AULA 1_ Importância da imunologia clínica e parâmetros sorológicos

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DIAGNÓSTICO 
IMUNOLÓGICO
Profa Dra Viviana Galimberti Arruk
Coleta – Conceito 
1) Processo abrangente que engloba aspectos anteriores
ao procedimento (maneira como a amostra é obtida)
Quais aspectos: uso de medicamentos
estado emocional do paciente
condições clínicas
preparo do paciente
2) Importância da Coleta:
A) Único contato com o paciente
B) Coleta inadequada = erros na análise
C) Identificação = troca de material
Coleta de Sangue 
Aspectos a serem considerados antes da coleta 
1. Relativos ao preparo do paciente:
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Coleta de Sangue 
Aspectos a serem considerados antes da coleta 
1. Relativos a amostra a ser obtida
Sangue total, Plasma ou Soro ????? 
Sangue com uma substância que impede sua coagulação (anti-
coagulante), permanece líquido e recebe o nome de SANGUE 
TOTAL (células + parte líquida)
PLASMA: contém as
proteínas da
coagulação inativas
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Coleta de Sangue 
Tipos de Tubos para a Coleta:
Sem anticoagulante para obtenção de SORO: não contém as proteínas 
de coagulação (sem fibrinogênio) 
EDTA: etileno diamino tetraacetato, ação deve-se a retirada do cálcio 
(fator IV da coagulação, o cálcio é precipitado ou quelado) 
Heparina: Tem ação antitrombina. Melhor anticoagulante para exames 
bioquimicos por ser o que menos interfere neles. Elevado custo 
Fluoreto de Sódio: captação dos íons cálcio. Uso: glicemia. É Inibidor 
enzimático e conservador de glicose (retarda a glicólise).
Citrato: age no cálcio (captação). Não deve ser usado para dosagens 
Bioquímicas. Promove perda de água por parte das hemácias com dil.plasma
-
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REAÇÕES SOROLÓGICAS
O diagnóstico de certeza de um processo 
infeccioso é a demonstração do 
patógeno ou de seus produtos nos 
tecidos ou fluidos biológicos do 
hospedeiro
LABORATÓRIO
CLÍNICA
EPIDEMIOLOGIA
Pesquisa de Anticorpos
➢ Elucidar processos patológicos com sintomas e sinais clínicos
confundíveis.
➢ Diferenciar a fase da doença
➢ Diagnosticar doença congênita
➢ Selecionar doadores de sangue, doadores e receptores de
órgãos
1. Diagnóstico Individual
➢ Avaliar o prognóstico de doença e verificar o
agravamento da patologia.
➢ Avaliar a eficácia da terapêutica e sua suspensão
➢ Avaliar a imunidade específica (naturalmente
adquirida ou artificialmente induzida)
Pesquisa de Anticorpos
➢ Estabelecer a prevalência da doença
➢ Verificar a erradicação/controle da doença
➢ Verificar a reintrodução de novos casos em áreas
consolidadas
2. Inquéritos Soroepidemiológicos
Pesquisa de Anticorpos
Pesquisa de Antígenos
➢ Como critério de cura
➢ Na definição da etiologia da doença
➢ Na seleção de doadores de sangue
➢ Em inquéritos epidemiológicos
JANELA IMUNOLÓGICA
JANELA BIOLÓGICA
Não 
reagente
Não 
reagente
Repetição em duplicata
da sorologia
PATÓGENO
CÉLULA 
FAGOCÍTICA
LINFONODO
BAÇO
APRESENTAÇÃO
ATIVAÇÃO DE LINFÓCITOS T E B
PRODUÇÃO DE CITOCINAS
LINFÓCITOS B 
ATIVADOS
LINFÓCITOS 
DE MEMÓRIA
ANTICORPOS
PATÓGENO
ANTICORPOS
“É o tempo existente entre a aquisição da 
infecção e a detecção de anticorpos circulantes 
(soroconversão/ soropositividade).”
JANELA IMUNOLÓGICA
“É o tempo existente entre a aquisição 
da infecção e a detecção de DNA/RNA 
circulantes 
JANELA BIOLÓGICA
Imunoensaios não marcados
➢Imunoprecipitação
➢Aglutinação
➢Ensaios líticos
➢Floculação: VDRL
Imunodifusão
Hemaglutinação
Aglutinação do látex
Ensaios líticos 
Floculação- VDRL
Imunoensaios marcados
➢Imunofluorescência
➢Imunoenzimáticos
➢Quimioluminescência
➢Cultura de leucócitos
➢Citometria de fluxo
Imunofluorescência
Imunoenzimáticos- ELISA
Imunoenzimático- Western blotting
Interpretação do teste 
1. controle positivo
2. controle negativo
3. Paciente A
4. Paciente B
5. Paciente C
Quimioluminescência
Separação de mononucleares
1. Plasma diluído
2. Células 
mononucleares
3. Ficoll-Hipaque 
(d=1,078)
4. Hemáceas e 
granulócitos
Cultura de leucócitos
Ficoll-Hypaque
MONONUCLEARES
CENTRIFUGAR
Cell Harvested
Contador 
Cintilações 
1 uCi of 3H-TdR
ANTÍGENO
Citometria de fluxo
TECNOLOGIA QUE MEDE
MÚLTIPLAS CARACTERÍSTICAS EM
UMA CÉLULA QUE MIGRA EM
FLUXO.
