadoacrossoma
111.reaçãocompletadoacrossoma
IV. espermatozóidesmortos
V. espermatozóidesanormais
6. Colocaçãodeembriõesdentrodeumacriopalhetaantesdacongelação.
7. Espermatozóidesdentrodeagulhaparamicroinjeçãoantesdainjeção.
8. Pipetasparainjeçãoeconservação.
DaleB (1996)In: GregerR, WindhorstU (eds).ComprehensiveHumanPhysiology.SpringerVerlag,Berlin.
JohnsonM, EverittB (1990)EssentialReproduction.BlackwellScientificPublications,Oxford.
SagataN (1996)Meioticmetaphasearrestin animaloocytes:itsmechanismsandbiologicalsignificance.Trendsin
Cell Biology6:22-28.
YanagimachiR (1994)MammalianFertilization.In: KnobilE andNeill J (eds).The Physiologyof Reproduction.
RavenPress,New York,pp 189-317.
(vejaa ilustraçãona Páginaseguinte)
492 ApÊNDICES
1
Q)~
SZI
=@=
ZD
ICSI
PZD
(aI
Nucléolos
2
;./~
/r~~~~
.~ <b'~
2 PN, 2" CP
Fertilização monospérmica
3 PN, 1"CP
Diginiamonospérmica
"'0
(e)
(d'O
rrflG))
~
Nenhum pronúcleo;
1" CP,
Não-fertilizado
Pronúcleo único, 1 ou 2 CP,
ativado? (conferir
novamente mais tarde)
3
w ~~~ ~ .. .
Zonapelúcida,
t3
Espaço penvltelino
Nucleo GV
'. ' /"~~
°"'00'00oortlOOI::a Nooloolo~ '
Vesícula germinativa MetáfaseI (GV rompido,CP ainda não extruso)
.~ ~rimeirocorpúsculopolar
,. o A",ad, "9,,00100Idad,.00ooplooma
Metáfase11,extrusãodo primeirocorpúsculo polar
4
(ai r (b) r
I
(el [
Clivageminicial
6
Nome,
1
Data,
Ciclo NQ,
Embrião NQ
F3 Local do
(~ b '- Arl\oUem nao
7k ~
_20~
aproximadamente-
~,
-100"
L- 6-71'- ~
:::>
::::>
Pipetaparainoculação
(dimensõesaproximadas)
Pipeta para conservação
(dimensões aproximadas)
Sêmen
85091>7
95%
:5a an
Outros/anormais
- '(
11 111 IV V
ApÊNDICES 493
CASMED INTERNATIONAL LTD
Castle House
39Nork Way
Banstead, Surrey SM7 1PB
Tel no (0)1737 379898
Fax no (0)1737 379890
VAT reg. no. GB676 1951 03
Co Reg. no. 3192716
Marcasmicroscópicaspróximasà extremidadeda
agulhaparamelhoraro desempenhoda imagem
quandoestiverusandoultra-som
..
"'" líquido folicular
Visfada extremidadeda agulha Secção
mostrandoa direçãodofluido transversal
Fabrica também:.Agulhas para coleta de oócitos de ampla
variação.Cateterespara IUI e transferênciade
embriões.Agulhas para aspiração de cistos.Guias para sondas de ultra-som.
Líquidode lavagem
A Casmedtemdistribuidoresnamaio-
riadospaísesdoOrienteMédioe ficará
satisfeitaemfornecerseusnomese
endereçosdesdequesolicitados.
Contrastede fase(A e E) e Nomarski(B-D e F)
EMBRYOTECH LABORATORIE~ me
E9323AndoverStreet. Wilmington,MA 01887. USA
~T_I: 508.658.4600 ISi!Fax:508.658.5777
QE-mail: embryoteC@aol.comand/or W_b Sit_: www.embrvotech.com
@
EMBRYOTECH'"
ApÊNDICE IX
Fertilizaçãoln VitroporMicroinjeção
Fertilizaçãoinvitropormicroinjeção.
494
ApÊNDICES 495
SEPARAÇÃO ESPERMÁTICA INSTANTÂNEA EM TUBOS DEWANG
EN. WANG
Estesistemareúneautilizaçãodetubosdeseparaçãorecentementeprojetadose métodosinovadores.Váriosfenômenos
biológicose biofísicose princípiosteóricosbásicosforamaplicadosno sistemadeseparaçãoespermáticainstantânea:.Espermatozóidesnão-patológicosnãotransferemmicrorganismos.
