Aula 5 - Citogenética clínica

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Citogenética clínica
Citogenética convencional e molecular
Introdução
A citogenética clínica trata-se do estudo dos cromossomos em relação a estrutura e
número procurando anomalias ligadas a distúrbios cromossômicos.
As principais indicações para a análise cromossômica são:
• Problemas precoces de crescimento e desenvolvimento
• Natimortos e morte neonatal
• Problemas de fertilidade
• História familiar
• Neoplasia
• Gestação em uma mulher em idade avançada.
Citogenética convencional
Exame utilizado para verificar a morfologia cromossômica por coloração utilizando o
bandeamento.
Pode ser feita por três métodos básicos:
• Cultura temporária de leucócitos de sangue periférico
• Cultura de tecidos
• Cultura de fibroblastos de medula óssea
Citogenética convencional
Etapas:
1. Cultura de células
2. Bloqueio das células em metáfase
3. Tratamento das células com soluto hipotônico
4. Fixação
5. Espalhamento cromossômico
6. Coloração
Citogenética convencional
Fitohemaglutina
48h – 72h
Colchicina
Citogenética convencional
Organização dos cromossomos
Organização dos cromossomos
Organização dos cromossomos
Critérios para análise
Escolha das metáfases
1. Só devem ser escolhidas metáfases que tenham qualidade suficiente para que seja feita a
identificação de todos os cromossomas de uma forma inequívoca.
2. Não devem ser escolhidas metáfases que estejam muito próximas umas das outras (pode
haver sobreposição de cromossomas pertencentes a metáfases diferentes).
3. Não devem ser escolhidas metáfases cujos cromossomas estejam muito espalhados e
distribuídos de uma forma irregular, não circular (pode haver perda de cromossomos por
artefato técnico)
Estabelecimento do cariótipo por citogenética convencional
• Observação de 15-20 metáfases marcadas com bandeamento.
Detecção de mosaicismo
• 5% de mosaicismo: contagem de 100 metáfases 
Tipos de coloração
Padrão de bandas G
• Técnica mais utilizada em cariótipos de
rotina, trata-se da coloração com Giemsa,
é utilizada para visualizar forma e número
de cromossomos.
• Diferencia as regiões que se condensam
mais cedo durante a prófase ricas em AT –
regiões escuras das regiões condensadas
tardiamente, ricas em GC – regiões claras.
Padrão de bandas G
Padrão de bandas G
Hibridização In Situ por fluorescência - FISH
• Trata-se de uma técnica de citogenética molecular utilizada para examinar a
presença ou ausência de uma sequência particular de DNA ou para avaliar o
número ou a organização de um cromossomo ou de uma região cromossômica.
• O princípio da técnica é a hibridização de ácidos nucleicos que trata-se do
pareamento específico entre filamentos de DNA em condições específicas de
temperatura e concentração salina.
• A sequência alvo forma um pareamento com um fragmento de DNA de sequência
conhecida, denominada sonda, marcado com corante fluorescente.
• Estabelecimento do cariótipo por citogenética molecular:
• Observação de 30 metáfases para pesquisa de alterações em metáfases.
• Observação de 100 núcleos para pesquisa de alterações em núcleos interfásicos.
Hibridização In Situ por fluorescência - FISH
Hibridização In Situ por fluorescência - FISH
Referência bibliográfica
THOMPSON & THOMPSON et al. Genética Médica. 7. ed. Rio de Janeiro: Elsevier,
2008.
Rodrigues J. Técnicas de analise cromossômica. Fciências. Disponível em:
https://www.fciencias.com/2014/07/13/tecnicas-de-analise-cromossomica/
Mustacchi Z, Peres S. Estudo do cariótipo humano e principais cromossomopatias.
Disponível em: http://www.sindromededown.com.br/wp-
content/uploads/2015/05/capitulo06.pdf