MICROBIOLOGIA CLÍNICA

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1. Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA)
1)Diferentes antibióticos podem ser utilizados em testes de sensibilidade. O CLSI atualiza a lista de antibióticos e os critérios de avaliação para o TSA periodicamente. Entretanto, essa escolha não é aleatória, pois existem diferentes prioridades de antibióticos. A respeito desse tema, analise a alternativa correta.
Antibióticos do grupo B são aqueles usados principalmente em cepas isoladas de infecções hospitalares, devendo servir como segunda escolha.
RESPOSTA CORRETA
Antibióticos do grupo A são aqueles de primeira escolha para os testes de TSA de rotina e para qualquer tipo de material clínico.
Antibióticos do grupo B são aqueles usados principalmente em cepas isoladas de infecções hospitalares (infecções nosocomiais), devendo ser escolhidos como segunda escolha; caso haja muitos resistentes no grupo de primeira escolha (grupo A).
Antibióticos do grupo C são aqueles utilizados para investigar bactérias multirresistentes (muitos resistentes nos grupos A e B) e cepas epidêmicas.
Antibióticos do grupo U (urinário) são aqueles utilizados principalmente (ou exclusivamente) para bactérias isoladas de infecções do trato urinário.
Antibióticos do grupo O (outros) são aqueles que não são realizados rotineiramente em TSA nos Estados Unidos da América.
Antibióticos do grupo inv. (investigação) são aqueles que estão em fase de pesquisa e ainda não foram aprovados pelo FDA.
2)O teste de disco-difusão (ou método Kirby-Bauer) é o método mais utilizado em laboratórios para realização de TSAs. Em relação ao modo de preparo e características do teste de disco-difusão, de acordo com as normas do CLSI, assinale a alternativa correta.
d)Devem-se aplicar os discos de antibióticos no ágar de maneira uniforme. Colocar, no máximo, 5 discos em placas de Petri de 100mm, ou 12 discos em placas de 150mm.
RESPOSTA CORRETA
O meio de cultura mais utilizado nos testes de disco-difusão, para organismos não fastidiosos, é o Ágar Müeller Hinton. Para organismos não fastidiosos, devem ser escolhidos meios suplementados específicos (p. ex., Ágar HTM para Haemophilus spp., Ágar GC para Neisseria gonorrhoeae, Ágar Müeller Hinton Sangue para Streptococcus spp.).
Antes do preparo da placa, deve-se preparar uma suspensão bacteriana, a partir de uma colônia isolada, em um tubo contendo meio de cultura líquido adequado ou em solução salina, até a obtenção de turbidez padrão McFarland 0,5.
A suspensão bacteriana é semeada em meio de cultura, com auxílio de um swab de algodão estéril, inoculando, de maneira uniforme, em toda a superfície do ágar, semeando em três direções da placa (observação: a técnica de semeadura para quantificação, ou “estria de peixe”, é utilizada para quantificação de crescimento bacteriano em placa. Faz-se uma única estria em toda a superfície do ágar e, depois, um estriamento. Sendo assim, ela não é adequada para o teste de disco-difusão).
Devem-se aplicar os discos de antibióticos no ágar, de maneira uniforme (distância entre os discos não deve exceder 24mm, considerando os centros deles), com auxílio de uma pinça flambada e resfriada ou com um dispensador de discos para TSA. Devem-se colocar, no máximo, 5 discos em placas de Petri de 100mm ou 12 discos em placas de 150mm.
Após incubação em estufa, observar o tamanho das zonas de inibição. O teste de disco-difusão é um teste qualitativo (resultados classificados como sensível, intermediário ou resistente), cujos resultados devem ser interpretados de acordo com tabelas padronizadas internacionalmente, sendo recomendado o do CLSI (países Europeus utilizam o padrão do EUCAST).
Testes de sensibilidade quantitativos são aqueles em que se determina a concentração inibitória mínima, como os testes de diluição/microdiluição em caldo e Etest®.
3)TSAs são testes de sensibilidade in vitro utilizados para detectar resistência adquirida por um patógeno a um ou mais antibióticos. Em relação às normas do CLSI para aplicação dos testes, assinale a alternativa correta.
a)
Caso haja crescimento de colônias isoladas dentro dos halos da zona de inibição, o teste deve ser repetido, isolando-se uma dessas colônias e fazendo um novo cultivo.
RESPOSTA CORRETA
Caso haja crescimento de colônias isoladas dentro dos halos da zona de inibição, o teste deve ser repetido, isolando-se uma dessas colônias e fazendo um novo cultivo. Essas colônias isoladas sugerem mutantes resistentes.
Não é necessário realizar TSA a partir de espécimes com crescimento misto ou contendo a microbiota normal (nos casos em que não está clara a natureza infecciosa), já que os resultados podem não ser confiáveis. Assim, deve ser testado com apenas um tipo de microrganismo por placa.
A regra é fazer o TSA partir de colônias bacterianas, mesmo que demore um pouco mais para liberar o resultado. Entretanto, a exceção é realizar o TSA diretamente do material clínico em casos de emergência, quando a coloração do Gram sugere apenas a infecção por um microrganismo (após resultados preliminares com o material clínico, repetir o teste utilizando isolados bacterianos).
O TSA realizado pelo teste de disco-difusão (método Kirby-Bauer) é indicado para testes de sensibilidade, apenas para bactérias aeróbias, ou seja, não é indicado para bactérias anaeróbias.
Periodicamente, é necessário realizar controle de qualidade dos testes de TSA; por exemplo, testar reagentes de um lote novo. Para isso, utilizam-se isolados cepas de referência (ATCC®), não sendo indicado utilizar isolados bacterianos clínicos.
4)
O teste de disco-difusão é utilizado para avaliar o perfil de suscetibilidade a diferentes antibióticos. Os resultados podem ser classificados como sensíveis, intermediários ou resistentes aos antibióticos testados. Em relação às características dessas classificações, assinale a alternativa correta.
c)Um resultado intermediário sugere que a infecção pode ser tratada com doses mais concentradas ou com a dose-padrão, se o antibiótico se concentra fisiologicamente no local da infecção.
RESPOSTA CORRETA
Um resultado sensível sugere que a infecção causada pelo patógeno pode ser tratada com a dosagem habitual recomendada do antibiótico para infecções do mesmo tipo. São observadas zonas de inibição com halos maiores, em relação às outras classificações de suscetibilidade.
Um resultado resistente sugere que o tratamento da infecção não será eficaz com esse antibiótico. São observadas zonas de inibição com halos menores, em relação às outras classificações de suscetibilidade. Na classe resistente, incluem-se as bactérias intrinsecamente resistentes aos antibióticos testados.
Um resultado intermediário sugere que a infecção pode ser tratada com doses mais concentradas, em relação à dose-padrão ou com a dose-padrão, se o antibiótico se concentra fisiologicamente no local da infecção, por exemplo, no trato urinário. São observados halos intermediários, em relação às outras classificações de suscetibilidade.
5)As infecções por bactérias multirresistentes são uma preocupação para a saúde pública, pois são graves e não respondem à maioria (ou a nenhum) dos antibióticos disponíveis no mercado. Para identificá-las, é necessário avaliar o perfil, em testes de sensibilidade aos antimicrobianos. Em relação aos resultados dos TSAs apresentados pelas bactérias multirresistentes, assinale a alternativa correta.
a)As cepas de Staphylococcus aureus classificadas como MRSA são aquelas resistentes aos antibióticos Meticilina/Oxacilina.
RESPOSTA CORRETA
As cepas de S. aureus classificadas como MRSA são aquelas resistentes aos antibióticos Meticilina/Oxacilina. Quando a cepa é resistente à Oxacilina, pode-se dizer que é resistente a todos os antibióticos β-lactâmicos, com exceção de cefalosporinas anti-MRSA (p. ex., Ceftaroline e Ceftobiprole).
Na realidade, cepas de S. aureus não são classificadas como MBL (metalo-β-lactamases), pois não são capazes de produzir essas enzimas. São algumas cepas da bactéria de P. aeruginosa que podem ser classificadas como MBL e são aquelas resistentes aos antibióticoscarbapenêmicos, mas sensíveis ao Aztreonam.
Sobre as cepas VRSA, na verdade referem-se às cepas de S. aureus, resistentes à Vancomicina e não à P. aeruginosa.
As cepas de enterobactérias classificadas como ESBL são aquelas produtoras de β-lactamases de espectro estendido e são resistentes a vários antibióticos β-lactâmicos de amplo espectro, como Aztreonam, Cefotaxima e Ceftazidima, mas sensíveis aos carbapenêmicos.
