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Relatório da aula prática 2 Microbiologia – 16/08/2025 Polo: Nova Friburgo Aluna: Michele Grativol Tardem Matricula: 22112020050 Introdução A microbiologia é um campo da ciência que estuda os micróbios e suas interações com o ambiente. Os micróbios são seres vivos unicelulares (bactérias, fungos, algas e limos), que habitam o planeta Terra há cerca de 3,9 bilhões de anos e foram os responsáveis pelas mudanças na atmosfera que possibilitou o estabelecimento de novos ecossistemas. Apesar de muitas vezes estarem associados a doenças, os micróbios desempenham papéis fundamentais para a manutenção da vida no planeta. Eles participam de processos ecológicos essenciais, como o ciclo de nutrientes, a produção de alimentos fermentados, a síntese de antibióticos e até a biotecnologia moderna, sendo indispensáveis tanto para a saúde humana quanto para o equilíbrio ambiental. A atividade prática foi dividida em atividades distintas. Na primeira atividade foi ressaltada a importância de uma boa higienização das mãos, através de uma atividade lúdica. A segunda parte foi direcionada ao método de coloração de Gram. A terceira atividade foi sobre a proliferação de micróbios, no caso fungos, na presença de umidade. Objetivos A prática teve como objetivo destacar a importância da higienização das mãos, explorar a diversidade microbiana presente em diferentes ambientes e aplicar a técnica de coloração de Gram para distinguir bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. A proposta incluiu demonstrar como a remoção total de contaminantes é difícil mesmo após a lavagem, observar microrganismos em distintas amostras e compreender o papel do sabão neutro na desestabilização das membranas celulares, ressaltando sua eficácia na limpeza. Também buscou relacionar o crescimento de fungos em pães com a influência da umidade e das condições de higiene. Matérias utilizados: • Guache azul; • Lâminas de microscópio; • Microscópio óptico; • Violeta genciana; • Lugol; • Cotonetes; • Água; • Sabão neutro; • Óleo vegetal; • Água; • Fatias de pão; • Saquinhos plásticos para incubação; • Recipientes limpos; • Pipetas; • Frascos para manipulação de líquidos; • Isqueiro; Metodologia Atividade 1- Higienização das mãos Para a realização da atividade 1 foi utilizado tinta guache azul, sabão neutro em barra e água corrente. Foi aplicado tinta guache nos braços de dois alunos, até a altura dos cotovelos, logo em seguida os alunos foram vendados e tiveram que se lavar com o sabão, retirando o máximo possível do guache sem estar vendo. Ao longo da atividade foi discutido a importância de bons métodos para higienização das mãos, a dificuldade de realmente está lavando as mãos e eliminando todos os resíduos utilizando apenas água e sabão e como é difícil fazer uma higienização completa quando não estamos vendo os agentes contaminantes, como ocorre com os micróbios. Resultados e Discussão Foi abordado também a importância da utilização do sabão e do detergente na higienização, uma vez que, o sabão e o detergente atuam sobre bactérias e alguns vírus, pois possuem moléculas anfipáticas, capazes de interagir tanto com a água quanto com lipídios. Essa característica permite que desestabilizem a membrana celular bacteriana e o envelope lipídico de vírus envelopados, levando à perda de integridade estrutural e, consequentemente, à inativação desses microrganismos. Além disso, promovem a remoção mecânica de sujeira e biofilmes, arrastando micróbios junto com a água durante a higienização. Atividade 2 e 3- Método de coloração de Gram Metodologia: Na atividade 2, foram utilizados um tubo de ensaio, água, óleo vegetal, violeta genciana e lugol. Inicialmente, adicionou-se água ao tubo até atingir aproximadamente 3 cm de altura. Em seguida, acrescentou-se óleo vegetal, formando uma segunda camada de cerca de 1 cm. Após essa etapa, foram adicionadas duas gotas de violeta genciana, o tubo foi tampado e agitado, permitindo a observação da dispersão do corante nas diferentes fases. Por fim, adicionaram-se duas gotas de lugol, repetindo-se o processo de agitação para avaliar a interação das substâncias com as soluções presentes no tubo. Resultados e Discussão Após a adição da violeta genciana e a agitação do tubo, observou-se que o corante se concentrou na camada de óleo, evidenciando seu caráter hidrofóbico e afinidade com substâncias lipídicas. Já a adição do lugol, seguida de nova agitação, mostrou que este corante se dispersou preferencialmente na camada aquosa, demonstrando sua natureza hidrofílica. A atividade evidenciou, por meio da interação de substâncias hidrofílicas e hidrofóbicas, como diferentes compostos se distribuem entre fases aquosas e lipídicas. Esse princípio está diretamente relacionado à técnica de coloração de Gram, que se baseia nas diferenças estruturais das paredes bacterianas e em sua afinidade por determinados corantes, permitindo diferenciá- las