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UNIVERSIDADE PAULISTA UNIP
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS
CURSO: FARMÁCIA DISCIPLINA: MÉTODOS INSTRUMENTAIS DE ANÁLISE
NOME DO ALUNO: JANAINA NOBREGA DA CRUZ
RA: 0554164 POLO: CAÇAPAVA
DATA: 03/12/2021
TÍTULO DO ROTEIRO: MÉTODOS INSTRUMENTAIS DE ANÁLISE
INTRODUÇÃO
O controle de qualidade dos medicamentos exige a identificação e a
quantificação das substâncias químicas presentes em formas farmacêuticas
terminadas (comprimido, cápsula, creme, pomada etc.) que contém o fármaco, com
realização de análises químicas e físicas. Atualmente, boa parte das análises
químicas realizadas em medicamentos e insumos ligados ao setor farmacêutico se
constitui de métodos instrumentais, como os espectrométricos, baseados na
interação das espécies químicas com a energia; e os cromatográficos e
potenciométricos, baseados em outras características físico-químicas, a citar, o
potencial químico e interações promovidas pelas moléculas e íons onde esses
equipamentos de elevada precisão e robustez, serão capazes de identificar e
quantificar os componentes de interesse na forma farmacêutica ou no insumo
empregado para a produção do medicamento. Além disso, os métodos instrumentais
serão capazes de identificar e quantificar as eventuais impurezas presentes no
medicamento. (NEVES, 2020)
A validação de um método, segundo a ANVISA, é um processo contínuo que
começa no planejamento da estratégia analítica e contínua ao longo de todo o seu
desenvolvimento e transferência. Deve-se garantir, através de estudos
experimentais, que o método atenda às exigências das aplicações analíticas,
assegurando a confiabilidade dos resultados. Contam com vários requisitos e
atributos, os quais podemos citar: seletividade, precisão e exatidão. (PEREZ, 2010),
segundo o INMETRO, a validação de um método analítico consiste em fornecer uma
evidência documentada, por meio de um processo onde se realizam estudos
laboratoriais que comprovam que determinado procedimento é o adequado para a
finalidade, o qual foi indicado. Em outras palavras, é a confirmação por testes e
apresentação de evidências objetivas de que determinados requisitos são
preenchidos para um dado intencional (ISO/IEC 17025).
A validação no laboratório realiza as etapas de validação em um só
laboratório, validando um método novo ou revalidando outro existente. A validação
completa consiste em realizar um estudo interlaboratorial, a partir de uma matriz que
será analisada por diversos laboratórios a fim de se verificar a reprodutibilidade do
método e a incerteza expandida, incluir todas as características de desempenho,
para que, ao final a metodologia possa ser aceita como oficial.
A estimativa da dispersão de resultados entre ensaios independentes,
repetidos de uma mesma amostra, em condições estabelecidas (RDC nº166/2017) é
determinada Precisão. Já a exatidão é definida por tendência e representa o grau de
concordância entre resultados individuais encontrados e um aceito como referência
(SWART & KRULL, 11 12 1998) e, segundo a ANVISA, é a proximidade dos
resultados obtidos pelo método em estudo em relação ao valor verdadeiro.
Seletividade é a capacidade de um método medir com exatidão um analito em
presença de outros componentes (PEREZ, 2010). Pode ser demonstrada
comparando os resultados dos testes de amostras contendo interferentes e através
de valores de uma amostra sem os interferentes, somente o analito.
Os métodos instrumentais de análise tornaram-se um dos principais meios de
obtenção de informações em diversas áreas da ciência e tecnologia. Fatores como a
velocidade e alta sensibilidade para aquisição de dados, baixos limites de detecção,
automação de instrumentos etc., quando comparados aos métodos clássicos de
análise, justificam o interesse dos profissionais em diversas áreas, no emprego das
técnicas instrumentais. Dessa forma, os profissionais e estudantes devem ter em
sua formação a compreensão dos princípios fundamentais das diferentes técnicas,
conhecimento dos instrumentos e suas aplicações. (NEVES, 2020)
RESULTADOS E DISCUSSÃO:
Aula: 1
Título da Aula: Análise em espectrofotômetro
Parte I. Espectro de absorção e análise de amostra desconhecida
Foi feita a varredura de absorbância no espectrofotômetro em diferentes
comprimentos de onda para análise de solução de alaranjado de metila 4,0 mg/L.
λ (nm) A (nm)
400 0,228
410 0,260
420 0,293
430 0,320
440 0,345
450 0,366
460 0,375
470 0,366
480 0,343
490 0,300
500 0,244
510 0,181
520 0,118
530 0,074
540 0,043
550 0,022
560 0,011
Analisando a tabela e o gráfico, obtemos o valor de λmax = 460nm de
comprimento de onda para a máxima absorbância 0,375 para o alaranjado de metila
4,0 mg/L.