As cepas KPC referem-se à bactéria Klebsiella pneumoniae, produtora de carbapenemases, as quais conferem resistência aos antibióticos carbapenêmicos (Doripenem, Ertapenem, Imipenem e Meropenem). Existem outras enterobactérias produtoras de carbapenemases.
2. Testes de identificação de estafilococos
1)A taxonomia é um sistema de classificação dos seres vivos e é muito utilizada na microbiologia.
Com relação à classificação dos Staphylococcus, é correto dizer:
d)Gênero que inclui dezenas de espécies bacterianas.
RESPOSTA CORRETA
A família Micrococcaceae é composta pelos gêneros: Planococcus, Micrococcus, Stomatococcus e Staphylococcus. O gênero Staphylococcus inclui em torno de 40 espécies, e, entre estas, o Staphylococcus aureus é uma das mais importantes.
2)
Algumas espécies de estafilococos podem viver na microbiota normal ou causar infecções em humanos.
Em relação a essas espécies, é correto afirmar:​​​​​​​
e)Staphylococcus saprophyticus pode ser encontrado na mucosa do trato genital de mulheres jovens e causar infecção do trato urinário.
RESPOSTA CORRETA
As três espécies (S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus) podem fazer parte da microbiota em humanos. Intoxicação alimentar e infecções hospitalares e no trato urinário em mulheres estão associadas a S. aureus, S. epidermidis e S. saprophyticus, respectivamente.
3)Rita chegou à Unidade Básica de Saúde com lesão de pele caracterizada por um nódulo avermelhado, endurecido com eritema, e área amarelada com pus no centro da lesão.
Qual é o agente patogênico mais provável por causar essa lesão em Rita?​​​​​​​
b)Staphylococcus aureus.​​​.
RESPOSTA CORRETA
A formação de abcessos na pele na forma de furúnculos é comumente relacionada a infecções causadas por Staphylococcus aureus. S. epidermidis e S. saprophyticus estão relacionados a infecções em dispositivos hospitalares e do trato urinário em mulheres jovens, respectivamente. Estafilococos e Estreptococos são gêneros.
4)Testes disponíveis na microbiologia podem ter grande utilidade no diagnóstico clínico-laboratorial.
Com relação à função do teste da catalase, é correto dizer:​​​​​​​
c)Prova realizada com o intuito de diferenciar estafilococos de estreptococos.
RESPOSTA CORRETA
A prova da catalase é muito útil na diferenciação entre os estreptococos e os estafilococos. As três espécies de estafilococos de importância médica (S. saprophyticus, S. aureus, S. epidermidis) são catalase positiva; portanto, não permite sua diferenciação.
5)
Fluxogramas são aplicados rotineiramente no laboratório para identificação de estafilococos. Qual é o provável microrganismo identificado em resultados como: catalase positiva, DNAse negativa, não fermentador de manitol e novobiocina resistente?
a)Staphylococcus saprophyticus.
RESPOSTA CORRETA
Staphylococcus saprophyticus é a espécie identificada. S. aureus é DNAse positiva e fermentador de manitol. S. epidermidis é novobiocina sensível. Estreptococos e Estafilococos são gêneros bacterianos; portanto, não identificam o microrganismo.
3. Testes de identificação de estreptococos e enterococos
1)
A classificação de Lancefield é comumente utilizada para subdividir as diferentes espécies de microrganismos por meio do tipo de polissacarídeo presente na parede celular de cada um deles.
Com isso, qual estreptococo faz parte do grupo D de Lancefield?
E. bovis.
RESPOSTA CORRETA
O estreptococo pertencente ao grupo D de Lancefield é o E. bovis. O E. pyogenes pertence ao grupo A, e o E. agalactiae ao grupo B. Já os E. viridans não são tipáveis com Lancefield. O E. faecalis faz parte do grupo D, no entanto, não é um estreptococo, mas sim um enterococo.
Existe uma espécie de bactérias que está presente na microbiota vaginal normal das mulheres, em cerca de 25% delas.
Em casos de gravidez, é importante ter uma atenção maior, principalmente nos primeiros meses de vida do bebê.
Que espécie é essa?
b)E. agalactiae.
RESPOSTA CORRETA
Os estreptococos agalactiae são bactérias que implicam cuidado especial com gestantes, pois as infecções nos primeiros meses de vida do bebê podem causar meningite, síndrome da angústia respiratória ou até mesmo sepse fulminante. As outras espécies: E. pneumoniae, E. pyogenes, E. anginosos e E. faecium, não trazem esses riscos para os bebês.
3)O fator de virulência de uma bactéria é muito importante, já que tem relação com a capacidade de um microrganismo em infectar e se multiplicar no organismo.
Nesse contexto, qual é o mais importante fator de virulência dos estreptococos?
c)Proteína M.
RESPOSTA CORRETA
A proteína M é o principal fator de virulência dos estreptococos. Ela interfere na ingestão da bactéria por fagócitos, ou seja, é antifagocítica. Carboidrato C, catalase, γ-hemolíticos e α-hemolíticos não são considerados fatores de virulência para os estreptococos.
4)Os estreptococos e os enterococos são microrganismos com características muito semelhantes. Uma característica bem importante que ajuda na diferenciação dos dois é a prova da bile esculina.
Das opções a seguir, aponte outra característica que é capaz de diferenciá-los.
d)Crescimento em NaCl 6,5%.
RESPOSTA CORRETA
Os enterococos são os únicos microrganismos que conseguem crescer em meio NaCl 6,5%. As outras opções, como catalase negativa, formação em cadeia e coco gram-positivo, são características tanto dos estreptococos quanto dos enterococos. Padrões hemolíticos também não diferenciam as espécies, apesar de os enterococos serem mais não hemolíticos, eles também são, em alguns casos, α-hemolíticos.
5)A coleta da amostra do paciente pelo profissional da saúde vai depender do local da infecção e do teste que será realizado. Os testes sorológicos possibilitam determinar uma elevação dos títulos de anticorpos contra diversos antígenos estreptococos do grupo A.
Nesse caso, qual amostra você precisa ter para realizar tal teste?
d)Soro.
RESPOSTA CORRETA
A amostra necessária para a determinação do anticorpo é o soro sanguíneo. Sangue, pus, amostras da garganta e do local da lesão são, geralmente, utilizadas para fazer testes de cultura.
4. Procedimentos em urocultura
1)O exame de Gram em amostra de urina é uma alternativa para o diagnóstico de infecção urinária. O exame pode ser liberado no mesmo dia e direcionar o clínico na terapia antimicrobiana.
Assinale a alternativa correta referente ao procedimento do exame.
d)
Homogeneizar a amostra de urina, pipetar o volume de 10 ul e realizar a coloração de Gram.
RESPOSTA CORRETA
A amostra não deve ser centrifugada; observação no microscópio em aumento de 100x. A amostra deve ser homogeneizada e retirar o volume de 10 ul para coloração de Gram.
2)
As informações liberadas no laudo final do exame são de responsabilidade do profissional de nível superior com habilitação em análises clínicas. O que deve constar no laudo final?
Assinale a alternativa correta sobre como reportar o laudo de cultura de urina.
b)Tipo de amostra coletada (urina de jato médio, punção, saco coletor, urina coletada com sond, identificação bacteriana, teste de sensibilidade aos antimicrobianos e quantificação bacteriana em UFC/mL.
RESPOSTA CORRETA
O laudo da urocultura deve conter o tipo de amostra coletada (urina de jato médio, punção, saco coletor, urina coletada com sonda), a identificação bacteriana, o teste de sensibilidade aos antimicrobianos e a contagem bacteriana expressa em UFC/mL.
3)Os critérios de amostras inadequadas devem constar nas orientações do sistema interno do laboratório. Todas as amostras devem passar por avaliação crítica na fase pré-analítica.
Qual o volume adequado de urina para realização do exame de urocultura?
b)2mL.
RESPOSTA CORRETA
Ovolume adequado para o exame de urocultura é de 2mL. O volume de 10mL é recomendado para o exame qualitativo de urina e urocultura. Volumes maiores não são necessários.
4)Os procedimentos para coleta adequada da amostra de urina devem ser informados aos pacientes no cadastro do exame e/ou na retirada do frasco de coleta. A coleta da amostra de urina pode ser realizada em casa ou no laboratório, desde que siga as orientações corretas.
Assinale a alternativa que indica critérios adequados para rejeição da amostra de urina para o processamento de urocultura.
d)Urina coletada em recipientes não estéreis, urina sem refrigeração após 2h da coleta, urina de 24 horas, urina armazenada por 48h na geladeira.
RESPOSTA CORRETA
A urina deve ser coletada em frasco estéril e entregue no laboratório em 30 minutos à temperatura ambiente ou em 2h em temperatura refrigerada. A coleta deve ser realizada de uma única micção.