. O padrãodamotilidadee acapacidadeswimupdeespermatozóidesinfectadosoupatológicossãolimitadosou perturba-
dos..Quantomaisrápidaamigraçãoespermáticae maioradistânciavencida,maisnormaissãoosespermatozóides..Espermatozóidesdiferentesdoesperadoparao seuestágiodedesenvolvimentoou aquelescomdistúrbiosmorfológicose
fisiológicospodemseridentificadosporalgumascaracterísticas,comovelocidadese distânciasdiferentesdemigração..Espermatozóidesaltamentemóveispodemserseparadosfacilmentedeoutrascélulasvivas,comoleucócitos,célulasver-
melhasdo sangue,linfócitose restoscelulares..O meiodeculturadetecidospossuibaixaviscosidade,quenãofavoreceaaderênciadosmicrorganismosaosespermato-
zóidesextremamentemóveis..A gravidadeespecíficadeumpelletespermáticoé maiorquea do meiodeculturade tecidos,de modoqueo pelletcai
rapidamenteparao fundodo tubodeWang,permitindoa migraçãodosespermatozóidesmóveis..A velocidadee a direçãodamigraçãoespermáticasãobastantediferentesdosmovimentosaleatóriospassivosou ativos
dosmicrorganismos.
. O sistematubulardeWang é umatécnicamultidirecionaldedesafio/migração(MCM). Ela não é apenasumasimples
técnicadeswimup.Aos espermatozóidesépermitidomigraremmúltiplasdireções,passandoatravésdecurvaturascom
ânguloscríticos,cuidadosamenteprojetadase computadorizada8.O desafioefetuadofacilita a seleçãode espermatozói-
desdealtaqualidade.
. EssasfórmulasforambaseadasnasteoriasdaequaçãodeBernoullie na aplicaçãodahidrodinâmica.
F.N. WANG
SEPARAÇÃO ESPERMÁTICA INSTANTÂNEA (TempoReal)
REVISÃO DOSTUBOS DEWANG E
TECNOLOGIAS RELACIONADAS
ARCHIVES OF ANDROLOGY, 34:13-32(1995)
o pacienteé periodica-
menteintectado
não
60 M/ml
6' I 60%móveis
60% moriologicamente
normais
Sim(1)
< 63 <:63
Oligozoospermia
Astenozoospermia
Teratospermia
Normospermia
<:3ml
um M3
dois M3
<3 ml
IVF(2)um 82
IUAI um 82
<:3ml
um M2
dois M2
<3 ml
um 81/82
dois M2
;,3 ml
um M1/M2
dois M1/M2
(1) N. deWBC maiordo que6 emsêmenín naturasobcampode altopoder.
(2)A seleçãodotubodeWangparaGIFT.ZIFT ouTET é IdênticaàquelaparaFIV.
(3) São sugeridosmaistubosdeWangparamaispreparaçõesespermáticas.
Seleção do tubo de Wangcorreto.
496 ApÊNDICES
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6cm
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Microscópio
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A: Tubo de Wang padrão (vista frontal). Posição em pé com um braço lateral com 6 em de comprimento e inclinação de 90°.
B: Tubo de Wang oblíquo (vista fronto-ventral): (a) com um braço lateral com inclinação de 30°, (b) com inclinação de 45°,
c: Tubo de Wang complexo (vista frontal). Posição superior em pé com quatro lentes convexas em simetria com aquelas da parede do
fundo e duas hastes adicionais ligadas à parede anterior do componente inferior do tubo.
D: Meio de cultura de tecido é colocado em um tubo de Wang com uma pipeta Pasteur longa.
E: A suspensãode espermatozóides é injetada dentro do tubo de Wang.
F: Depois da incubação, o meio de cultura de tecido dentro do tubo de Wang fica em três camadas distintas: a camada 1 é acentuadamen-
te turva, a camada 2 é turva e a camada 3 é clara e contém espermatozóides de muito boa qualidade. A imagem dos espermatozóides em
migração e os parâmetros espermáticos podem ser checados diretamente com microscópio antes da coleta.
G: Espermatozóides de alta qualidade são coletados do tubo de Wang. Pressionando-se o braço lateral, o tubo de Wang é cortado.
H: Espermatozóides de alta qualidade são liberados do braço lateral do tubo de Wang comprimindo a rolha de silicone com o dedo pole-
gar e o indicador.
I: O tubo de Wang, a rolha de silicone e o meio de cultura de tecido são colocados na incubadora antes dos tubos serem preenchidos com
o meio de cultura de tecido.
VIVO
Sem reação Com reação
MORTO
Sem reação Com reação
ApÊNDICES 497
6CM 1
D,
3Ó~5
(Acima) Análise espermáticaassistidapor computadorHamilton-Thorn (CASA) aplicadoparadiferenciarespermatozóidescome sem
reaçãoe vivose mortos.
(Abaixo)SistemadetubodeWangparaseparaçãode espermatozóidesparaFIV.
498 ApÊNDICES
Avaliaçãodeexperimentoscomculturadecélulasusandoa técnicadefluorescência.
