2 Métodos de estudo da célula e tipos de microscopia

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20/02/2017
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PROFESSORA: Alexandra Manoela Oliveira Cruz
Métodos de estudo da célula e Métodos de estudo da célula e 
tipos de microscopiatipos de microscopia
Capítulo: 1 (Alberts et al., 2011- 3ª edição)
INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA 
DO SUL DE MINAS GERAIS – campus POÇOS DE CALDAS
Disciplina: BIOLOGIA CELULAR
Como as células podem ser estudadas?
Preparações à fresco
(temporárias)
Preparações fixadas
(permanentes)
� Estudo de células vivas
� O material deve ser 
preparado no momento da 
observação
� Preparação simples
� Algumas vezes necessitam 
de coloração
� Estudo de células mortas
� Permite utilizar a 
preparação por longos 
períodos
� Preparação mais complexa
� Fixação e coloração são 
imprescindíveis
� Boa qualidade das imagens
Coleta do material Processamento Observação Resultados
Principais Etapas para preparação da amostra
� Fixação
� Desidratação
� Inclusão/Embebição
� Secções ao micrótomo/criostato
� Coloração
� Observação ao microscópio
(I) (II) (III) (IV)
Principais Etapas para preparação da amostra
1. Coleta do material 2. Seccionamento do 
tecido 3. Fixação
4. Desidratação
5. Inclusão em 
parafina ou resina
6. Microtomia 
(cortes finos da amostra)
I) Coleta do material II) Processamento: Fixação
� Fixadores � Ex.: - Formaldeído 4%
- Glutaraldeído
Tratamento que garante a manutenção da
estrutura e forma do tecido e impede a destruição
das células por suas próprias enzimas (autólise) ou
bactérias.
Processo 
Químico 
(mais utilizado)
Processo Físico 
(por congelamento-
CRIOSTATO)
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II) Processamento: Desidratação
Água e etanol (50%) Água e etanol (75%) Água e etanol (100%)Água e etanol (80%)
Objetivo: retirar a água dos tecidos, a fim de
permitir a impregnação da peça com parafina.
• O espécime é submetido a desidratação sequencial em
concentrações crescentes de solventes orgânicos como
acetona e etanol.
Ex.: Desidratação em série alcoólica de etanol a 50%, 75%, 80% e 100%)
II) Processamento: Impregnação/Embebição
Objetivo: Proporcionar rigidez ao tecido para
facilitar o seccionamento em fragmentos delgados
para observação em microscópio.
Xilol e parafina/resina 
(75%)
parafina/resina (100%)Xilol e parafina/resina 
(80%)
Xilol e parafina/resina 
(50%)
II) Processamento: Inclusão/Emblocamento
Montagem
do
Bloco
MicrotomiaEm estado líquido, a
parafina/resina penetra
nos tecidos, dando-lhes,
depois de solidificada,
certa dureza.
II) Processamento: Secções ao micrótomo
MICROTOMIA: É a etapa em que se obtém delgadas
fatias de peças emblocadas em parafina ou resina.
II) Processamento: Secções ao micrótomo
• A espessura dos cortes geralmente
varia de 1 a 10 um (micrômetros).
Relembre que � 1 um = 0,001 mm
Montagem
da
Lâmina
Coloração
Cortes sobre a água
Principais Etapas para preparação da amostra
1. Coleta do material 2. Seccionamento do 
tecido 3. Fixação
4. Desidratação
5. Inclusão em 
parafina ou resina
6. Microtomia 
(cortes finos da amostra)
7. Montagem e coloração 
dos cortes 
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II) Processamento: Coloração
Objetivo: possibilitar a visualização dos tecidos, uma
vez que a maioria deles é incolor.