em Gram-positivas e Gram-negativas. Atividade 3 Metodologia Na atividade 3, foi utilizada uma amostra da mucosa oral, coletada com auxílio de um cotonete estéril. O material coletado foi transferido para uma lâmina de microscopia, onde as bactérias foram fixadas cuidadosamente com o calor da chama de um isqueiro, evitando a destruição celular. Em seguida, procedeu-se à coloração de Gram: inicialmente, aplicou-se violeta genciana sobre todo o esfregaço, deixando-o em contato por 1 minuto. Após escorrer o excesso do corante, adicionou-se lugol, também por 1 minuto. Na etapa seguinte, realizou-se a descoloração com álcool, removendo o excesso. Por fim, as lâminas foram analisadas ao microscópio óptico, permitindo a observação das diferenças de coloração entre as bactérias presentes na amostra. Resultados e Discussão A análise microscópica evidenciou bactérias com coloração arroxeada, classificadas como Gram-positivas, devido à espessa camada de peptidoglicano em sua parede celular, que retém o cristal violeta mesmo após a descoloração com álcool. Também foram observadas bactérias com coloração avermelhada, típicas de Gram-negativas, cuja parede celular mais delgada e a presença de uma membrana externa lipídica dificultam a retenção do cristal violeta, permitindo que se corem pelo contraste. Os resultados demonstram, de forma prática, o princípio fundamental da técnica de Gram: a resposta diferenciada das bactérias ao processo de coloração, em função da composição de suas paredes celulares. Essa distinção não apenas possibilita a classificação bacteriana, mas também tem grande relevância clínica, já que a identificação de Gram-positivas ou Gram-negativas orienta decisões diagnósticas e terapêuticas, incluindo a escolha adequada de antibióticos. Atividade 4 Metodologia Para a realização da atividade 4, foram utilizados dois pequenos pedaços de pão, água e saquinhos plásticos transparentes. Um dos pedaços de pão foi umedecido com água, enquanto o outro permaneceu seco, servindo como controle. Cada pedaço foi colocado separadamente em um saquinho transparente e fechado para evitar contaminação externa direta. Os saquinhos foram mantidos em temperatura ambiente e observados diariamente durante aproximadamente 7 dias. Resultados e Discussão As observações focaram na presença de alterações visíveis nos pães, como o surgimento de micróbios, crescimento de fungos e possíveis colônias bacterianas, que indicam a formação de biofilmes sobre a superfície do pão. A partir do terceiro dia, o pedaço de pão umedecido apresentou sinais visíveis de crescimento microbiano, fungos, caracterizados por manchas esbranquiçadas e posteriormente esverdeadas, típicas de bolores. Já o pão seco manteve sua aparência inalterada ao longo de toda a semana, sem sinais de colonização microbiana. Os resultados obtidos demonstram quea umidade é um fator crítico para o desenvolvimento microbiano. A presença de água no pão umedecido criou condições ideais para a adesão inicial de microrganismos à superfície, permitindo a formação de biofilmes. Biofilmes são comunidades microbianas organizadas em uma matriz extracelular que protege os microrganismos contra fatores adversos, como variações ambientais e desinfetantes. O crescimento observado do fungo indica que este tipo de microrganismo é capaz de colonizar rapidamente superfícies úmidas, enquanto o pão seco ofereceu condições desfavoráveis para a proliferação microbiana, mantendo-se inalterado. Esse experimento evidencia a importância de fatores ambientais, como umidade, na dinâmica de colonização e formação de biofilmes, um conceito central em microbiologia e em processos de deterioração de alimentos. Conclusão As atividades práticas realizadas permitiram compreender de forma integrada conceitos fundamentais da microbiologia. A higienização das mãos evidenciou a dificuldade de eliminar completamente micróbios, destacando a importância do sabão e do detergente na remoção mecânica e química de micróbis e biofilmes. A técnica de coloração de Gram mostrou-se eficaz para diferenciar bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, reforçando como a estrutura da parede celular influencia a resposta ao corante. Por fim, a observação do crescimento microbiano em pedaços de pão destacou o papel crítico da umidade na formação de biofilmes e proliferação de fungos. O conjunto das atividades evidenciou que fatores ambientais, interações químicas e estruturais das células microbianas são determinantes na dinâmica da colonização e sobrevivência de micróbios, reforçando a importância de práticas de higiene, controle de umidade e compreensão da microbiologia aplicada à vida cotidiana e à saúde. Referências Bibliográficas CERDERJ. Módulo de Microbiologia – Vol. 1. Centro de Referência em Educação a Distância do Estado do Rio de Janeiro, 2019. SHAPIRO, B. J. & KOLTER, R. 10% Humano: Como os Micróbios Moldam Nosso Corpo e Nosso Mundo. São Paulo: Editora Intrínseca, 2018.