Imunodiagnóstico

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IMUNODIAGNOSTICO 
• utilização de anticorpos como método de diagnóstico laboratorial 
POR QUE USAR ANTICORPOS?
• SENSIBILIDADE: Capacidade do teste de detectar os indivíduos verdadeiramente 
positivos (diagnosticar corretamente os doentes)
• ESPECIFICIDADE: Capacidade do teste de detectar os verdadeiros negativos 
(diagnosticar corretamente os indivíduos sadios)
• Determinar a exposição prévia a um antígeno
• Determinar o grau de exposição a um agente
Testes imunológicos 
• Vantagens: Rápidos, simples, de baixo custo operacional e possibilitam automação
• Desvantagens: Dependem da capacidade imunológica do hospedeiro, do estado 
nutricional e da integridade dos mecanismos imunes. Pode ocorrer reação cruzada.
Materiais para os testes 
• soro do paciente 
• Antiglobulina ("Imunoglobulinascontraimunoglobulinas)
• Anticorpos monoclonais (Plasmócitos cultivados em laboratório)
• Controles: Positivo (Sempre vai dar positivo no teste) 
- Negativo (Sempre vai dar negativo no teste)
Testes de imunodiagnostico 
• Reações de aglutinação
• Ensaiosenzimáticos
• Ensaiosimunocromatográficos
• Radioimunoensaios
• Reações de fluorescência
• Reações de difusã
REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO 
• A região Fab do anticorpo é bivalente (capacidade de se ligar a dois epitopos)
• Utiliza-se o anticorpo específico contra o antígeno a ser detectado 
• Juntam-se os anticorpos formando agregados visíveis a olho nu (aglutinação)
• Aglutinação DIRETA: Detecta anticorpos contra grandes quantidades de antígenos das 
próprias células (Hemácias - hemoaglutinação -, bactérias ou fungos)
- Exemplo: Auto-aglutinação na anemia auto-imune
• Aglutinação Indireta (Passiva): Revestimos as hemácias por ligação covalente com os 
antígenos a serem testados.
– São adicionados a uma placa contendo poços e diluições seriadas do soro do 
paciente.
– Se houver o anticorpo específico para aquele antígeno, as hemácias se aglutinam, e 
formam uma camada no fundo do poço.
– Se não houver o anticorpo, as células formam um botão no fundo do poço.
Usados para testes de eficiência de vacinas e grau de exposição do paciente ao antígeno
• vantagens:Simples, baixo custo, rápido, fácil execução
• desvantagens: Baixa sensibilidade e especificidade devido ao armazenamento das 
hemácias (resultados falso negativos)
• Fenômeno Prozona: Inibição da aglutinação por alta concentração de anticorpos
ELISA(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay) 
• Ensaio Imunoadsorvente Ligado à Enzima
• Placa com micropoços preenchidas com uma solução de antígeno a ser detectado 
• No soro do pôde-se anticorpos específicos e não específicos ao antígeno. Com isso, 
espera-se um tempo até que os anticorpos se liguem aos antígenos no fundo do poço 
e depois lava-se o poço. Tudo que não fez opsonização vai embora, sobrando apenas 
os antígenos e anticorpos específicos contra o antígeno.
- após isso adiciona-se uma solução contendo antiglobulinas, que foram fixadas a uma 
enzima laboratorialmente
- Adiciona-se um substrato que possui algum elemento que vai reagir com a enzima, 
que por reação da enzima o substrato vai mudar de cor 
• vantagens: Altamente sensível e específico Alto grau de confiabilidade Custo baixo a 
médio.
• Desvantagens: Pequenas variações de pipetagem, temperatura e tempo de incubação 
podem alterar os resultados (pode ocorrer Erros de manipulação)
IMUNOCROMATOGRAFIA
• Testes simples que podem ser usados na clínica, em 
pouco tempo, e de baixo custo
• O soro ou o sangue vai entrar em contato com a tira de 
papel poroso absorvendo-o 
• Vantagens: Rápido, barato, fácil interpretação, a olho 
nu, com alta sensibilidade e especificidade
• Desvantagens; É um teste de triagem. Precisa de ensaio confirmatório
RADIOIMUNOENSAIO (RIE) 
• Utilizado para detecção de quantidades muito pequenas de antígenos
• O antígeno é marcado com um radioisótopo: Trício (H3); Carbono 14; Iodo 125
• Utiliza-se poços com anticorpos específicos contra o antígeno.(Todas as FAB estão 
ocupadas por antígenos radioativos)
• É aplicado o sono do paciente no poço, onde antígenos do paciente vão se ligar a 
região FAB e alguns antígenos radioativos vão ficar flutuando pois não tem onde se 
prenderem. 
• Quanto mais radioatividade tiver, mais competição pela FAB dos anticorpos aconteceu 
• Vantagens: Altamente sensíveis
• Desvantagens: Alto custo, riscos de radioatividade e necessidade de descarte do 
material radioativo
IMUNOFLUORESCÊNCIA 
• Utilizam-se anticorpos marcados com corantes fluorescentes
– IF Direta: detecta um antígeno
– IF Indireta: detecta um anticorpo
• é aplicado sobre o marcado fluorescente uma luz ultravioleta e o que brilha é positivo a 
reação 
• Vantagens: Alta especificidade e sensibilidade. Pode-se detectar proteínas 
intracelulares
• Desvantagens: Alto custo do microscópio de fluorescência
WESTERN BLOTTING
• Utilizam-se cargas elétricas→eletroforese
• Reconhecimento de antígenos com peso molecular definido
• Identificação de anticorpos que reconhecem antígeno específico em solução com 
diversos antígenos
• 1ª etapa: aplicação dos anticorpos em 
uma das pontas no gel e realização da 
eletroforese. Os componentes têm pesos 
moleculares diferentes, cada um se 
localizando em uma banda
• 2ª etapa: As proteínas são transferidas 
para uma folha de celulose (deixando as 
proteínas imobilizadas)
• 3ª etapa: Visualização dos antígenos 
transferidos por ação enzimática ou radioimunoensaio. Onde houve reação Ag x Ac, 
formam-se bandas
• vantagens: Alta sensibilidade e especificidade. Reconhecimento de antígenos 
individuais em um extrato
• Desvantagens: Custo médio a alto, Procedimento longo, propenso a erros em diversos 
pontos. Se for necessário radioimunoensaio, descarte de material radioativo
OUTROS MÉTODOS IMUNOLÓGICOS 
• Imuno-histoquímica→aplicação em cortes histológicos
• Imunofiltração
• Citometria de fluxo
• Imunodifusão e imunodifusão radial
• Fixação de complemento
• Ensaio em organismos vivos
• Métodos moleculares (PCR)