CLONAGEM DE DNA

Prévia do material em texto

TECNOLOGIA DA INFORMAÇÃO COM BASE 
 NO DNA 
 CLONAGEM DE DNA 
 1. Cortar o DNA alvo em locais precisos. 
 Endonucleases específicas de sequência 
 (endonucleases de restrição) fornecem as 
 tesouras moleculares necessárias. 
 2. Selecionar uma pequena molécula 
 transportadora de DNA capaz de 
 auto-replicação. Esses DNAs são 
 chamados de vetores de clonagem, são 
 geralmente plasmídeos ou DNAs virais. 
 3. Juntar os dois fragmentos de DNA de modo 
 covalente. A enzima DNA-ligase liga o 
 vetor de clonagem e o DNA a ser clonado. 
 Moléculas de DNA compostas por 
 segmentos ligados de colo covalentes a 
 partir de duas ou mais fontes são 
 chamadas de DNAs recombinantes. 
 4. Transportar o DNA recombinante do tubo 
 de ensaio para um célula hospedeira que 
 irá proporcionar a maquinaria enzimática 
 para a replicação do DNA. 
 5. Selecionar ou identificar as células 
 hospedeiras que contém o DNA 
 recombinante. 
 Plasmídeos : DNAs circulares encontrados no 
 citosol de bactérias 
 O primeiro organismo utilizado para o trabalho de 
 DNA recombinante e ainda a célula hospedeira 
 mais comum é a bactéria E. coli. 
 Conjunto de enzimas que participam do processo 
 de clonagem: 
 ● Endonucleases de restrição (enzimas de 
 restrição): reconhecem e clivam o DNA em 
 sequências específicas para gerar um 
 conjunto de fragmentos menores 
 ● DNA-ligases : une o fragmento de DNA a 
 ser clonado com o vetor de clonagem 
 adequado 
 GENES CLONADOS PODEM SER EXPRESSOS 
 PARA AMPLIFICAR A PRODUÇÃO DE 
 PROTEÍNAS 
 Frequentemente, o produto de um gene clonado 
 tem valor comercial, terapêutico ou de pesquisa. 
 Por exemplo, durante muito tempo a produção de 
 insulina era em pâncreas bovino, no entanto, as 
 técnicas de DNA recombinante permite essas 
 produção em larga escala e com um rendimento 
 maior. 
 reação em cadeia da polimerase (PCR) 
 A reação em cadeia da polimerase (PCR) permite 
 a amplificação de segmentos escolhidos de DNA 
 ou RNA para estudo detalhado ou clonagem