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Microbiologia Lorena Araújo- 106 1 “Toda a informação necessária a vida está armazenada no material genético de um indivíduo” - A informação genética pode ser utilizada de duas formas: • Entre as gerações de células: tem relação com duplicação o Não tem diferenças genéticas, gera clones • No interior da célula: relação com transcrição e tradução o Relação com metabolismo, com a presença de fatores que permitem que ela continue crescendo, se desenvolvendo, e se mantendo viável em diferentes ambientes -Dupla hélice de polinucleotídeos -Composto por um açúcar do tipo Desoxirribose ligado a um grupamento Fosfato e a uma Base nitrogenada, a qual pode ser formada por adenina, citosina, guanina e timina, que funcionam de forma complementar A-T e C-G - A e T são ligadas por 2 pontes de hidrogênio, enquanto C e G se ligam por uma ligação tripla, que é mais forte -Filamento único/simples composto por um açúcar do tipo Ribose, que se liga a um grupamento Fosfato e a uma Base nitrogenada, que pode ser adenina, uracila, citosina ou guanina, as quais se ligam em A-U, C-G -Ele pode ser do tipo mensageiro, transportador ou ribossomal • O RNAm (mensageiro) é a primeira etapa do processo de transcrição gênica • O RNAr participa da leitura da molécula do RNAm – se não ocorrer esse processo, não há produção de proteínas. É o processo de tradução o Ele percorre todo o RNAm, fazendo a leitura de trincas de códons ali presentes (tríade de bases nitrogenadas), atraindo os aminoácidos correspondentes. o É um excelente alvo terapêutico para inibir a síntese proteica de bactérias • O RNAt é quem carrega o aminoácido correspondente que vai se ligar na molécula de RNAm – o códon fica presente no RNAm e o anti- códon no RNAt o Conforme o ele vai percorrendo o trajeto, forma-se a cadeia de polipeptídeos, que no final da tradução irá formar a proteína - No cromossomo estão as informações genéticas essenciais, e no extra cromossômico (plasmídeo) está informações adicionais relacionados a resistência e virulência - Nem toda bactéria tem material extra cromossômico Cromossomo • Material circular • É encontrado no nucleóide • É haplóide • O material genético bacteriano é maior que a célula bacteriana por isso precisa se condensado e fica no formato de uma linha • No processo de condensação, temos as histonas, que juntam esses filamentos, unindo-os e condensando o material genético. • Processos que inibem a condensação do DNA bacteriano levam ela à morte, pois ela não consegue estabilizar o material genético, tendo em vista que ele é muito grande, com isso, a célula acaba rompendo • Tem um tamanho variável, tendo em vista que algumas bactérias são muito mais especializadas (possuem maior informação genética para produção dos nutrientes) do que outras. • Quem tem material genético maior é mais adaptada e tende a ser menos especifica, sendo mais resistente a variações ambientais. Pois quantos mais genes mais produtos a bactéria pode apresentar; • expressão genética possui uma organização em operons, que são estruturas muito típicas das bactérias, que as permitem expressar a informação genética de forma particular e otimizada de genes que estão interligados o genes que operam juntos para produzir algo • Possui replicação semi-conservativa - dentro das fitas de DNA, uma delas é utilizada como molde, para produção de novas moléculas ou apenas para a expressão gênica Plasmídeo • DNA fita dupla circular • Replicação independente, não age de acordo com a necessidade da bactéria como o cromossomo; • Não é essencial para sobrevivência da célula sob condições não restritivas, ou seja, quando bactéria sofre ação de um antibiótico o plasmídeo libera enzimas que atua contra os antimicrobianos para que a bactéria não morra e continue crescendo; • Ex.: Plasmídeo R100 – além da resistência à antimicrobianos, possui, também, resistência à outras substâncias, como mercúrio (metal pesado), sulfonamidas (classe de antimicrobianos), multidroga resistente, aminoglicosídeos, cloranfenicol, tetraciclinas, luz UV e quaternário de amônio (utilizado como desinfetante o Ou seja, não apresenta genes de resistência a apenas a antimicrobianos o Existe outros fatores que os tornam antidrogas resistentes - O DNA é de fita dupla e precisa se abrir para, de acordo com o modelo semiconservativo, uma fita ser transcrita pela RNA polimerase, formando assim o RNAm que será traduzido em uma proteína Microbiologia Lorena Araújo- 106 2 -Gene é um segmento de DNA que contém a informação necessária para codificar uma proteína. Ou seja, é um pedaço do cromossomo que carrega informações de uma expressão gênica; -Operon é uma organização estrutural típica de genomas procarióticos, dois ou mais genes que serão transcritos e traduzidos simultaneamente por um mesmo processo o Em um operon, as sequências codificadoras são transcritas em