5)A amostra de urina com solicitação de cultura de urina ou urocultura deve ser semeada em meio de cultivo adequado ao crescimento de microrganismos responsáveis por infecção do trato urinário.
Qual o meio de cultura recomendável para o exame de urocultura?
c)Meio ágar cromogênico.
RESPOSTA CORRETA
Meio ágar Mueller-Hinton é utilizado para o antibiograma. Meio ágar MacConkey é utilizado para isolamento de bacilo gram-negativo. Os meios com substratos cromogênicos têm sido usualmente recomendados para a urocultura. Meio ágar batata é indicado para fungos e meio ágar TM, para Neisseria.
5. Características e identificação das enterobacteriaceaes
1)Enterobactérias do gênero Salmonella são potencialmente patogênicas, com espécies causando desde desconfortos intestinais que perduram por uma semana até casos mais graves, com sintomas semelhantes, porém mais intensos. Quando a bactéria consegue alcançar a corrente sanguínea, é comum ocorrer bacteremia e, em alguns casos, sepse e óbito.
A salmonelose e a febre tifoide são as patologias causadas pela Salmonella. O quadro mais grave descrito é gerado pela febre tifoide, que tem como agente etiológico a:
c)Salmonella typhi.
RESPOSTA CORRETA
A febre tifoide difere da salmonelose em virtude da maior intensidade dos sintomas apresentados pelo paciente, bem como maior duração do quadro infeccioso e grave potencial de causar complicações adicionais. O agente etiológico da febre tifoide, como o nome sugere, é a espécie Salmonella typhi. As subespécies S. salamae, S. arizonae, S. diarizonae e S. houtenae são todas alocadas no grupo Salmonella enterica e são todas agentes etiológicos de salmoneloses não tifoides.
2)A família Enterobacteriaceae é o maior e mais heterogêneo grupo de bacilos Gram-negativos de relevância clínica. Os gêneros da família são classificados com base principalmente em suas propriedades bioquímicas.
A identificação de enterobactérias em testes diagnósticos laboratoriais passa necessariamente pela realização de provas bioquímicas. As principais provas bioquímicas utilizadas no Brasil são:
a)Motilidade, H2S, citrato de Simmons, ureia de Christensen, fenilalanina e indol.
RESPOSTA CORRETA
A ocorrência de infecções por enterobactérias é endêmica; logo, as espécies de maior frequência encontradas variam de acordo com os países onde são estudadas. No Brasil, as principais provas bioquímicas e, por consequência, as mais utilizadas são as de motilidade, H2S, citrato de Simmons, ureia de Christensen, fenilalanina e indol.
3)As enterobactérias são encontradas majoritariamente no trato intestinal, tanto causando infecções quanto compondo a microbiota desse sítio. Além de no intestino, também é possível encontrar enterobactérias em outros sítios no organismo.
Assinale a alternativa que indica o sítio com a maior frequência de infecções após o trato gastrintestinal.
b)Trato urinário.
RESPOSTA CORRETA
As infecções por enterobactérias no trato gastrintestinal são certamente as mais frequentes. Logo depois, são as infecções do trato urinário, especialmente as infecções urinárias que ocorrem por repetição em mulheres afetadas por E. coli. Infecções no SNC por E.coli são pouco frequentes, assim como no sistema cardiovascular, em virtude da dificuldade das bactérias de alcançarem o sangue. Os casos de pneumonia, embora ocorram, não são comparáveis à quantidade de infecções do trato urinário.
4)O gênero Shigella é composto de quatro espécies: Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii e Shigella sonnei. A shigelose, doença causada por todos os sorotipos de Shigella, se dá quando as bactérias colonizam o íleo terminal e/ou o cólon intestinal. Além das provas bioquímicas, métodos moleculares também são úteis no diagnóstico de infecção por Shigella.
Existe um método que pode ser aplicado utilizando-se diretamente as fezes do paciente infectado. Qual método é esse?
d)PCR.
RESPOSTA CORRETA
A utilização da técnica de PCR tem-se mostrado cada vez mais versátil em diagnósticos de infecções bacterianas, como tuberculose, e também em casos de shigelose. Verificou-se que é possível utilizar a amostra de fezes do paciente e detectar genes importantes de maneira direta. As técnicas de Western e Northern são utilizadas no estudo de proteínas, bem como a de ELISA, que é fundamentada por princípios imunológicos. A hibridização de DNA baseia-se na complementaridade de sequências de DNA, e não seria possível utilizá-la com o tipo de amostra apresentado.
5)
As enterobactérias podem ser classificadas de diversas formas. Uma delas é de acordo com o sítio que infectam. Seguindo esse critério, têm-se três classificações:
1. patógenos internos e externos ao trato gastrintestinal;
2. patógenos essencialmente internos ao trato gastrintestinal;
3. patógenos externos ao trato gastrintestinal.
A alternativa que apresenta bactérias que fazem parte do grupo 1 é:
a)E. coli e Salmonella.
RESPOSTA CORRETA
As bactérias que podem ser encontradas tanto interna quanto externamente ao trato gastrintestinal são a E. coli e as bactérias do gênero Salmonella, portanto bactérias de abrangência infecciosa versátil. Bactérias dos gêneros Vibrio e Campylobacter são essencialmente internas; já Morganella, Klebsiella e Proteus são classificadas como externas ao trato gastrintestinal.
6. Hemocultura
1)A S. aureus é uma bactéria que faz parte da microbiota natural em seres humanos. Ela pode ser transmitida por meio dos aerossóis liberados durante um espirro, não causando grandes problemas desde que permaneça longe da corrente sanguínea do paciente. No entanto, uma vez na corrente sanguínea, pode induzir a uma resposta inflamatória e potencialmente à sepse.
Imagine que uma maternidade está sofrendo uma epidemia de sepse na ala de recém-nascidos, que ficam numa mesma sala mas não entram em contato físico. A análise de hemocultura de um dos bebês identificou a bactéria S. aureus como agente etiológico.
Sabendo do habitat da bactéria em indivíduos saudáveis, assinale a alternativa que indique corretamente a fonte do patógeno.
a)Fossa nasal.
RESPOSTA CORRETA
Em indivíduos sadios, a S. aureus é parte da microbiota natural, sendo encontrada na pele e nas fossas nasais. A entrada dessa bactéria no sangue, quando não tratada ou eliminada pelo sistema reticuloendotelial, leva a bacteremia e pode resultar em sepse. Órgãos internos, como fígado, rins, coração e intestino delgado, não poderiam ser a fonte do patógeno, uma vez que este fica naturalmente em regiões expostas, como pele e fossas nasais. A epidemia foi causada por um patógeno alojado na fossa nasal de um recém-nascido que, ao tossir ou espirrar, liberou gotículas com o patógeno, as quais foram transmitidas e causaram a infecção nos outros recém-nascidos.
2)Em indivíduos sadios, o sangue é um liquido estéril, tendo comportamento coloidal, devido aos vários tipos celulares que o constituem. No entanto, alguns organismos da microbiota natural do ser humano são capazes de atingir o sangue, mas sem grandes repercussões, pois são rapidamente eliminados pelo sistema reticuloendotelial.
Assinale a alternativa que indica corretamente o nome desse situaçãono organismo.
d)Bacteremia.
RESPOSTA CORRETA
A invasão do sangue por microrganismos que fazem parte da microbiota ocorre de forma corriqueira, sem que o indivíduo saiba, pois rapidamente o sistema reticuloendotelial elimina o invasor, impedindo que este se multiplique e cause maiores complicações. Essa condição de invasão mais branda é chamada de bacteremia. Diferentemente, em casos nos quais o sistema não é eficiente em eliminar o patógeno invasor, pode ocorrer a sepse, que é um quadro de inflamação sistêmica. Ela pode ainda evoluir para a sepse grave, que causa a disfunção de diversos órgãos, e, por fim, causar o choque séptico, fase em que há falência de órgãos e queda brusca da pressão arterial. O quadro de meningite pode gerar sepse, mas o foco inicial da infecção são as meninges do cérebro e o liquor. Logo, o sistema reticuloendotelial não tem nenhuma função mais proeminente nesse tipo de patologia.
3)Os frascos de hemocultura contêm o meio de cultura, em geral TSB, além de outras substâncias que servirão para o crescimento dos possíveis agentes etiológicos. Alguns meios são suplementados de forma a fornecer um suporte osmótico aos patógenos, permitindo que eles cresçam.
Assinale a alternativa que indica o reagente que fornece suporte osmótico.
d)Sacarose.
