INTRODUÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS (ICF)POSTAGEM_1_ICF PD

Prévia do material em texto

FARMÁCIA 
 
INTRODUÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS (ICF) 
POSTAGEM 1 
ATIVIDADE 1 – RELATÓRIO 
 
 
 
2022 
RESUMO 
O paracetamol ou acetaminofeno é um dos fármacos mais consumidos 
pela população em geral, incluindo crianças, gestantes e idosos, devido suas 
propriedades analgésicas e antipiréticas. Diante de tal relevância para 
população, o registro do medicamento junto ao órgão regulador é um processo 
indispensável para sua comercialização e consumo. Nesse contexto, a 
Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) nº 200 de 26 de dezembro de 2017 
estabelece os requisitos mínimos para o registro do medicamento junto a 
Agência Nacional de Vigilância Sanitária. De acordo com a mesma resolução, 
deve ser apresentado no momento do registro o chamado relatório de 
validação analítica, que é desenvolvido com orientação da Resolução RDC nº 
166 de 24 de julho de 2017. Esta RDC estabelece os parâmetros para a 
validação do método analítico responsável pela quantificação do ativo no 
insumos farmacêuticos, medicamentos e produtos biológicos, para que dessa 
forma seja demonstrado que os resultados apresentados pelo método são 
adequados a finalidade a que se destina. Portanto, a quantificação do 
paracetamol foi executada através de um método por espectrofotometria no 
ultravioleta no comprimento de onda de 249 nm e avaliado conforme os 
parâmetros de seletividade, exatidão e precisão especificados pela legislação. 
O parâmetro de seletividade demonstrou ausência de interferência através da 
verificação dos espectros. A precisão atendeu ao sistema dentro de intervalos 
estatísticos estipulados e atendeu as especificações de Desvio Padrão Relativo 
(DPR) de ≤ 1,3. Por meio do parâmetro de exatidão verificou-se ótima 
recuperação do analito em concentrações de 80%, 100% e 120% do ativo, com 
ausência de interferências. Dessa forma, afirma-se que a metodologia avaliada 
mostrou ser seletiva, precisa e exata, podendo assim ser declarada validada, 
atendendo as RDC n° 166/2017 e o DOQ CGCRE 008 de 04/2020 (INMETRO). 
Palavras-chave: Registro de medicamentos. Validação analítica. 
Espectrofotometria. 
 
 
INTRODUÇÃO 
A espectrofotometria é uma das técnicas analíticas mais utilizadas para 
determinações quantitativas de espécies químicas. A técnica baseia-se na 
absorção de radiações de determinados comprimentos de onda por moléculas 
e íons. Quando um feixe de luz monocromática passa através de uma cubeta 
de vidro contendo um líquido, a radiação emergente será menos intensa, pois 
parte dela será absorvida. O tratamento quantitativo da absorção de energia 
radiante pela matéria depende da lei de Beer, a qual mostra que adições 
sucessivas de moléculas de igual poder de absorção situadas no percurso de 
um feixe de radiação monocromática absorvem iguais frações de energia 
radiante que os atravessa. O instrumento proposto foi construído utilizando 
uma caixa plástica fechada onde foram colocados os principais componentes 
instrumentais. A fonte de luz utilizada foi um LED (Light Emitting Diode), que é 
um dispositivo semicondutor emissor de luz. A luz emitida é monocromática, 
sendo a cor dependente do cristal e da impureza de dopagem com que o 
componente é fabricado. Como detector utilizou-se um componente eletrônico 
do tipo LDR (Light Dependent resistor), que é um tipo de resistor cuja 
resistência varia conforme a intensidade de radiação eletromagnética do 
espectro visível que incide sobre ele (a resistência diminui quando a luz é muito 
alta, e quando a luz é baixa, a resistência no LDR aumenta). Para monitorar os 
valores de resistência no LDR foi utilizado um multímetro digital. As soluções 
das amostras foram colocadas entre o LED e LDR, utilizando uma caixa 
pequena de polietileno transparente, como cubeta. Para experimentar o 
instrumento proposto optou-se por determinar a concentração de ferro em 
diferentes amostras. Dentre as muitas aplicações analíticas da 
espectrofotometria de absorção molecular na região do visível, a determinação 
da concentração de ferro após a formação do complexo ferro-I, 10 -
fenantrolina, é bastante utilizada em demonstrações didáticas. A determinação 
desse complexo apresenta características que facilitam o entendimento de 
importantes conceitos analíticos como sensibilidade, seletividade, precisão e 
exatidão. Devido a coloração vermelha do complexo formado entre o ferro 11 e 
a 1,10-fenantrolina (Âmáx 512 nm), foi utilizado um LED verde, cuja cor é a 
complementar a do complexo formado. Ácido ascórbico foi o reagente utilizado 
como redutor para o ferro nas amostras e tampão aceto-acetato de sódio para 
manter o pH do meio reacional. As curvas analíticas obtidas com o instrumento 
proposto mostraram boa linearidade (R2 = 0,9912), apesar da baixa 
sensibilidade e os valores de concentração de algumas amostras estudadas 
concordam com os valores obtidos para as mesmas utilizando 
espectrofotômetro comercial. 
Devemos também expor alguns fragmentos referente ao 
“PARACETAMOL”, princípio ativo de interesse desta pesquisa. O paracetamol 
é um fármaco com propriedades analgésicas e antitérmicas, sendo 
amplamente utilizado em diversas patologias. É um medicamento de venda 
livre, não precisando de prescrição médica para sua comercialização. Embora 
considerado seguro, o uso de forma errada pode causar malefícios, como 
qualquer outro medicamento. 
 