PARTE II: Determinação da absorbância de amostras com concentração
desconhecida de alaranjado de metila
Após ser diluída a amostra de alaranjado de metila, ajustamos o comprimento
de onda no espectrofotômetro correspondente à máxima absorção para o alaranjado
de metila (λmax = 460nm ), definido após análise dos resultados da parte I, lemos o
valor de absorbância: A = 1,785
Aula: 2
Título da Aula: Construção da curva de calibração para análise de alaranjado de
metila
Este experimento tem por objetivo construir a curva de calibração
(concentração em função da absorbância) para a análise do alaranjado de metila por
espectrofotometria.
Foi feito o preparo do alaranjado de metila em várias concentrações através
da solução de estoque com os seguintes cálculos:
C1 . V1 = C2 . V2
10 . V1 = 8 . 100
V1 = 8 x 100 = V1 = 80ml
10
C1 . V1 = C2 . V2
10 . V1 = 2,5 . 100
V1 = 2,5 x 100 = V1 = 25ml
10
C1 . V1 = C2 . V2
10 . V1 = 5 . 100
V1 = 5 x 100 = V1 = 50ml
10
C1 . V1 = C2 . V2
10 . V1 = 1 . 100
V1 = 1 x 100 = V1 = 10ml
10
Concentração V estoque (ml)
1,0 10 ml
2,5 25 ml
5,0 50 ml
8,0 80 ml
Medimos a absorbância de todas as concentrações no espectrofotômetro com
o comprimento de onda (λ) em 460nm:
Concentração (mg/l) Absorbância
1,0 10 ml
2,5 25 ml
5,0 50 ml
8,0 80 ml
Curva de calibração para o alaranjado de metila, tendo absorbância em
função da concentração. Determinação da equação da reta e coeficiente de
correlação:
Abs = _______ x [Concentração] + ______
1785 = 0,0933+0,0097
ANÁLISE DO COEFICIENTE DE CORRELAÇÃO (r)
O valor calculado deverá estar próximo a 1,000, o que indica boa correlação
entre a absorbância obtida no espectrofotômetro para as diferentes concentrações
de alaranjado de metila. Segundo a RDC 166/2017, o método será considerado
LINEAR quando apresentar r ≥ 0,990.
Com a equação de reta correspondente à calibração para as soluções de
alaranjado de metila, efetuamos o cálculo do teor (concentração) dessa substância
que estava presente na amostra desconhecida analisada na prática 1 (Parte 2).
Aula: 3
Título da Aula: Avaliação da seletividade do método espectrofotométrico de
dosagem de alaranjado de metila
Realizamos os ensaios de seletividade, precisão e exatidão para a validação
parcial do método instrumental de quantificação do teor de alaranjado de metila em
solução.
Parte I: Calculamos a massa a ser pesada de alaranjado de metila para a
obtenção de 200 mL de solução de amostra na concentração 4,0 mg/L. Transferimos
a solução de amostra 4,0 mg/L para um frasco e rotulamos, indicando que se trata
da solução de amostra preparada.
V = 200 ml 4 1000
C = 4 mg/l x 200
x = 0,8 mg
Parte II: Ensaio de seletividade
Tabela de Resultados:
Tubo Absorbância
A A = 0,373
B AP = 0,378
P = 4 mg/l
Utilizamos os resultados para o cálculo da porcentagem de recuperação e
avaliação da seletividade do método de acordo com a RDC 196/2017, utilizando a
fórmula a seguir:
REFERÊNCIAS
N513m Neves, Luiz Carlos Martins das. Métodos Instrumentais de Análise / Luiz
Carlos Martins das Neves... [et al]. – São Paulo: Editora Sol, 2020. 284 p., il
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE NORMAS TÉCNICAS – NBR ISO6023, ago. 2000.
ATHAIDE, A. Validação comprova e documenta qualidade dos produtos e
equipamentos. Controle de Contaminação, São Paulo, p.16-22, maio/jun. 2000.
BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução
da Diretoria Colegiada – RDC Nº 166, de 24 de julho de 2017 (Publicada no DOU
nº141, de 25 de julho de 2017).
PEREZ; M.A.F. “Validação de Métodos Analíticos: Como fazer? Por que ela é
importante? Boletim de Tecnologia e Desenvolvimento de Embalagens – ITAL Vol.
22, nº3, 2010.
FARMACOPÉIA brasileira. Insumos Farmacêuticos e especialidades. 6ª. ed. Volume
II – Monografias. p. 961- 964. Brasília, 2019