RESPOSTA CORRETA
A sacarose é adicionada em grandes concentrações aos meios nos frascos de hemocultura, pois causa estabilidade osmótica, o que impede a lise dos microrganismos patogênicos e também permite seu crescimento como fonte de energia. Substâncias como EDTA e SPS funcionam, nas hemoculturas, como anticoagulantes, impedindo que as células sanguíneas se aglomerem. O PABA é um ácido (ácido paraminobenzoico) que impede a ação de sulfonamidas, uma classe de antibióticos. O CO2 é utilizado como gás em frascos para cultura anaeróbica, quando há necessidade de retirar o oxigênio molecular do frasco.
4)O volume de sangue coletado varia de acordo com o peso e a volemia do paciente. Imagine que uma criança pesando 10kg e com volemia > 200mL/kg necessite fazer uma hemocultura por suspeita de infecção sanguínea. Qual alternativa indica o volume total correto que deverá ser coletado?
b)6mL.
RESPOSTA CORRETA
O volume de sangue a ser coletado em crianças, considerando-se os valores de peso e volemia, variam bastante. Para uma criança pesando até 12,9kg e com volemia 200, recomenda-se a coleta de 6mL. Para crianças com peso ≤ 1kg e volemia entre 55-99, o volume de coleta é de 2mL. Entre 1,1 e 2kg e volemia entre 100 e 200, o recomendado é 4mL de sangue. Na faixa entre 13-36kg de peso, o volume aumenta bastante, chegando a 20mL com volemia 800. E acima dos 36kg de peso e volemia 2.200, o volume pode chegar a até 60mL, mas o mais usual é a coleta de 40 mL.
5)Os custos para implementação da hemocultura automatizada ainda são muito altos, sendo esse um dos maiores impeditivos para o uso dessa metodologia. Estudos mostram que a automatização da hemocultura oferece diversas vantagens, quando comparada com a hemocultura manual. No entanto, existe um benefício do processo automatizado que é considerado o mais relevante, pois é fundamental em casos de suspeita de infecção no sangue.
Qual é a alternativa que aponta a principal vantagem da metodologia automatizada?
c)Obtenção de resultados mais rapidamente.
RESPOSTA CORRETA
Em casos de infecção do sangue, a velocidade na identificação do agente etiológico é fundamental, pois essa identificação fornece informações essenciais para determinar qual tratamento será aplicado ao paciente. Métodos de hemocultura automatizados podem oferecer resultados em até 48 horas, mas a média é de cinco dias, frente aos sete dias da hemocultura manual. O monitoramento contínuo das amostras, juntamente com o processo de inversão dos frascos, são fatores determinantes na acurácia do resultado, mas não influenciam na velocidade da obtenção dos resultados. Já o uso de frascos de plástico é causa e consequência da diminuição dos riscos de contaminação, tanto das amostras quanto de quem maneja o equipamento.
7.Infecções bacterianas sexualmente transmissíveis
1)A gonorreia é uma importante doença bacteriana sexualmente transmissível.
Quanto às características da bactéria que a causa e os sintomas da doença, assinale a alternativa correta. 
c)Neisseria gonorrhoeae são cocos dispostos em dupla que, quando não tratados, podem levar ao acúmulo de imunocomplexos nas articulações.
RESPOSTA CORRETA
Neisseria gonorrhoeae é um diplococo (disposto em dupla) Gram-negativo com coloração rosa na microscopia. Quando não tratada, a gonorreia pode se disseminar e se tornar uma doença sistêmica grave em homens e mulheres, como na resposta imune exarcebada nas articulações.
2)Os sinais e sintomas da sífilis podem variar de acordo com o estágio da doença.
Qual das opções a seguir melhor caracteriza um dos estágios da infecção?
d)Em casos não tratados da doença, a bactéria pode se disseminar e o indivíduo pode apresentar erupções cutâneas generalizadas, caracterizando o estágio secundário da doença.
RESPOSTA CORRETA
Durante o estágio primário da doença, pode haver o surgimento de uma lesão local, denominada de cancro duro. A disseminação para membranas mucosas e ossos é característica da sífilis secundária. Na fase latente, indivíduos infectados não apresentam qualquer manifestação clínica.
3)A identificação e caracterização do agente infeccioso é fundamental para o monitoramento e tratamento da sífilis.
Em relação aos aspectos morfológicos do Treponema pallidum, qual opção abaixo melhor descreve essas características?
b)Bacilos alongados e delgados que apresentam alta mobilidade por meio de filamentos axiais.
RESPOSTA CORRETA
Treponema pallidum é um microrganismo espiralado e alongado. Por ser muito delgado, não é corado pelo método de Gram, a menos que seja empregada imunofluorescência ou iluminação de campo escuro, por exemplo. Apresenta filamentos axiais (endoflagelos) que possibilitam mobilidade à célula. Não é considerado intracelular obrigatório.
4)A Neisseria gonorrhoeae, também conhecida como gonococo, provoca a gonorreia.
Em relação ao diagnóstico laboratorial da gonorreia, qual opção está correta
e)O cultivo em meio específico é eficiente e permite o teste de sensibilidade microbiana.
RESPOSTA CORRETA
O esfregaço em lâminas preparado com coloração de Gram pode ser ineficiente em mulheres, menos específico, podendo ocorrer falso-negativos. A cultura de N. gonorrhoeae é considerada o “padrão ouro” para o diagnóstico, com alta sensibilidade, muita especificidade e baixo custo. Além do mais, o uso da cultura permite a realização do teste de sensibilidade microbiana.
5)A escolha do método de análise é essencial para o profissional responsável no laboratório.
Quanto ao fluxograma dos testes realizados na rotina, qual opção descreve melhor uma boa escolha?
a) Testes confirmatórios são necessários para excluir possíveis falso-positivos.
RESPOSTA CORRETA
Os testes de triagem são muito importantes na clínica e amplamente conhecidos por apresentar alta sensibilidade e menor custo. Portanto, geralmente os testes de triagem são escolhidos como métodos de primeira opção. A desvantagem de testes de triagem é o aumento da chance de resultados falso-positivos, consequência da alta sensibilidade e baixa especificidade. Nestes casos, os testes confirmatórios com alta especificidade são utilizados para excluir possíveis falso-positivos obtidos na triagem. No entanto, métodos com alta sensibilidade e não especificidade são preferíveis como primeira opção.
8;Infecções do sistema nervoso central
1)O diagnóstico precoce das infecções do SNC é fundamental para o sucesso do tratamento. Um dos aspectos mais importantes do diagnóstico é a identificação do agente etiológico, uma vez que essa informação determina qual tratamento será utilizado.
Em relação aos casos de suspeita de meningite, infecção que pode ser causada por diferentes tipos de bactérias e outros microrganismos, o procedimento diagnóstico inicial a ser realizado não é recomendado apenas em casos em que opaciente apresenta sinais de aumento da pressão intracraniana, causado, por exemplo, por tumores ou traumatismos.
Assinale a alternativa que indica corretamente o procedimento inicial a ser realizado em pacientes com suspeita de meningite e sem sinais de aumento da pressão intracraniana:
a)Punção lombar.
RESPOSTA CORRETA
Em casos de suspeita de meningite, é indicado realizar a análise do liquor do paciente, que deverá ser obtido por meio de punção lombar entre as vértebras L3 e L4. Uma vez extraído, o liquor poderá ser usado para cultura microbiológica, PCR para identificar DNA ou RNA, distinção entre bactérias Gram positivas e Gram negativas pelo teste de coloração de Gram e para a dosagem de glicose. Durante a punção lombar, é possível, inclusive, mensurar a pressão intracraniana e utilizar a medida para comparar com valores de referência.
2)As meningites podem ser classificadas em purulentas e não purulentas, de acordo com seu agente etiológico. No caso das purulentas, os agentes eitológicos em geral são bactérias, e das não purulentas podem ser vírus, fungos ou até protozoários. As meningites purulentas ainda ocorrem com frequência considerável, mesmo com tratamentos antimicrobianos e vacinas cada vez mais eficazes.
Assinale a alternativa que lista corretamente as três principais bactérias causadoras de meningite:
c)N. meningitidis, S. pneumoniae e H. influenzae.
RESPOSTA CORRETA
Os agentes etiológicos mais comuns a causarem meningite são as bactérias N. meningitidis, H. influenzae e S. penumoniae, representando, respectivamente, as maiores causas de meningite meningocócica, pneumocócica e por H. influenzae. As bactérias E. coli e S. aureus podem causar meningite em casos muito raros. Já a bactéria X. fastidiosa é um fitopatogeno, afetando principalmente plantações de cítricos. B. subtilis e P. aeruginosa não estão relacionadas à meningite.