um único RNA, chamado de RNAm policistrônico (contém múltiplas informações de 2 ou mais genes), o qual dará origem a diversas proteínas; - Promotor é uma sequência específica de DNA reconhecida pela RNA polimerase (produz RNA mensageiro) - Operador é uma sequência específica de DNA reconhecida pelas proteínas repressoras - Região Codificadora é uma porção do gene que inclui sequências que serão transcritas e traduzidas em proteínas - Terminador é uma sequência de DNA que marca o final da transcrição do gene ou operon - Toda essa região envolta pela linha vermelha é um operon; - A expressão dos genes A, B e C será importante ocorrer em uma única via por eles serem interligados, logo, para otimizar o gasto energético eles são transcritos e traduzidos de forma simultânea no modelo operon (genes com funções interligadas), transcrito por RNA polimerase (se liga ao promotor) - Além de otimizar o gasto energético transcrevendo e traduzindo simultaneamente genes com função interligada, a bactéria também regula quando determinado gene vai ser lido, transcrito e traduzido. - Ela faz isso para evitar ter que expressar um gene cujo produto não é necessário naquele momento, evitando que gaste energia desnecessariamente Genes Constitutivos X Genes regulados • Constitutivos – genes que precisam estar constantemente ativados e expressos, pois seus produtos estão relacionados com questão nutricional, metabólica, etc. o São genes relacionados com a viabilidade da bactéria, e qualquer problema neles pode levá-la à morte. • Regulados – são genes que em determinado momento precisam ser transcritos e traduzidos, e em outros momentos não. o Estão diretamente relacionados com as condições do meio e as necessidades da célula para sobreviver ali. o Quando são reprimidos é na transcrição, logo no começo para não houver gasto enérgico; Sistema de Repressão e Indução • Repressão – a atividade de determinado gene vai ser reprimida/desativada o Proteínas repressoras irão se ligar à região operadora a fim de promover um bloqueio físico para inibir a transcrição de determinados genes pela RNA polimerase o O processo já estava acontecendo e precisa ser parado • Indução – a atividade de determinado gene vai ser induzida a ficar ativa • Modelo de indução Operon Lac- relacionados com a metabolização da lactose em bactéria, nota-se que existem enzimas que precisam ser codificadas de forma simultânea para quebrar a lactose, ou seja, são genes agrupados no modelo Operon. o Os genes Lac z, Lac y e Lac a estão relacionados com a informação genética a ser codificada e cada um desses vai expressar uma enzima que será utilizada na metabolização da lactose o Na ausência de lactose, esses genes não serão expressos (RNA polimerase não vai atuar), ou seja, não terão o RNAm lac. ▪Nesse caso, teremos a ação da proteína repressora constituindo o bloqueio físico que impede a produçãodas enzimas para metabolizar lactose o Na presença de lactose, a lactose irá se ligar à proteína repressora (possuem afinidade), inativando-a e deixando livre a região operadora, possibilitando a ocorrência da transcrição do RNAm e a tradução do conjunto de enzimas que vão metabolizar a lactose • Modelo de repressão Operon trp o Operon Triptofano é um exemplo de operon que estava ativo, mas devido à mudança do meio, passa a ser reprimido o Nesse caso, o produto dessa expressão gênica é vital para a bactéria, logo, ela precisa produzi-lo a todo momento o Proteína repressora atua para bloquear o triptofano na região operadora, a presença dele ativa essa proteína; o Na presença do triptofano, ocorre uma ligação entre a proteína repressora e o próprio triptofano (que nesse caso funciona como co-repressor). ▪ Essa ligação vai possuir afinidade pela região operadora, produzindo um bloqueio físico que impede a RNA polimerase de transcrever o RNA mensageiro ▪Não haverá transcrição e tradução, as proteínas não serão formadas, e assim a bactéria poupa sua energia, Microbiologia Lorena Araújo- 106 3 uma vez que o triptofano já está sendo ofertado pelo meio e a síntese proteica possui um alto gasto energético - Alterações genotípicas são importantes para gerar variabilidade. Diante de uma mudança brusca no meio ambiente, as bactérias e outros microrganismos possuem um conjunto de mecanismos geradores de alterações genéticas que conduzem a variantes; Essas alterações são feitas de 3 maneiras: Transformação • capacidade de assimilar o material genético livre de uma outra bactéria que tenha morrido • Processo que geralmente é mais realizado em laboratório para pesquisa • Processo que geralmente é mais realizado em laboratório para pesquisa • Requerimentos para transformação: o A bactéria receptora tem que ser transformável, ou seja, precisa ter capacidade pegar o DNA e incorporá-lo no seu cromossomo de forma satisfatório, ou seja, sem inibir nenhuma via o Células em estado de competência – além de assimilar, ela precisa inserir o material genético dentro do seu cromossomo sem que haja perda das funções contidas ali o Presença de DNA livre no meio • O que não for assimilado será degradado Transdução • transferência de DNA de uma célula para outra por meio da ação de um vírus (bacteriófago) • O bacteriófago insere seu material genético dentro da célula bacteriana, e a partir disso ele altera o gerenciamento dessa célula, fazendo com que seu hospedeiro passe a trabalhar em função das reações virais, como produção de proteínas, replicação material genético viral, entre outras coisas; • O objetivo é fazer com que no final do processo novas partículas virais (bacteriófagos) tenham sido produzidas • Ao final desse processo pode ser que o vírus introduza um pedaço do material genético da bactéria no seu e aí quando for infectar outra bactéria vai haver troca desse material genético gerando uma variabilidade genética; Conjugação • É o processo que gera maior variabilidade genética e é um dos principais agentes contra os antibacterianos; • Conjugação é feita através de plasmídeo (material extracromossômico) • Requerimentos para conjugação o Contato entre as células, sendo uma doadora que possui o plasmídeo conjugativo (fator de fertilidade), e uma receptora o Na E. coli, a célula doadora é denominada F+ (fertilidade positiva, possui o plasmídeo conjugativo), e a célula receptora F- (não possui o plasmídeo conjugativo) o O pili sexual, proveniente do plasmídio de fertilidade, surge quando ele expressa seu produto, unindo as duas células e se retraindo para que haja aproximação delas o A troca de material é feita após a fusão das membranas das duas bactérias o Ele é um auto-replicon e possui fita dupla, ao mesmo tempo que está passando para a célula receptora, já inicia o processo de autoduplicação da sua fita. o Ao final do processo de conjugação, teremos 2 bactérias F+, ou seja, 2 bactérias com fertilidade e capacidade de transmitir seu potencial genético • Esse processo permite o compartilhamento de diversas informações genéticas, inclusive a de resistência • A conjugação ocorre entre as bactérias do mesmo grupo, gram (-) e os gram (+). Mecanismo distintos de expressão genética Testes Fenotípicos • Se baseiam na expressão dos genes, na forma como a bactéria cresceu (se fermenta ou não, se cresce no meio ou não). • Tudo que avaliamos em laboratório a partir do crescimento e das reações metabólicas das bactérias são os testes fenotípicos. • Característica de gram, se é positiva ou negativa (relação com membrana externa); • Se é esférica ou bacilar; • Como é a conformação da célula bacteriana; • Como a parede celular vai se organizar; • Se produzem pigmentos ou não (podem ser fluorescentes); • Se tem cápsula é mucóide; Microbiologia Lorena Araújo- 106 4 • Se fermenta determinado açúcar alterando as condições do meio, pois se fermenta produz ácidos, e o pH ácido altera o meio; • Bactérias que vão ter colônias, umas maiores, outras menores. Testes Genotípicos -Análise direta do material genético, que pode ser feito por PCR com o DNA bacteriano, avaliação do seu perfil de resistência e várias outras coisas – avalia o perfil genético da bactéria. • Diagnóstico molecular – dar algum diagnóstico com base no material genético (buscar na fonte); • Desenvolvimento de técnicas com elevada sensibilidade e rapidez nos resultados. Diagnóstico molecular • Bactérias não cultiváveis ou pouco cultiváveis • Desenvolvimento de técnicas com elevada sensibilidade e rapidez nos resultados • Analisar bactérias não cultiváveis ou pouco cultiváveis, como as bactérias do solo, ou as que são muito exigentes nutricionalmente. Pois se a expressão não é suficiente vai direto no código genético Capacidade de esporulação Apenas bactérias que possuem genes próprios (mais de 200) que permitam a produção do esporo bacteriano e terá resistência ambiental Resistência Anti-microbiana – dividida em natural e adquirida, sendo essa última dependente da ação direta do ser humano • Tem informação genética pra isso que pode ser reproduzida; PCR – reação de cadeia de polimerase • Utilizada para teste de covid • É uma forma de amplificar seletivamente in vitro uma região específica dentro da molécula de DNA • Os fragmentos amplificadores podem ser uma pequena perto de uma mistura grande e complexa de DNA (por exemplo solo, alimento, etc) • Toma elementos do processo de replicação do DNA • Usa temperatura para abrir e fechar a molécula de DNA; • Utiliza Primer como marcador, onde ele se liga ao gene e sintetiza o alvo • Abre o DNA (ocorre desnaturação 94°C), primer se liga ao material genético, estende e gera uma cópia do gene. Copia exponencial, até 30 copiais e milhares de genes • Processo mais rápido de reprodução do que cultivo; OBS: se uma bactéria expressa uma resistência e essa resistência não é encontrada no Gene, isso é devido a mutação;