~-
Espermatozóides
congelados-desconqelados
Lavagem com solução de
Pereol! (500 g 10 minutos)
2 mlde sêmen
2 mlde Pereol!30%
/
Culturapor28 horasa 39°C 2 mlde Pereol!45%
emineUbado
{
rade CO2 Aglomerado de
TCM-199 + es ermatozóide,
, Gonadotrofinas
OMelO Oestradiol Pré-ineubaçãopor6-8 horasa 39°C10%FCS emincubadorade CO2(3 milhõesml-1)
. Dóollo,ma'"""(1Q-15i "'p"'m,""óld~','.-. I capacitados~
Inseminação (10 milhões de espermatozóides ml-1)
ApÊNDICES 499
Sistemadefertilizaçãoinvitro(Universidadede
Kyoto)parabovinos.(Iritanie colaboradores.)
(CortesiadoProfessorlritani.)
Os númerosde páginasem itálicoindicam
figuras; os números seguidospor um t
indicamtabelas.
Abortamento,269 (vertambémemanimal
específico)
causasinfecciosas,270-274
embovinos,270-271,271t
emeqüinos,272,273t
emovinose caprinos,271,272t
emsuínos,272,273t
causasnão-infecciosas,267-270,270t
embovinos,270-271
emeqüinos,272
emovinose caprinos,271,273
emsuínos,272
toxinasdeplantasqueprovocam,334-
335,336t,339
Abortamentoenzoóticoemovelhas
(EAE),271
Abortamentoepizoóticobovino (EBA),
271
Acasalamento,295-296(vertambémem
animalespecífico)
padrões,297t
Acrosina, 114-115
Acrossomo,97
grânulopersistente,knobbed,312
reaçãodo,na fertilização,114t,117
seqüênciadeeventos,121
Adeno-hipófise,hormônios,38-39
Alfatoxinas,338
Alpacas,219
abortamentoinduzido,226
anatomia,reprodução
fêmea,219
macho,228-230
capacidadereprodutiva,229-230
colheitadesêmen,229-230,231
comparaçãodostratosreprodutivos
femininosde Ihamas,220t
comportamentosexual
fêmeas,224
machos,229-230
desenvolvimentofolic'ular,220-222
estaçãosexualde
fêmeas,219-220
machos,229-230
falhasreprodutivas,226-227,231-232
abortamento,228-229
defeitoscongênitose adquiridos,
226-227,231-232
descidatesticularretardada,231,232
endometrite,226-227
mucometra,228
perdaembrionária,228
perdafetal,228
piometra,228
priapismo,232-233
fertilizaçãoin vitro,233-234
funçãodo corpolúteo,223-224
gêmeos,228-229
gestação,224
diagnóstico,225-226
inseminaçãoartificial,232-233
níveisdeprogesteronaemfêmeasapós
a cobertura,228t
níveisde testosterona,duranteo ano,
23lt
ovulação,222-223
parto,226
produçãoe característicasdo sêmen,
230-232
puberdade
fêmeas,219
machos,228-230
puerpério,226
transferênciaembrionária,232-234
Amamentação,supressãodaciclicidade,
153,155
Amamentação/mamadas(vertambém
Gestação)
comportamentomaterno,301-302
estropós-partoe ovulação,62
Anáfaselag,309
Análise espermáticaassistidaporcom-
putador(CASA), 497
atividadeespermicida,455-458,460
motilidadeespermática,373,374,453
Anatomia dareprodução
fêmea,13,14-15(vertambémemanimal
específico)
cérvixuterina,24-27
comparada,22
diferenciaçãoembrionária,13,14
genitália,externa,28
histologiafuncional,16t
infecção,morfologiadascélulas
ciliadas, 19
ovários,13-17
ovidutos,17-21
sistemaimune,componentes,
349-350
ultra-estrutura,25
/
INDICE
útero,21-24
vagina,27-28
macho,3 (vertambémemanimal
específico)
descidadostestículos,4-5
desenvolvimento,3-6, 5t
diferenciaçãoembrionária,14
epidídimose ductosdeferentes,7
glândulasacessórias,8-10
anatomiacomparativa,8-9,9
função,9-10
pênise prepúcio,10-11
testículoseescroto,5-7
Andrógeno ligadoa proteína,47-48,
104-105
Androgenones,123
Andrógenos,42-43,105-106
Anéis anulares,25
Anestro, 261-262
causas,263
Aneuploidia,309
Animais delaboratório
característicasseminais,11t
transgênicos,320-321
microinjeçãodeDNA, 320-324
tecnologiada célula-tronco
embrionária,323-325
transferênciagênicamediadapor
retrovírus,324
Animais transgênicos(vertambém
Engenhariagenética)
aplicaçãoe uso,320t,320-321
definição,320-321
desenvolvimento,319
metodologiausadaemtransferência
de genes,320t
quadrocronológico,320t
produçãode domésticos,324-328
biorreatoresanimais,325-326
construçãodegenes,325-326
metodologia,324-326
microinjeçãodeDNA, 322
modelosruminantes,326-328
modelossuínos,325-327,327t
tratosdeprodutividade,326
visãogeral,324-325
produçãoemlaboratório,320-325
microinjeçãodeDNA, 320-324
outrastecnologias,324-325
tecnologiade célula-tronco
embrionária,323-325
transferênciadegenesmediadapor
501