3)As meninges são um sistema de membranas que funcionam revestindo e protegendo o SNC, a medula espinhal, o tronco encefálico e o encéfalo. O conjunto de meninges é composto por três camadas: dura-máter, aracnoide e a pia-máter. Entre a pia-máter e a aracnoide encontra-se o líquido cerebrospinal ou liquor. O nome meningite, de maneira geral, refere-se à infecção e inflamação de regiões específicas.
Assinale a alternativa que apresenta corretamente as regiões afetadas nas meninigites:
c)Leptomeninge (aracnoide e pia-máter) e liquor.
RESPOSTA CORRETA
Leptomeninge e liquor. ​​​​​​​Leptomeninge é o nome dado à associação da aracnoide com a pia-máter; essas duas membranas são mais internalizadas, próximas ao encéfalo. O líquido cerebroespinal fica entre essas duas membranas no espaço subaracnoideo. A dura-máter, por sua vez, localiza-se mais externamente, fixada ao osso do crânio, portanto menos suscetível à infecção. A propagação da meningite é favorecida pela fluidez do liquor, porém outras regiões do SNC, como o tronco encefálico e a medula espinhal, são afetadas somente em estágios posteriores da infecção.
4)O diagnóstico de infecções do SNC geralmente demanda a realização de uma punção lombar para a retirada do líquido cerebrospinal, LCS. Realizou-se a análise do LCS de um paciente que apresentava diversos sintomas relacionados à infecção do SNC. O exame apresentou os seguintes resultados:
Pressão mm H2O: elevada
Células (ul): 200-5000; com mais de 90% de leucócitos polimorfonucleares
Proteínas (mg/100cc): maior que 100
Glicose (LCS/sangue): menor que 0,6
Assinale a alternativa que apresenta o diagnóstico correto do paciente.
b)Meningite bacteriana aguda.
RESPOSTA CORRETA
Meningite bacteriana aguda. ​​​​​​​Na meningite bacteriana aguda e na viral aguda, ocorre elevação de leucócitos (pleiocitose) e de proteínas no LCS, porém, nas infecções causadas por bactérias, observa-se a predominância de leucócitos polimorfonucleares e de neutrófilos, acompanhada de baixa nos níveis de concentração de glicose (< 0,6); enquanto nas infecções não purulentas a predominância é de elevação linfócitos. nos casos meningites bacteriana subaguda ou crônica, também observa-se uma tendência na quantidade linfócitos, bem como níveis proteicos, e queda no nível glicêmico.
5) Um paciente dá entrada no pronto-socorro se queixando de forte dor de cabeça. Após a realização de diversos exames, conclui-se que a causa é uma região purulenta encapsulada decorrente de cerebrite. O exame microbiológico detectou a bactéria Streptococcus viridans como agente etiológico.
Assinale a alternativa que indica corretamente o tipo de infecção que acomete o paciente:
b) Abscesso cerebral.
RESPOSTA CORRETA
O abscesso cerebral é o nome dado a um foco isolado de infecção bacteriana no cérebro, que fica contido em uma cápsula fibrosa. As bactérias que causam abscesso cerebral são de espécies diferentes daquelas que causam encefalite, meningite e meningoencefalite. O aneurisma, por sua vez, não é causado por bactérias e é caracterizado pelo enfraquecimento de vasos sanguíneos e consequente aumento da sua dilatação.
9. Micoses superficiais, cutâneas e subcutâneas
1) As micoses podem se manifestar na forma de tineas. Esse nome era utilizado para se referir às lesões fúngicas do couro cabeludo, unhas e pele glabra provocadas pelos fungos dermatófitos. O termo, inclusive, foi título de um livro considerado marco na micologia médica, Les teignes. Desse modo, associe o local de infecção com o nome da tinea correspondente.
1. Unhas
2. Região inguinal
3. Pele
4. Mãos
Assinale a alternativa que corresponde à sequência correta.
c)Tinea unguium, Tinea cruris, Tinea imbricata e Tinea manuum.
RESPOSTA CORRETA
Tinea unguium infecta as unhas; Tinea cruris, região inguinal, períneo e dobra perianal; Tinea imbricata, pele glabra; Tinea manuum, as mãos; Tinea coporis, pele glabra; e Tinea nigra é uma micose superficial que acomete a palma das mãos, a planta dos pés e o couro cabeludo.
2) A piedra branca e a piedra preta são micoses superficiais que acometem os seres humanos. Apesar dos nomes semelhantes, elas infectam locais diferentes no corpo: a piedra branca, os pelos pubianos, perianais, no escroto, axilares, na barba e no bigode; a piedra preta, os cabelos. Além disso, apresentam agentes etiológicos diferentes. Considerando essa informação, assinale a assertiva que apresenta as espécies fúngicas associadas à piedra branca e à piedra preta respectivamente.​​​​​​​
a)Trichosporon sp. e Piedraia hortae.
RESPOSTA CORRETA
A piedra branca é causada por Trichosporon sp. e a piedra preta, por Piedraia hortae. Tinea capitis e Tinea corporis são formas de manifestação clínica de infecções fúngicas e Hortaea werneckii é o agente da Tinea nigra.
3) Nas micoses superficiais, cutâneas e subcutâneas, diversos agentes fungicas podem ser descritos com manifestações variadas. Considerando as informações gerais sobre o assunto, leia as informações abaixo e assinale a alternativa correta.
c) Fungos demáceos causam feohifomicoses, como a Tinea nigra.
RESPOSTA CORRETA
Os fungos geofílicos causam maior reação inflamatória. Os fungos dermatófitos não afetam as mucosas. As feohifomicoses são causadas por fungos demáceos, como o Hortaea werneckii, agente da Tinea nigra. As micoses subcutâneas, representadas pela esporotricose, podem ter representantes dimórficos. Os fungos infectam tanto animais quanto o homem.
4) Entre os gêneros que causam micoses cutâneas, há o Trichophyton, que apresenta várias espécies associadas às infecções fúngicas. Considerando a espécie fúngica antropofílica, que é mais prevalente do gênero e tem a colônia (verso e reverso) referente à imagem abaixo, assinale a alternativa que corresponde às características da espécie relacionada.
d)Trichophyton rubrum.
RESPOSTA CORRETA
O fungo que corresponde às características e é mais prevalente nas infecções do gênero é o Trichophyton rubrum, pois a colônia apresenta no verso textura algodonosa, pregas radiais com uma saliência no centro e coloração branca evoluindo para vermelha, assim como no reverso.
5) O gênero Microsporum é um dos presentes nas micoses cutâneas e apresentaduas espécies principais: M. canis e M. gypseum. Sobre essas espécies, leia as assertivas e assinale a correta.​​​​​​​
d)Quando positivo para M. gypseum, as características da colônia já representam diagnóstico micológico.
RESPOSTA CORRETA
O M. canis é um fungo zoofílico e o M. gypseum, geofílico. O M. gypseum não é visível pela lâmpada de Wood, mas o M. canis sim. Por meio do exame direto microscópico, é possível distinguir as espécies com base na morfologia dos macroconídios. Devido às características da colônia, é possível confirmar o diagnóstico. O M. canis provoca lesões no couro cabeludo, mas o M. gypseum raramente o faz.
3 Subprodutos(4 pontos cada)
1°. Caso Clinico-Diagnostico de infecção urinaria
Uma criança do sexo masculino, de 11 meses de idade, foi levada pela mãe ao consultório do pediatra em visita de rotina, conforme orientação anterior, para acompanhamento de recorrência de infecção urinária. A única queixa apresentada foi de anorexia. O exame físico não revelou febre, irritabilidade ou dor à compressão vesical, mas um moderado atraso pôndero-estatural. A criança não era circuncidada e apresentava um discreto refluxo vesico-ureteral, como constatado em cistouretrografia miccional realizada anteriormente.
1.Qual o provável patógeno, justifique. 
O provável patógeno é Escherichia Coli. O meio de cultura foi H Cled, que permite crescimento das enterobacterias, meio não seletivo e diferencial, e fornece a prova da lactase. No meio de cultura houve fermentação da bactéria, sendo possível identificar E.coli, já que trata-se de uma bactéria lactase positiva, uma enzima fermentadora de açúcares, já Proteus não fermenta lactose.
 2.Como você liberaria o laudo, considerando que na cultura foi utilizado uma alça de 1ul.Demonstre os cálculos.
 Urocultura
 Resultado: Escherichia Coli. 