 TAMANHO
 COMPLEXIDADE OU 
GRANULOSIDADE
 FLUORESCÊNCIAS
Citometria de fluxo
PARÂMETROS PARA 
VALIDAÇÃO DE 
TESTES 
SOROLÓGICOS
Validação de Testes Sorológicos
Validade intrínseca de um teste=
Desempenho do teste quando 
comparado com teste de referência 
(gold standard)Uso de populações sabidamente positivas e 
negativas para o parâmetro que está sendo 
avaliado
PARÂMETROS
SENSIBILIDADE
ESPECIFICIDADE
VALOR PREDITIVO POSITIVO e
NEGATIVO
EFICIÊNCIA
LIMIAR DE REATIVIDADE
EXATIDÃO
PRECISÃO
REPRODUTIBILIDADE
SENSIBILIDADE
É A PORCENTAGEM DE 
RESULTADOS POSITIVOS NA 
POPULAÇÃO DOENTE, 
ISTO É, 
PROPORÇÃO DE RESULTADOS 
VERDADEIROS POSITIVOS
SENSIBILIDADE
S= VP
VP + FN
PRESENTE AUSENTE
POSITIVO VP FP
NEGATIVO FN VN
TOTAL VP + FN FP + VN
DOENÇA - DIAGNÓSTICO VERDADEIRO
TESTE
ESPECIFICIDADE 
É A PORCENTAGEM DE 
RESULTADOS NEGATIVOS NA 
POPULAÇÃO NÃO DOENTE, 
ISTO É, 
PROPORÇÃO DE RESULTADOS 
VERDADEIROS NEGATIVOS
ESPECIFICIDADE
E= VN
VN + FP
PRESENTE AUSENTE
POSITIVO VP FP
NEGATIVO FN VN
TOTAL VP + FN FP + VN
DOENÇA - DIAGNÓSTICO VERDADEIRO
TESTE
EFICIÊNCIA
RELAÇÃO ENTRE A SOMATÓRIA DOS
VERDADEIROS RESULTADOS
POSITIVOS E VERDADEIROS
RESULTADOS NEGATIVOS COM A
POPULAÇÃO ESTUDADA
QUANTO MAIS PRÓXIMO DE 1, MELHOR
O TESTE
EFICIÊNCIA
Eficiência= VP + VN
VP + VN + FP + FN
PRESENTE AUSENTE
POSITIVO VP FP
NEGATIVO FN VN
TOTAL VP + FN FP + VN
DOENÇA - DIAGNÓSTICO VERDADEIRO
TESTE
VALOR PREDITIVO
• POSITIVO = PROBABILIDADE DE
DOENÇA QUANDO O TESTE FOR
POSITIVO
•NEGATIVO = PROBABILIDADE DE
NÃO-DOENÇA QUANDO O TESTE
FOR NEGATIVO
TESTE DOENTES SAUDÁVEIS TOTAL
POSITIVO 380 80 460
NEGATIVO 20 1520 1540
TOTAL 400 1600 2000
PARA UMA DOENÇA QUE TEM
VPP = VP/VP+FP
= 380/460 
= 0,82
VPN = VN/VN+FN
= 1520/1540 
= 0,98
VALORES PREDITIVOS
•Dependem de:
•Sensibilidade do teste (intrínseco)
•Especificidade (intrínseco)
•Prevalência da doença na
população em estudo (extrínseca)
Limiar de reatividade 
& cut off
É O VALOR DO TESTE:
ACIMA DO QUAL OS RESULTADOS
SÃO CONSIDERADOS POSITIVOS E
INDICAM DOENTES ou REAGENTES
ABAIXO DO QUAL OS RESULTADOS
SÃO DADOS COMO NEGATIVOS E
INDICAM OS NÃO DOENTES ou NÃO
REAGENTES.
Escolha do limiar de 
reatividade
PRECISÃO
•DETERMINA A CONCORDÂNCIA DOS
RESULTADOS OBTIDOS QUANDO O
TESTE É FEITO VÁRIAS VEZES
•MEDE ERRO ACIDENTAL
EXATIDÃO
•DETERMINA A CAPACIDADE DO
TESTE EM FORNECER RESULTADOS
MUITO PRÓXIMOS AO VERDADEIRO
•DETECTA ERRO SISTEMÁTICO
REPRODUTIBILIDADE
•REFERE-SE À OBTENÇÃO DE
RESULTADOS IGUAIS, EM TESTES
COM A MESMA AMOSTRA, FEITOS
POR PESSOAS DIFERENTES, EM
LOCAIS DIFERENTES
•ASSOCIADA A ERROS ACIDENTAIS E
SISTEMÁTICOS