ELETROFORESE DE DNA RNA E PROTEINAS

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ELETROFORESE DE 
DNA, RNA EPROTEÍNAS
Profa. Dra. Letícia Anderson
Biotecnologia e Biologia MolecularAplicada
ELETROFORESE
Migração de partícula carregada sob influencia de um campo 
elétrico em um fluido ou gel.
- Separação
- Identificação
- Purificação
DNA 
RNA
PROTEÍNA
ELETROFORESE
Migração de partícula carregada sob influencia de um campo 
elétrico em um fluido ou gel.
DNA longo
DNA médio
DNA curto
ELETROFORESE EM GEL
ETAPAS
- Preparo do gel (agarose ou 
acrilamida)
- Adição do tampão de 
corrida na cuba
- Preparo e aplicação das 
amostras
- Corrida
- Fotodocumentação
- Análise
ELETROFORESE HORIZONTAL OUVERTICAL
ELETROFORESE DEDNA
Gel de Agarose
- Polissacarídeo de resíduos de 
D e L-galactose
- Menor resolução
- Separa fragmentos grandes 
de DNA 20 kb – 50 pb
- Concentração da agarose 
determina sua resolução
Gel de Poliacrilamida
- Polímero formado por 
Acrilamida + Bisacrilamida
- Maior resolução
- Separa mais fragmentos 
pequenos de 5 – 500 pb
- Neurotóxica
Migração do DNA na eletroforese
•Tamanho da molécula de DNA
• Dupla fita de DNA linear ou circular
• Tamanho do DNA
•Concentração do gel
↑Concentração ↓ taxa de migração
•Presença de moléculas interagindo com DNA
• Proteínas, corantes, polímeros inibidores
•Voltagem
•Tampão
• Sais para estabilizar a molécula
ELETROFORESE DE DNA- Equipamento
Pente
Forma
Fonte de eletrecidade
Cuba de eletroforese
ELETROFORESE DE DNA- Gel
Agarose + Tampão derretido 
a alta temperatura Gel de agarose 
solidificado sem o pente
Aplicação da amostra
Revelação
Corrida
Preparo da amostra com 
Tampão de Amostra
https://learn.genetics.utah.edu/content/labs/gel/
ELETROFORESE
https://learn.genetics.utah.edu/content/labs/gel/
ELETROFORESE DE DNA- Gel
Agarose + Tampão derretido a alta temperatura
Gel de agarose solidificado sem o pente
ELETROFORESEDE DNA –Aplicaçãodas amostras
Aplicação da amostra corada com azul de bromofenol e Glicerol
- Facilita a visualização da amostra
- Permite a “descida” da amostra no poço “well”
ELETROFORESE DE DNA- Migração
Porcentagem de agarose influencia na malha da matriz e na separação de DNAs de 
diferentes tamanhos
DNA Genômico = 0,7%
PCR = 1,2 a 2,5% dependendo o tamanho do fragmento
ELETROFORESE DE DNA- Visualização
Agente intercalante de DNA para visualização em UV
- Brometo de etídio
- Sybr safe
- Gel Red
Luz Ultravioleta
Transiluminador
ELETROFORESE
Foto do Gel na Luz Ultravioleta
Marcador
AMOSTRAS
Corante
Azul de 
Bromofenol
Banda da PCR
ELETROFORESE DE DNA- Interpretação
AG
AR
O
SE
PO
LI
AC
RI
LA
M
ID
A
Marcador de Peso Molecular
Molecular Weight
Fragmentos de DNA com tamanhos
conhecidos para comparação com a
amostra
Observar
- Altura da Banda formada
- Quantidade de Bandas
- Espessura da Banda
ELETROFORESE DE DNA- Interpretação
ELETROFORESE DE DNA- Interpretação
Gel para PCR
Observar
- Altura da Banda formada
- Quantidade de Bandas
- Espessura da Banda
- Diferentes marcadores
- Comparar com Marcador
M CN
Excesso de primers no 
Controle negativo
Marcador
ELETROFORESE DE DNA- Interpretação
Observar
- Altura da Banda formada
- Quantidade de Bandas
- Espessura da Banda
- Diferentes marcadores
- Comparar com Marcador
Marcador
Gel para DNA genômico
M
ELETROFORESE DE RNA- Interpretação
AG
AR
O
SE
Observar
- Altura da Banda formada
- Quantidade de Bandas
- Espessura da Banda
ELETROFORESE DEPROTEÍNA
Mais de uma subunidade
Estrutura Primária Estrutura Secundária
Estrutura Terciária Estrutura Quaternária
ESTRUTURA DE PROTEÍNA
ELETROFORESE DEPROTEÍNA
Mais de uma subunidade
Estrutura Primária Estrutura Secundária
Estrutura Terciária Estrutura Quaternária
ESTRUTURA DE PROTEÍNA
ELETROFORESE DEPROTEÍNA
Migração em gel de Poliacrilamida PAGE
- Tamanho (massa molecular)
- Carga (ponto isoelétrico)
ELETROFORESE DEPROTEÍNA
Proteína Desnaturada
- Dodecil sulfato de Sódio SDS
- Beta-mercaptoetanol
- Aquecimento a 95°C
ELETROFORESE DE PROTEÍNA- Migração
Agente desnaturante 
Quebra pontes Dissulfeto
SDS carrega a proteína negativamente
Proteína linear carregada com carga negativa
ELETROFORESEDE PROTEÍNA –Migração emdiferentescondições
Condição não redutora
Condição redutora
Separação de proteínas
de estrutura terciária e 
quaternária
ELETROFORESE DEPROTEÍNA –Corrida vertical
Aplicação da amostra corada com
azul de bromofenol
- Facilita a visualização da amostra
ELETROFORESE DE PROTEÍNA–Visualização
Marcador de Peso Molecular
Molecular Weight
Proteínas com tamanhos conhecidos para
comparação com a amostra
Observar
- Altura da Banda formada
- Quantidade de Bandas
- Espessura da Banda
ELETROFORESE DE PROTEÍNA–Visualização
Coloração do gel para visualização
- Coomassie blue (interage com grupos amina)
- Prata (redução dos íons na presença de proteína)
Prata Coomassie blue
ELETROFORESE COMPARADA paraEUCARIOTO
Perfil comparativo de Célula eucarionte