Contagem de colônia: 100.000 UFC/ml 
100 UF-------------0,001
 X--------------1ml 
X=100.000 UFC/ml 
3. Considerando o exame inicial EAS do paciente quais as alterações são sugestivas de infecção urinária. 
Aspecto turvo da urina, devido aumento quantidade de células(bactérias) presentes na urina, aumentando sua turvação; 
Presença de leucócitos, indicativo de inflamação, pode ser decorrente de infecção urinaria; 
Presença de Nitrito positivo, indicativo de infecção, pois maioria das bactérias que causa infeção urinaria converte nitrato em nitrito; 
Presença de proteína, indicativo de lesão glomerular, já que os glomérulos não permite a filtração de proteína. 
Presença de cristais fosfato amorfos da urina alcalina, que se apresentam como grânulos incolores, contribuindo para possível formação de cálculos renais. 
4.Cite 3 causas de infecção urinária complicada. 
Defeitos congênitos-Refluxo vesico ureteral, urina em vez descer, retornar ureter, causando infecção; Cálculos renais; Microrganismo multirresistente; Imunossupressão.
2°. SUBPRODUTO 2
Elaboração infográfico, enterobacterias sorteadas por grupo
Modelo:
3°. SUPRODUTO 3
Elaborar laudo de antibiograma com resultados obtidos nas aulas práticas (Obs.não faltar aula pratica)
Tabela 1:Valores de halos inibitórios esperados para Escherichia coli
Tabela 2:Valores de halos inibitórios esperados para Proteus Mirabilis
Tabela 3:Valores de halos inibitórios esperados para Staphylococcus Aureus
Exercícios extras para substituir desafios:
Atividade 1 (2 pontos)
1. Descreva e caracterize as principais infecções das vias aéreas superiores 
Faringite bacteriana, refere-se a infecção que acomete a faringe que é formada pela nasofaringe, orofaringe, hipofaringe, adenoides e área tonsilar. Cerca de 25% dos casos em crianças e 10% em adultos são causados pela bactéria Streptococcus pyogenes, infeção que é denominada faringite estreptocócica. Faringoamigdalite acomete tanto a faringe e as amídalas, as amidalas apresentam edemaciada(inchado), com placas de pus, o diagnóstico é clinico. Escarlatina, é uma condição clínica, evolução da faringite, a bactéria Streptococcus pyogenes se multiplica no sitio da infeção e produz toxinas (exotoxina pirogênica streptocócica) que cai na circulação, causando sintomas em outros sítios. Clinicamente a escarlatina é faringite acompanhada de “rash” manchas avermelhadas principalmente na face, mãos, corpo e língua de framboesa. 
Sinusite, é uma inflamação da mucosa dos seios da face, região do crânio formada por cavidades ósseas ao redor do nariz, maçãs do rosto e olhos.
 Otite: é todo tipo de inflamação/infecção na orelha média ou externa, na mucosa do ouvido ou no tímpano, causada principalmente pela entrada de microrganismos na orelha e tendo como sintoma mais comum a dor de ouvido, diagnostico é clinico. 
Otite Media: Infecção do ouvido médio, geralmente acomete crianças (até 3 anos), os agentes mais comumente isolados são Streptococcus pneumoniae; Haemophilus influenzae e Streptococcus pyogenes.
 Otite Externa: Infecção do canal auditivo externo, patógenos mais comum são Pseudomonas aeruginosa, Proteus e Staphylococcus aureus. 
2. Quais os principais microrganismos associados as infecções do trato respiratório superior
Faringite bacteriana: Streptococcus pyogenes. 
Faringite viral: Haemophilus influenzae
 Epiglotite: Haemophilus influenzae tipo b (aguda e grave, mas rara após a introdução da vacina)
 Sinusite: Streptococcus pneumoniae e Haemophilus influenzae tipo b (>50% dos casos) S. pyogenes, M. catarrahalis, S. aureus.
 Otite média: Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenzae E Streptococcus pyogenes. Otite externa: Pseudomonas aeruginosa, Proteus, Staphylococcus aureus. 
3. Como fazer o isolamento e identificação do Streptococcus pyogenes, principal agente causador de faringites bacterianas.
 Após a coleta, cada espécime ira ser inoculado por técnica de esgotamento, em placas de Petri contendo "Tryptose blood agar base" (Difco Laboratories, Detroit, MI, USA), acrescido de 5% de sangue desfibrinado de carneiro. As placas serão incubadas a 35-37ºC em atmosfera de microaerofilia por 24-48 horas. 
As colônias beta-hemolíticas presentes no agar sangue serão transferidas para caldo "Brain heart infusion" (Difco) e após 18-24 horas de incubação serão coradas pela técnica de Gram. As colônias beta-hemolíticas constituídas por cocos Gram-positivos serão inicialmente testadas quanto à produção da enzima catalase, para caracterizar o microrganismo como pertencente ao gênero Streptococcus. 
A diferenciação de S. pyogenes de outros estreptococos beta-hemolíticos é feita pelos testes de sensibilidade a bacitracina e de grupagem sorológica.
 4.Explique o teste de Imunodifusão radial para diagnostico de difteria (Corynebacterium diphtheriae) 
O diagnóstico definitivo de Corynebacterium diphtheriae é dado pela identificação bioquímica, baseada na fermentação de açúcares, hidrólise da ureia, redução do nitrato, oxidase e catalase. As amostras de casos suspeitos serão semeadas diretamente, do swab utilizado para colheita em meio de Pai e incubadas por 24 horas, a 37oC. Nas amostras de casos suspeitos, foram processados esfregaços, submetidos à coloração de Albert-Laybourn, com o objetivo de observar, microscopicamente, a presença de bacilos com características morfotintoriais do Corynebcterium spp. A partir do crescimento bacteriano em meio de Pai, será semeado em ágar-sanguecistinatelurito (ASCT), com a finalidade de se obterem colônias isoladas, após incubação, por 48 horas, a 37oC. 5. Como pode ser definida pneumonia comunitária e a de origem hospitalar. A pneumonia adquirida na comunidade é uma infecção pulmonar que se desenvolve em pessoas que não estão em um hospital. Muitas bactérias, vírus e fungos podem causar pneumonia, os sintoma mais comum de pneumonia é tosse que produz escarro, dor torácica, calafrios, febre e falta de ar também são comuns. A Pneumonia Hospitalar é definida como aquela que ocorre 48 horas ou mais após a internação, o qual o paciente não apresentava antes de ser internado, portanto, incubada no momento da admissão hospitalar
 6. Cite alguns fatores de risco associados as pneumonias. 
 Fumo: provoca reação inflamatóriaque facilita a penetração de agentes infecciosos; 
 Álcool: interfere no sistema imunológico e na capacidade de defesa do aparelho respiratório; 
 Ar-condicionado: deixa o ar muito seco, facilitando a infecção por vírus e bactérias; 
 Resfriados malcuidados; Mudanças bruscas de temperatura
 7. Qual agente mais isolado nas pneumonias comunitárias. E nas pneumonias hospitalares? 
Agentes mais isolados nas pneumonias comunitárias: Streptococcus pneumoniae, Haemophylis influenza, Streptococcus aureus e as enterobacterias. 
Agentes mais isolado nas infecções hospitalares: em sinusites de origem intrahospitalar: Staphylococcus aureus; Pseudomonas aeruginosa; Fungos como Cândida spp.
 8. Como fazer o isolamento e identificação do Streptococcus pneumoniae 
A diluição que permitiu o crescimento de colônias isoladas foi escolhida para a caracterização morfo-colonial, classificação pela hemólise quando presente e isolamento em ágar sangue, meio de cultivo não seletivo, diferencial para alfa, beta e gama hemólise dos Streptococcus, na qual foi incubado a 37ºC por 24 a 72 horas em microaerofilia. 
Baseado na observação das colônias apresentam hemólise parcial ou alphahemólise no meio Agar Sangue e pela observação da inibição do crescimento ao redor do disco de optoquina.
Atividade 2 (2 pontos)
Exercícios - Meningites - LÍQUOR
CASO CLÍNICO
 Paciente do sexo masculino, 1 ano e 4 meses dá entrada ao Pronto Socorro com queixa principal: de febre iniciada há cerca de 48 horas. O Paciente foi avaliado e encontrava-se hígido, há 48 horas começou a apresentar febre alta (39,5 °C), associado a vômitos, inapetência, astenia e irritação. Mae relata que a criança tem cartão vacinal completo. Fez uso de dipirona, não havendo melhora. Procurou então assistência médica, onde foram percebidas pequenas petéquias, inicialmente em região genital e posteriormente em todo o corpo. Paciente foi encaminhado para o Hospital Infantil para tratamento. Foi solicitada a punção lombar diagnóstica, exames de imagem, hemoculturas e foi iniciada a antibioticoterapia empírica com vancomicina. Após um dia de internamento, a criança está respondendo bem ao tratamento com melhora da febre, mas ainda apresentando petéquias, irritação e inapetência.