• Muitos corantes se comportam como substâncias de
caráter ácido ou básico e interagem eletrostaticamente
com estruturas dos tecidos
Corantes 
ácidos (-)
Corantes 
básicos (+)
Ex.: Azul de Toluidina, azul de 
metileno e Hematoxilina
Ex.: Orange G, Eosina e 
Fucsina ácida
II) Processamento: Coloração
Os componentes que se combinam com corantes ácidoscombinam com corantes ácidos
são chamados acidófilosacidófilos e os componentes que se combinam combinam 
com corantes básicoscom corantes básicos são chamados basófilosbasófilos . 
Ex.: 
- Núcleos das células úcleos das células �� são basófilos (DNAbasófilos (DNA , carga - ) ) �� coram-se 
pela hematoxilinahematoxilina (corante básico de cor roxa); 
- Citoplasma � é acidófilo acidófilo predominam substâncias básicassubstâncias básicas
(proteínas estruturais, carga +) � coram-se pela eosinaeosina (corante ácido 
de cor rosa).
Planos de secção (cortes) 
Corte transversal
Corte oblíquo
Corte longitudinal
Planos de secção (cortes) 
Tipos de microscopiaTipos de microscopia
Escala MicroscópicaEscala Microscópica
Observe a presença de bactérias na ponta de uma
agulha.
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Unidades de medida 
� A invenção do 
microscópio (século XVII) 
revolucionou a 
observação das células
Conversão das unidades de medida:
Escala Escala 
MicroscópicaMicroscópica
Relação entre o tamanho 
de vários organismos e a 
resolução do olho 
humano, do microscópio 
óptico e do microscópio 
eletrônico.
10 m
1 m
0,1 m
1 cm
1 mm
100 µm
10 µm
1 µm
100 nm
10 nm
1 nm
0,1 nm
III) Observação por Microscopia
�MICROSCOPIA DE LUZ (ÓPTICA)
�MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
�MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA
�MICROSCOPIA CONFOCAL
�MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA
MICROSCOPIA DE LUZ (ÓPTICA) Oculares
Escala de ajuste da 
distância interpupilar 
Cabeçote
Estativo ou Braço
Interruptor principal
Seletor de intensidade 
luminosa
Controle do eixo X-Y
Macrométrico
Micrométrico
Condensador
Pé ou Base
Anel do diafragma de 
campo
Fonte de luz
Alavanca do diafragma de 
abertura
Platina ou Mesa
Presilha ou Pinça
Objetiva
Revólver ou Porta-objetiva 
Anel de ajuste 
de dioptrias 
Deslizador Dummy
MICROSCOPIA ÓPTICA ( DE LUZ)
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MICROSCOPIA DE LUZ (ÓPTICA)
PRINCÍPIOPRINCÍPIO
MICROSCOPIA DE LUZ (ÓPTICA): IMAGENS
Caule de planta
Tecido Epitelial
Ovócito II
Protozoário
Bactéria
Cromossomos
MICROSCOPIA DE LUZ (ÓPTICA): IMAGENS
Samambaia (Raiz) Ducto coletor de urina
MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA
MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA
Células embrião de mosca ( núcleos em divisão)
MICROSCOPIA CONFOCAL
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MICROSCOPIA CONFOCAL
Microscopia convencional de 
fluorescência Microscopia Confocal
MICROSCOPIA CONFOCAL
CROMOSSOMOS CROMOSSOMOS --
CONFOCALCONFOCAL
CROMOSSOMOS CROMOSSOMOS --
CONFOCALCONFOCAL
NEURÔNIOSNEURÔNIOSNEURÔNIOSNEURÔNIOS
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
PRINCÍPIOPRINCÍPIO
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
MITOCÔNDRIA MITOCÔNDRIA 
(MET)(MET)
MITOCÔNDRIA MITOCÔNDRIA 
(MET)(MET)
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
Citoplasma de uma célula
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MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA
PRINCÍPIOPRINCÍPIO
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA
Grãos de pólen
Estômatos
Ácaro
HemáceasHemáceasHemáceasHemáceas
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA