Viabilidade Celular e Citotoxicidade

Prévia do material em texto

Viabilidade Celular e Citotoxicidade
Aula Teórica 6 Citotoxicidade
A partir do momento em que as células são explantadas do organismo, a viabilidade celular
passa a ser fundamental
• especialmente durante procedimentos experimentais
→ resultados experimentais não são úteis se não houver uma maior proporção de
células viáveis na cultura
• por outro lado, avaliação de viabilidade e citotoxicidade
podem fornecer parâmetros sobre efeitos de diferentes agentes
sobre as células
→ antitumorais - devem ser citotóxicos
→ cosméticos ou alimentos - não devem ser citotóxicos
Natureza dos Ensaios
• Viabilidade Celular
→ Alteração imediata ou aguda de um parâmetro, relacionado à proliferação ou
sobrevivência celular
* Alterações de permeabilidade de membrana ou de uma via metabólica
• Sobrevivência Celular
→ Ensaios de longa duração para avaliar capacidade proliferativa
• Ensaios Metabólicos
→ Ensaios para avaliar processos metabólicos específicos
* Atividade de uma enzima, síntese de DNA, RNA ou proteínas
• Transformação
→ Sobrevivência em estado funcional alterado
* Alterações genéticas, características malignas, perda de controle
proliferativo
• Irritação
→ In vitro pode ser avaliada através da detecção de citocinas específicas
Ensaios de Viabilidade Celular
• Permite medir proporção de células viáveis após procedimento traumático
• Maioria das metodologias se baseia na integridade da membrana
→ Azul de tripan (0,4%) ou Naftaleno Negro (1%)
* Células inviáveis ficam coradas
→ lodeto de Propídio - entra apenas em células inviáveis - fluorescência vermelha
→ Diacetato de Fluoresceína - entra na célula e é hidrolisado em fluoresceína -
células viáveis - fluorescência verde,
→ Ensaio do Vermelho Neutro
* Vermelho neutro é um corante que entra nas células viáveis e é retido nos
lisossomos
* Em células inviáveis isso não ocorre
* Células fixadas com formaldeído e vermelho neutro dissolvido com
etanol-ácido acético – leitura em espectrofotômetro (570 nm)
Ensaio de Sobrevivência Celular - Ensaio Clonogênico
• Muitas vezes, efeitos tóxicos podem se expressar horas ou dias após tratamento
→ Ensaios de sobrevivência devem identificar capacidade regenerativa e
proliferativa de células tratadas