 Figura 1 - Fonte: Farmacopeia Brasileira 6ºEd. 
Paracetamol, apresenta seguinte fórmula molecular; C8H9NO2, N-(4- 
Hidroxifenil) acetamida, contém, no mínimo, 98,0% e, no m áximo, 1 01,0% de 
C8H9NO2, em relação à substância anidra, em estado isolado possui 
característica física como pó cristalino branco, ligeiramente solúvel em água, 
solúvel em água fervente, facilmente solúvel em álcool etílico solúvel em 
hidróxido de sódio M. O paracetamol também é conhecido como 
acetaminofeno, este fármaco possui ações analgésicas e antipiréticas, 
indicadas pela indústria farmacêutica no tratamento de dor e febre leve e 
moderada. Atualmente no mercado o paracetamol é vendido em combinações 
com outros IFA’s, por exemplo os antitussígenos, ou medicamentos para dor 
com opiáceos, sua apresentação mais usual no mercado é na forma de 
comprimido, apresentação de interesse deste estudo. 
JUSTIFICATIVA E OBJETIVO 
O presente estudo tem como finalidade validar três requisitos tais como; 
seletividade, linearidade, e limite de detecção, para a metodologia analítica 
empregada na determinação do teor (teste de doseamento) do 
PARACETAMOL em comprimidos, de acordo com a Farmacopeia Brasileira – 
6ª edição, utilizando o documento da Anvisa, a RDC n. 166, de 2017 , se 
dispondo da técnica de espectrofotometria, para que se venha construir um 
maior embasamento teórico que venha somar nos desafios práticos do 
profissional farmacêutico na indústria. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
MATERIAL E MÉTODOS 
 “A validação deve garantir, através de estudos experimentais, que o 
método atenda às exigências das aplicações analíticas, assegurando a 
confiabilidade dos resultados” (ANVISA). “Validação é o processo de definir 
uma exigência analítica e confirmar que o método sob investigação tem 
capacidade de desempenho consistente com o que a aplicação requer” 
(Eurachem Working Group). “Confirmação por testes e apresentação de 
evidências objetivas de que determinados requisitos são preenchidos para um 
dado uso intencional” (ISO/IEC 17025). A validação de métodos assegura a 
credibilidade destes durante o uso rotineiro, sendo algumas vezes mencionado 
como o “processo que fornece uma evidência documentada de que o método 
realiza aquilo para o qual é indicado para fazer” (USP). “Avaliação sistemática 
de um procedimento analítico para demonstrar que está sob as condições nas 
quais deve ser aplicado” (WHO). No âmbito geral de validação de métodos é 
possível distinguir dois tipos: 
A validaçãono laboratório, que consiste em etapas de validação dentro 
de um único laboratório, seja para validar um método novo ou para verificar um 
método existente. A validação no laboratório é utilizada nas etapas preliminares 
do desenvolvimento de uma metodologia e na publicação de artigos para 
revistas científicas, em que são avaliadas todas as etapas de validação, sem 
verificar a reprodutibilidade. A validação completa envolve todas as 
características de desempenho e um estudo Inter laboratorial que é utilizado 
para verificar como a metodologia se comporta com uma determinada matriz 
em vários laboratórios, estabelecendo a reprodutibilidade da metodologia e a 
incerteza expandida associada à metodologia como um todo. Só assim a 
metodologia pode ser aceita como uma metodologia oficial para uma 
determinada aplicação. 
 