Resultados dos exames 
Líquor: Cor e aspecto: Turvo
 Contagem de Glóbulos Brancos: 2000 cels/µl (VR: 0-5 cél/ µl)
 Contagem Diferencial: 71% de neutrófilos, 3% monócitos, 26% Linfócitos. 
Glicose: 34 mg/ dl (VR: 45-100mg/dl Líquor) 
Proteínas: 150 mg/ dl (VR: 15 a 50mg/dl) 
Exame Laboratorial: Hemograma: Leucocitose (23000), neutrofilia (70%), com desvio para esquerda (13% de Bastões) e plaquetopenia (50000).
Microscopia pelo método de Gram BACTERIOSCOPIA Material Clínico: Líquor Resultado: Frequentes leucócitos Presença de diplococos gram-negativos.
a) A partir desses resultados qual diagnóstico provável?
Segundo as informações relatadas do estado clinico do paciente, febre alta (39,5 °C), associado a vômitos, inapetência, astenia, irritação, apresenta petequias pelo corpo, além de presença de diplococo gram negativo, achados no Líquor apresentando turbidez, com aumento glóbulos brancos, com predomínio de leucócitos, proteínas elevada e glicose menor que 45mg/dl ,o nível liquórico de proteína está comumente elevado e o nível de glicose está diminuído ,marcadores sugestivo de meningite bacteriana, provavelmente causada pela bactéria Neisseria meningitidis. 
b) O resultado da Bacterioscopia tem algum significado? Por que?
 Sim, o resultado nos revelou leucócitos frequentes e diplococos gram negativos. Que nos sugere um quadro bacteriano pelo patógeno Neisseria meningitidis, o qual apresenta resistência natural à vancomicina. Sendo necessário nova avalição farmacológica.
c) O resultado da glicose líquorica tem algum significado clinico? Justifique 
Sim, pois através da glicose líquorica é possível diferenciar uma meningite viral de uma bacteriana. No caso em questão, a glicose do paciente encontra-se abaixo do valor de referência, o que reforça a probabilidade da meningite estar sendo causada por uma bactéria. Valores baixos de glicose no LCR podem ser de grande valor diagnóstico para determinar os agentes causadores de meningite.
d) Os níveis elevados de proteína são importantes? Explique sua resposta?
 Sim, devido em quadro de meningite causada por um agente bacteriano, ocorre uma elevação do nível de proteínas, sendo este mais um ponto marcante para comprovar o diagnóstico. As causas de elevação das proteínas do LCR incluem danos à barreira hematoencefálica, produção de imunoglobulinas no SNC, diminuição da depuração das proteínas normais e degeneração do tecido neural.
Como caso em questão, o aspecto turvo do Líquor, indica níveis elevados de proteínas, glóbulos brancos e vermelhos e bactérias, o que sugere meningite bacteriana.
e) Nessa situação como estaria os níveis de lactato do paciente? Justifique 
No caso em questão, a concentração de lactato estaria elevada, com valores acima de 35 mg/dl. A glicólise anaeróbica aumenta acentuadamente as concentrações de lactato.
f) O resultado do hemograma está concordante com a suspeita diagnóstica do paciente? 
O exame laboratorial apresentou aumento de leucócitos(leucocitose), com predomínio de neutrófilos(neutrófilia) marcadores indicativos de infecção bacteriana. 
Desvio à esquerda no hemograma é um sinal de produção aumentada de neutrófilos bastões (células jovens) sendo que na maioria dos casos, é indicativo de um processo infeccioso agudo em curso.
 A presença de um percentual maior dessas células jovens, associado a uma leucocitose com neutrófila, sugere fortemente a existência de uma infecção aguda.
 g) Considerando a idade da criança ela já teria tomado as vacinas que protegem contra as meningites de origem infecciosas? Especifique essas vacinas e quando são aplicadas. 
Sim. De acordo com calendário Nacional de vacinação, é disponível no Sistema único de Saúde, vacina contra meningocócica C, sendo que 1° dose aos 3meses ,2° dose aos 5 meses, e aos 12 meses a 1° dose de reforço. Provavelmente a vacina tomada foi a disponibilizada no SUS que protege contra a meningite sorotipo C, pois tem maior prevalência dos casos. Entretanto, a tendência para aumento para outros sorotipo de meningite acaba aumentando, por exemplo casos de meningite B, pois a vacina apenas é disponível no particular e custo alto.
Atividade 3 (2 pontos)
ATIVIDADE - DIAGNÓSTICO INFECÇÕES SEXUALMENTE TRANSMISSÍVEIS
Elaboração infográfico
Atividade 4 (2 pontos)
Envio da atividade de Fungo
1- Sobre as micoses superficiais complete o quadro
	
	Etiologia
	Características clínicas
	Diagnóstico
	Ptiriase versicolor
	Malassezia furfur
	Pitiríase versicolor, lesões hipo ou hiperpigmentadas e eritematosas, acomete principalmente membros e tronco, áreas seborreicas e microbiota normal
	Diagnostico clinico, pela presença de manchas brancas na pele.
	Tinea nigra
	Hortae werneckii
	Acomete camada córnea, com presença de máculas acastanhadas, planas, úmidas, não descamativas, de contorno nítido, únicas ou confluentes
	Diagnostico clinico e Diagnostico laboratorial através exame direto de raspado da pele tratado com KOH a 20%.
	Piedra preta
	Piedraia hortae
	Nódulos firmes, irregulares de coloração preta na porção extrafolicular do couro cabeludo, barba e bigode
	Diagnostico clinico, através presença nódulos escuro no fios de cabelo ou pelos.
	Piedra branca 
	Espécies de Trichosporon beigelii
	Infecção crônica assintomática da porção extrafolicular dos pelos, frequentemente axilares e pubianos, com presença de nódulos firmes irregulares branco ou acastanhados.
	Diagnostico clinico, através presença nódulos brancos ou acastanhados, semelhante a lêndeas no fios de cabelo ou pelos pubianos.
2- Descreva o que é uma dermatofitose e qual os 3 principais gêneros de fungos envolvidos na infecções.
Também conhecidas como tinhas (tineas), as dermatofitoses são micoses superficiais causadas por um grupo de fungos que se 
nutrem da queratina (da pele e de seus apêndices) conhecidos como dermatófitos.Os dermatófitos estão distribuídos em três 
gêneros: Epidermophyton, Microsporum e Trichophyton
Também conhecidas como tinhas (tineas), as dermatofitoses são micoses superficiais causadas por um grupo de fungos que se 
nutrem da queratina (da pele e de seus apêndices) conhecidos como dermatófitos. Os dermatófitos estão distribuídos em três 
gêneros: Epidermophyton, Microsporum e Trichophyton
Também conhecidas como tinhas (tineas), as dermatofitoses são micoses superficiais causadas por um grupo de fungos que se 
nutrem da queratina (da pele e de seus apêndices) conhecidos como dermatófitos. Os dermatófitos estão distribuídos em três 
gêneros: Epidermophyton, Microsporum e Trichophyton
Também conhecida como tinhas (latim: TINEA), as dermatofitose são micoses superficiais causada por um grupo de fungo que se nutrem da queratina (da pele e de seus apêndices) conhecidos como dermatófitos. As dermatofitose (fungos filamentosos) são clinicamente classificadas de acordo com local do corpo afetado.
Na pele apresenta lesão circular, seca, descamativa, pruriginosa, eritematosa.
No pelo apresenta áreas de tonsura, descamação, quérion.
 Na unha forma espessamento, descoloração, aspecto friável, acumulo de material em região usbungueal.
Suas fontes de infecção pode ser por contágio direto com animais, solo e indivíduos infectados.
Os dermatofitos são distribuídos em 3 gêneros de que causam infecção Microsporum, Trichophyton e Epidermophyton.
 3- Como pode ser realizado o diagnóstico das dermatofitoses? 
O diagnóstico das dermatofitoses baseia-se no aspecto clínico e local da infecção e pode ser confirmado por exame micológico com hidróxido de potássio (KOH) que revela hifas ou por cultura dos pelos coletados. Para onicomicose, o teste mais sensível é uma coloração ácido periódico-Schiff do raspado de unhas.
4- Sobre as micoses oportunista descreva 3 fatores predisponentes.
Intrínsecos:
Doenças de base (Leucemia, Linfoma, Diabetes, Imudeficiencia primarias, doenças TGI); Prematuridade/idade avançada; Grandes queimados; Desnutrição.
