Prévia do material em texto
AULA 04 – MEIOS DE CULTURA PROF.A. LUCIANA FIALHO Aula 03: Meios de cultura Profa. Luciana Fialho Biomédica DEFINIÇÃO Material nutriente preparado no laboratório para crescimento de microrganismo. DEFINIÇÃO Sobrevivência e o crescimento dos microrganismos depende do suprimento de nutrientes e de ambiente físico favorável. CRITÉRIOS PARA O CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS EM MEIOS DE CULTURA: Componentes nutricionais corretos, em quantidades e proporções; Condições adequadas de incubação; pH ajustado; e Estéril. CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA Os meios de cultura podem ser classificados de acordo com seu estado físico, composição química e objetivo funcional. CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO Líquidos ou caldos: Não têm agente solidificante: nutrientes dissolvidos em solução aquosa; Não há formação de colônias; Para aumentar o número de microrganismos e para provas bioquímicas. CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO Sólidos: Adição de uma substância solidificante em determinada quantidade (1 a 2%); Superfície endurecida permitem a formação e caracterização de colônias; O ágar é um polissacarídio complexo obtido de alga marinha vermelha. Ele é utilizado como agente solidificante, muito semelhante à maneira como a gelatina é utilizada como agente solidificante na culinária. CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO Semi Sólidos: A adição de uma substância solidificante em menor quantidade (0,5 a 0,8%); Estudos da mobilidade, testes bioquímicos; CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM A COMPOSIÇÃO QUÍMICA Naturais ou Complexos: Sem composição química definida, geralmente extratos vegetais, animais ou de outros microrganismos usados para microrganismos menos exigentes na nutrição. Ex.: Meio de Löwenstein Jensen (Mycobacterium tuberculosis) contém sais, ovos e pedaços de batata. CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM A COMPOSIÇÃO QUÍMICA Artificiais ou Quimicamente definidos: Composição química definida; Usados para microrganismos mais específicos e exigentes; Ex.: Caldo Tetrationato (Samonella) contém apenas iodo, KI e água. CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL Meios Diferenciais: Utilizados para diferenciar microrganismos ou grupos de microrganismos em um meio. A presença de determinados corantes ou de produtos químicos nos meios produzirão certas alterações características ou padrões de crescimento que são utilizados para a identificação ou a diferenciação de microrganismos. CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL Meios Diferenciais: Ex.: Ágar Sangue, que contém células vermelhas do sangue, é muito utilizado pelos microbiologistas para identificação de espécies bacterianas capazes de destruir células sanguíneas. o ágar MacConkey diferencia as bactérias gram- negativas fermentadoras das não fermentadoras da lactose. CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL Meio de Cultura Enriquecido Um meio de cultura enriquecido corresponde a um caldo ou meio sólido contendo um grande suprimento de nutrientes que promove o crescimento dos microrganismos fastidiosos. Geralmente são meios que foram suplementados com materiais altamente nutritivos. O meio de Thayer-Martin, auxilia no crescimento de bactérias como N. gonorrhoeae. https://kasvi.com.br/produtos/?ref=K25-610022&desc=meio-gc.-frasco-500g CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL Meios Seletivos: O meio seletivo permite o crescimento de certos tipos de microrganismos e inibe o crescimento de outros microrganismos. Ele contém inibidores, geralmente antibióticos, que tornam inviável o crescimento de certos microrganismos, sem inibir o crescimento do microrganismo alvo. Por exemplo, o Ágar MacConkey inibe o crescimento de bactérias gram-positivas, selecionando assim as bactérias gram-negativas. https://kasvi.com.br/wp_kasvi/produtos/?ref=K25-610028&desc=agar-mac-conkey.-frasco-500g CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL Meios Seletivos O Ágar eosina-azul de Metileno (EMB) é um meio seletivo que inibe o crescimento de organismos gram-positivos, enquanto suporta o crescimento de organismos gram-negativos. Além disso, o ágar EMB também é um meio diferencial, pois distingue fermentadores de lactose, como a Escherichia coli, dos organismos gram-negativos não fermentadores de lactose, como Pseudomonas aeruginosa. https://kasvi.com.br/produtos/?ref=K25-610019&desc=agar-eosina-azul-de-metileno-(emb-levine).