 
 
DESENVOLVIMENTO 
Este trabalho apresentara a discussão de três parâmetros referentes a 
requisitos relacionados a uma validação de método espectrofotométrico para 
determinação do teor de princípio ativo presente em amostras do medicamento 
Paracetamol 500 concentração correspondente ao valor do teor demg, 
Paracetamol de referência ou teórico preconizado através do registro do 
medicamento, cada comprimido revestido contém 500 mg de Paracetamol e 
excipientes em q.s.p 1 comprimido, sendo eles; copovidona, estearato de 
magnésio, hipromelose + macrogol, crospovidona, povidona, amidoglicolato de 
sódio, amido ácido esteárico, (Bula Paracetamol, EMS S/A; Farm. Resp.: Dra. 
Telma Elaine Spina CRF-SP nº 22.234). 
SELETIVIDADE 
Primeira etapa a ser analisado em um procedimento de validação, pois, 
se o método de análise não for seletivo, todos os demais parâmetros e 
requisitos (exemplo: linearidade, precisão e exatidão) estarão comprometidos, 
este requisito tem como objetivo demonstrar que o método de análise é capaz 
de quantificar o analito de interesse, Para a avaliação da seletividade do 
método espectrofotométrico de doseamento de Paracetamol presente em 
comprimidos de 500 mg, foi definido o ácido cítrico como componente presente 
na matriz e que poderia interferir na quantificação do Paracetamol. 
Foram realizadas análises de duas soluções: 
Solução A: Paracetamol (7 mg) em água. 
Solução B: Paracetamol (7 mg) + Ácido Cítrico (7 mg) em água. 
As duas soluções foram acondicionadas em cubeta de quartzo e 
analisadas no espectrofotômetro (UV/Vis) utilizando água como branco e leituras em 
257 nm de forma a obter o seguinte quadro de resultados: 
Tabela 1. Dados da Média de Absorbância obtida para o Doseamento de 
Paracetamol em 5 amostras de solução contendo apenas Paracetamol (Solução A) 
e solução de Paracetamol na presença de ácido cítrico (Solução B) em método 
espectrofotométrico (leitura em comprimento de onda (l) = 257 nm). 
 
Figura 2 - (Manual introdução em Ciências Farmacêuticas, UNIP, 2022) 
 Para avaliar a seletividade do método espectrofotométrico de doseamento 
de Paracetamol, é necessário realizar o teste t utilizando a seguinte equação: 
 
tcalculado= 0,66 660/ (0,08/ 5)= 0,003/0,035777087=0,084 
Critério de aprovação definidos para este trabalho: para que o método 
seja considerado estatisticamente seletivo, é necessário que o tcalculado seja 
inferior a 2,776 (valor limite obtido para o número de amostras utilizado no 
estudo da seletividade). 
LINEARIDADE 
 Esse requisito de validação corresponde à capacidade de uma 
metodologia analítica de demonstrar que os resultados obtidos (absorbância) 
são diretamente proporcionais à concentração do analito na amostra, dentro de 
um intervalo especificado (faixa de linearidade). A faixa de linearidade pode ser 
obtida através de padronização externa e montagem de curva de calibração 
para o método de doseamento de Paracetamol por espectrofotômetro em 
comprimento de onda(l) =257nm, para tanto, serão definidas concentrações do 
padrão de referência, (substância que se pretende analisar Paracetamol) a 
partir de diluições seriadas, a análise das diferentes concentrações do padrão 
resultará em uma variação proporcional no resultado da análise (absorbância), 
e esta corresponderá à curva de calibração para o método. Foram preparadas 
cinco concentrações diferentes de Paracetamol em água, conforme 
demonstrado na Tabela 2 a seguir: 
 
Figura 3 - (Manual introdução em Ciências Farmacêuticas, UNIP, 2022) 
Para avaliação da linearidade do método espectrofotométrico de 
doseamento de Paracetamol, avaliou-se o gráfico de dispersão, verificando os 
parâmetros tais como; linha de tendência linear para os pontos, coeficiente de 
correlação obtido através da equação de reta resultante (y = a.x + b).(r) 
Para que o método seja considerado estatisticamente linear, é necessário 
que o coeficiente de correlação (r) obtido seja maior que 0,99, pois significa 
que existe pouquíssima dispersão entre os valores obtidos e uma menor 
incerteza, além disso, o coeficiente angular da reta (a) deve ser diferente de 
zero,(“a”(coeficiente angular) e “b” (coeficiente linear). 
 
Figura 4 - Fonte Própria 
R^2=0,976 
R= 0,987927, arredondamento seguindo ordem de duas casas decimais 
definidas neste trabalho temos 0,99, aplicando regras de arredondamento,r= 
seguindo a Norma ABNT NBR 5891. Coeficiente angular aqui é diferente de 
zero. 
Logo este método possui linearidade. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
CONCLUSÃO 
Concluímos com o trabalho que a pesquisa realizada ampliou o 
conhecimento à respeito dos três requisitos solicitados para elucidação neste 
trabalho como a seletividade, linearidade e limite de quantificação, apenas a 
seletividade e linearidade são critérios de aprovação, quanto ao limite de 
detecção não podemos considerar critério se o método está valido em função 
do LD, mas ratificar o limite considerar critério se o método está valido em 
função do LD, mas ratificar o limite detectável que o método possui, conforme 
método espectrofotométrico para o Paracetamol aqui demonstrado a 
seletividade e linearidade estão aprovados, a validação de um método 
farmacopeico e não farmacopeico, é complexo, precisa-se de uma mão de obra 
especializada, e de um setor com uma boa estrutura no geral, tanto na parte 
instrumental quanto analítica, para que se possa executar o trabalho de 
maneira fina. É um processo caro, pois demanda compra de padrões, peças 
para equipamentos analíticos especificas, para uma determinada analise, e 
sem contar que a mão de obra do profissional especializado possui alto custo, 
e também um dos fatores que encarece o trabalho, é a necessidade de 
calibrações rastreáveis de toda parte instrumental e analítica, o profissional 
precisa de um nível superior especifico para desenvolver a atividade, no caso 
um farmacêutico especializado, ou químico especializado e desenvolvimento 
analítico, que se disponha de ferramentas estatística práticas como por 
exemplo o Excel, minitab, entre outros softwares, e que estas ferramentas 
possam ter seus resultados extraídos de maneira confiável precisam também 
passar por um processo de validação, ao qual chamamos de validação de 
métodos computadorizados. 
REFERÊNCIAS 
ANVISA, BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução da 
Diretoria Colegiada-RDC Nº 166. 2017. 
 
ANVISA, BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução da 
Diretoria Colegiada-RDC Nº 200. 2017. 
BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. 
Resolução RE n° 899, de 29 de maio de 2003. Determina a publicação do: 
Guia para validação de métodos analíticos e bioanalíticos. Diário Oficial [da] 
República Federativa do Brasil, Poder Executivo, Brasília, DF., 02 jun. 2003. 
Disponível em: <http://www.anvisa.gov.br/legis/resol/2003/re/899_03re.htm>. 
Acesso em: 19 set. 2022. 
DOQ-CGCRE-008 - REVISÃO 08. Orientação sobre Validação de Métodos 
Analíticos. INMETRO, Rio de Janeiro, ABR/2020. 
 
FARMACOPEIABRASILEIRA 6ºed, volume 1 - Agência Nacional de Vigilância 
Sanitária. 2019. 
 
FARMACOPEIA BRASILEIRA 6ºed, volume 2 Monografias - Insumos 
farmacêuticos e especialidade. 2019. 
 
MOURA, J.R. Desenvolvimento e validação de metodologia analítica 
aplicável ao desenvolvimento farmacotécnico de comprimidos de 
olanzapina. 2009.Dissertação (Pós-graduação em ciências farmacêuticas) - 
Universidade federal de Goiás, Goiânia. 
 
Portal Action – Validação de metodologia analítica - Disponível em: 
http://www.portalaction.com.br/validacao-de-metodologia-analitica/ Acesso em: 
20 de set. de 2021 
 
RDC 166 – Dispõe sobre a validação de métodos analíticos e da outras 
providencias. Publicada no DOU nº141, de 25 de julho de 2017 
 
ANVISA, BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução da 
Diretoria Colegiada-RDC Nº 301. 2019.