Extrínsecos
Tratamentos (Quimioterapias, imunossupressores), Procedimentos médicos (transplante, internação prolongada, profilaxia antifúngica)
Fatores Predisponentes para infecções fungicas oportunistas 
 
Doenças de base (Leucemia, Linfoma, AIDS, Diabetes, Imunodeficiências primárias, 
5- A candidíase é infecção comospolita que pode se apresentar com características clínicas variadas e é causada por diferentes espécies do gênero Candida. Sobre a infecção responda: 
a) Principal espécie envolvida nas infecções 
Candida albicans
b) Descreva como realizar o diagnóstico (Exame direto e cultura).
O diagnóstico laboratorial da candidíase baseia-se essencialmente na presença de blastoconídios no exame direto e observação da cultura leveduriforme de coloração creme e aspecto pastoso em ágar Sabouraud. Quanto às manifestações clínicas, podemos dividi-las em cutâneo-mucosas, sistêmicas e alérgicas.
Caso clinico dado para resolver em aula e enviar.
1.De acordo com os achados clínico-laboratoriais, descreva a provável doença presente no recém-nascido e a bactéria causadora.
 De acordo com quadro clinico e os achados laboratoriais, a provável doença trata-se de uma síndrome de pele escaldada, caracterizada por febre, bolhas e descamação na pele, lesão esta causada por toxinas produzidas pelo Staphylococcus aureus, relacionado a infecção de pele, comum em crianças e por apresentar no exame laboratorial coagulase positiva característico da bactéria. 
2.Discuta sobre a toxina envolvida na patogênese da doença. 
Staphylococcus aureus produz Toxinas esfoliatina, causando ruptura das junções celulares da pele, ocorre descamação intensa da pele, caracterizada pelo aparecimento abrupto de eritema perioral, podendo apresentar febre, bolhas ou vesículas, podendo gerar infecções secundárias, comum em recém-nascido e lactante devido a imaturidade do sistema imunológico. 
3.Esse patógeno apresenta um mecanismo de resistência bacteriana que envolve uma proteína de parede celular. Descreva esse fenômeno. 
O mecanismo de resistência envolvido nos Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA), está relacionado à alteração de proteínas ligadoras de penicilina (PBP) codificada pelo gene mecA e sem relação com a produção de beta-lactamases. A presença dessas proteínas nas bactérias faz com que a meticilina e os compostos penicilina-penicilinase resistente (PPR) tenha baixa afinidade pelo local de ligação, na parede celular bacteriana.
Prova
CASO CLINICO ( PARA RESOLUÇÃO DAS QUESTÕES 1 – 6)
Algumas cepas de enterobactérias produzem β-lactamases de espectro estendido (ESBL), que conferem resistência a vários antibióticos β-lactâmicos de amplo espectro. O CLSI recomenda fazer testes de disco-difusão para identificação de cepas ESBL, em casos de infecções por Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Proteus mirabilis. Os testes devem ser realizados por disco-difusão e os resultados são comparados com pontos de corte das zonas de inibição, estabelecidos pelo CLSI.
Você é um microbiologista que trabalha em um laboratório de análises clínicas de um hospital de alta complexidade.
Certa manhã você recebeu amostra de urina de um paciente para realização de Urocultura. A urina foi semeada com uma alça de 1 μl nos meios de cultura de rotina para urocultura (Ágar CLED e MacConkey). Após 24 horas de incubação em estufa a 35± 2°C, houve crescimento de 50 colônias bacterianas de um único morfotipo. A coloração de gram da colônia mostrou bacilos gram negativos.
 
1ª Questão
Os resultados dos crescimentos das placas de urocultura estão nas imagens abaixo.
Considerando o resultado do exame após a realização da urocultura qual provável patógeno isolado da urina do paciente considerando os resultados observados nas duas placas? Justifique
2ª Questão
Qual é a contagem de colônias em UFC/mL (unidades formadoras de colônia/mL) que o farmacêutico responsável pelo Laboratório de Microbiologia deve liberar no laudo neste caso? Demonstre o cálculo.
Resultado: Klebsiella pneumoniae
contagem de colônia:50.000 UFC/ml
50 ............0,001
x....................1 ml
0,001X=50
X=50/0,001
x=50.000  UFC/ml
3ª Questão
O resultado do exame do paciente indica infecção ou contaminação? JUSTIFIQUE
O resultado corresponde a uma infecção, pois quando acontece uma contaminação, a placa fica escura, que não é o caso referente.
4ª Questão
Você utilizou um antibiograma para identificação de ESBL, pela técnica de disco difusão, de acordo com as recomendações do CLSI, e encontrou os seguintes halos de inibição.
Cefpodoxina = 18mm
Cefazidima = 23mm
Aztreonam = 29mm
Cefotaxina = 30mm
Ceftriaxona = 25mm
Você precisa comparar os resultados de acordo com a tabela do CLSI de identificação de cepas de ESBL em disco difusão.
Considerando o resultado apresentado e a tabela padrão no teste de sensibilidade a antimicrobianos (TSA) realizado, algum(ns) do(s) halo(s) está(ão) dentro do ponto de corte para ESBL estabelecido pelo CLSI? Em caso positivo, indique.
Sim. Apresenta resultado Positivo para Ceftriaxona, pois o halo de inibição está dentro do ponto de corte, para  ESBL estabelecido pelo CLSI.
Halo de inibição da ceftriaxona: encontrado:≤25 mm
Halo de ceftriaxona estabelecido pela CLSI  ≤27 mm 
5ª Questão
Com os resultados encontrados no TSA, você pode afirmar que se trata de uma ESBL? Justifique sua resposta.
Sim, pois está dentro do ponto de corte, de acordo com a tabela.Os ESBLs refere-se às beta-lactamases produzidas principalmente por Klebsiella spp. que apresentam resistência aos beta-lactâmicos de amplo espectro, os quais normalmente possuem atividade contra os bacilos Gram-negativos, que é indicativo para o caso em questão.
6ª Questão
Como você liberaria o laudo desse exame?
Teste de sensibilidade aos Antimicrobianos
Positivo para ESBL, halo de Ceftriaxona dentro do ponto de corte estabelecido pelo CLSI. O resultado demonstra resistência bacteriana por K.pneumoniae
7ª Questão
Uma criança de 4 anos de idade foi transferida para um hospitalde alta complexidade em decorrência de complicação de uma pneumonia com derrame pleural. Uma amostra de escarro foi coletada na data da admissão para exames microbiológicos.
A imagem 1 abaixo mostra o resultado da cultura.
 
 A imagem 2 abaixo mostra o resultado da bacterioscopia.
O que você observa na imagem 1 e 2? Visto que o escarro é uma amostra do trato respiratório inferior que é contaminada pela passagem pela via respiratória superior e boca, como você poderia confirmar que esta bactéria isolada é relevante?
magem 1
presença de gama hemólise (não hemolítico)
imagem 2
diplococos gram positivos lanceolados e encapsulados
 
O Streptococcus pneumoniae é uma bactéria pertencente à família streptococcaceae ACOMETE TRATO RESPEITARORIO INFERIOR, PODENDO ATRVES DA CAVIDADE NASAL ATINGIR TRATO TESPITAORIO INFERIOR AGRAVANDO PARA PNEUMONIAS.
8ª Questão
Como você poderia confirmar qual a espécie bacteriana presente?
Primeiramente pela coloração gram
teste da catalase 
 teste da isolamento no ágar sangue para confirmar se é alfa ou beta hemolítico.
alfa-hemólise - teste de sensibilidade à optoquina
sensível à optoquina indicativo para Streptococcus pneumoniae 
CASO CLÍNICO 
Um paciente com AIDS é internado, com sintomas de febre alta e rigidez da nuca. Foram solicitados testes laboratoriais do líquor do paciente.
Resultados dos exames Líquor:
Cor: Incolor
Aspecto: Límpido
Contagem de Glóbulos Brancos: 100 cels/µl
Contagem Diferencial: 75% de linfócitos 23% monócitos e 2% neutrófilos
Glicose: 55 mg/ dl (Glicose no sangue paciente = 85mg/dl)
Proteínas: 700 mg/ dl Resultado (Microbiologia):
 
 
Bacterioscopia direta (microscopia):
Negativo para Gram
Positivo Tinta nanquim
 
 
Resultado Cultura: Crescimento em meio Agar Sabouraud
 
a) A partir desses resultados qual diagnóstico provável? Justifique sua resposta
b) Os níveis elevados de proteína são importantes? Explique sua resposta?
a) meningite FUNGICA, POSSIVEL CAUSADOR CRYPTOCOCRUS NEOFORMANS POIS HA PRESENÇA DE LINFOCITOS E MONOCITOS NO EXAME LABORATORIAL COM ELEVAÇÃO DA PROTEINA E GLICSE NORMAL PARA DIMINUIDA
b) sim, POIS TRAZ  INTENSIDADE AO PROCESSO INFECCIOSO
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