-frasco-500g CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL Meios de transporte Esses meios são úteis em situações que não é possível realizar a cultura logo no momento de coleta. Para isso, utiliza-se o meio de cultura de transporte, que permite a manutenção de boas condições para sobrevivência do organismo até que esse possa ser cultivado em seu meio de rotina. CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL Meios de identificação Realizam provas bioquímicas para identificar determinadas características fisiológicas e peculiares de alguns micro-organismos.. CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL Meios de estocagem e manutenção Esses meios de cultura são os mais conhecidos e utilizados em laboratórios. Permitem que micro-organismos e células sejam mantidos e estocados, garantindo nutrientes e um ambiente favorável ao seu crescimento. O meio de cultura possibilita que micro-organismos cresçam e se multipliquem, ao promover um ambiente adequado e ideal para a sua proliferação. Para isso, utilizam diversos nutrientes específicos para cada micro-organismo que se deseja cultivar. São muito importantes em algumas aplicações e podem ter diversos tipos. Dessa forma, é necessário entender primeiramente a necessidade de uso antes de optar pelo meio de cultura adequado. Exemplos de meios de cultura utilizados na microbiologia MEIOS DE CULTURA PARA TRANSPORTE E CONSERVAÇÃO CARY BLAIR - meio de Cary Blair foi formulado à partir do meio de Stuart, uma vez que microrganismos patogênicos e outros coliformes fecais sobrevivem bem neste meio. - O que difere este meio do meio de Stuart, é a adição de uma solução salina e omitindo da fórmula o azul de metileno. - UTILIDADE Transporte de material fecal e conseqüente conservação dos microrganismos. ÁGAR NUTRIENTE - O Nutriente Ágar é um meio relativamente simples, de fácil preparação e barato, muito usado nos procedimentos do laboratório de Microbiologia. - UTILIDADE : nutriente ágar tem várias aplicações no laboratório de Microbiologia, e pode ser utilizado para análise de água, alimentos e leite como meio para cultivo preliminar das amostras submetidas à exames bacteriológicos e isolamento de organismos para culturas puras. Exemplos de meios de cultura utilizados na microbiologia MEIOS PARA CRESCIMENTO E ISOLAMENTO ÁGAR CHOCOLATE - utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora cresçam neste meio quase todos os tipos de microrganismos. - À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes. - UTILIDADE Crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp., Neisseria spp. Exemplos de meios de cultura utilizados na microbiologia ÁGAR MAC CONKEY - O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e estafilococos. - A concentração de sais de bile é relativamente baixa em comparação com outros meios, por isso não é tão seletivo para Gram negativos . - UTILIDADE : Isolar bacilos Gram negativos (enterobactérias) e verificar a fermentação ou não da lactose. Exemplos de meios de cultura utilizados na microbiologia ÁGAR SANGUE - O meio de Ágar sangue oferece ótimas condições de crescimento à maioria dos microrganismos. A conservação dos eritrócitos íntegrosfavorecem a formação de halos de hemólise nítidos, úteis para a diferenciação de Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. - UTILIDADE : Usado o para o isolamento de microrganismos não fastidiosos. - Verificação de hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. Exemplos de meios de cultura utilizados na microbiologia ÁGAR CLED – CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE DEFICIENT - Usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras de urina. - - UTILIDADE: Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras. Exemplos de meios de cultura utilizados na microbiologia CALDO BHI – BRAIN HEART INFUSION - É um meio derivado de nutrientes de cérebro e coração, peptona e dextrose. - A peptona e a infusão são fontes de nitrogênio, carbono, enxofre e vitaminas. - A dextose é um carboidrato que os microrganismos utilizam para fermentação. - UTILIDADE : Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos. - Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos, para realização de teste de coagulase em tubo, para teste de crescimento bacteriano. Exemplos de meios de cultura utilizados na microbiologia ÁGAR SABOURAUD - Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos leveduriformes e filamentosos. - UTILIDADE: Cultivo e crescimento de espécies de Candidas e fungos filamentosos, particularmente associados a infecções superficiais. - Caracterização macroscópica do fungo filamentoso (colônia gigante). Exemplos de meios de cultura utilizados na microbiologia FIM