Aula Testes Diagnósticos_2023 1

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Testes diagnósticos 
Luís Fernando Parizi 
 
 
 
2023/1 
Sorologia 
Sorologia: mensuração da interação entre 
antígeno e anticorpo para diagnóstico 
Deteção de antígenos relacionados a uma 
infecção corrente 
Detecção de anticorpos a uma infecção prévia 
Soro policlonal 
Soro monoclonal 
Sensibilidade 
A sensibilidade de um teste é definida pela 
proporção de animais com a doença de interesse 
que têm o resultado do teste positivo. Indica 
quão bom é o teste para identificar os indivíduos 
infectados. 
Percentual de resultados positivos em pacientes com a 
infecção. 
Uma sensibilidade de 95% significa que 95% dos 
pacientes com a infecção serão identificados e que 5% 
dos pacientes terão um resultado “falso negativo”. 
 
Especificidade 
A especificidade de um teste é a proporção de 
animais sem a infecção que tem o teste negativo. 
Indica quão bom é o teste para identificar os 
indivíduos que não estão infectados. 
Percentual de resultados negativos em pacientes sem a 
infecção. 
Uma especificidade de 95% significa que 95% dos 
pacientes sem a infecção não serão identificados e que 
5% dos pacientes terão um resultado “falso positivo”. 
 
Medição dos complexos 
imunes 
Testes de ligação primária 
Um dos reagentes precisa estar ligado quimicamente 
Radioisótopos 
Corantes fluorescentes 
Enzimas 
ELISA 
Imunohistoquímica 
Western blot 
 
Radioimunoensaio 
Vantagem 
alta sensibilidade 
Desvantagens 
custo elevado 
(aparelhos de 
detecção) 
perigo no manuseio 
meia vida curta 
(diminuição do sinal) 
descarte do material 
radioativo 
Ensaio competitivo 
Enzimas 
Vantagens 
Estáveis 
Baratas 
Desvantagens 
Moléculas grandes, podendo atrapalhar a 
ligação pelos anticorpos 
Perde atividade pela ligação aos anticorpos 
Ensaios imunoflorescentes 
Corantes fluorescentes 
Isotiocianato de fluoresceína (FITC) 
Ensaios imunoflorescentes 
Direto 
Ensaios imunofluorescentes 
Indireto 
Maior fluorescência 
Detecção das classes de Ig 
 
Ensaios imunoenzimáticos 
ELISA 
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay 
Enzimas 
Fosfatase alcalina 
Peroxidase 
Detecção 
Antígenos 
Anticorpos 
ELISA 
Indireto 
Sanduíche 
Antígeno marcado 
Competitivo 
ELISA Indireto 
 
Positive 
Control 
Negative 
Control 
Patient 
A 
Patient 
B 
Patient 
C 
Assay 
Control 
1.689 0.153 0.135 0.412 1.999 0.123 
ELISA 
Sanduíche 
 
ELISA 
antígeno 
marcado 
 
ELISA 
competitivo 
 
Imunohistoquímica 
Anticorpos ligados a 
enzimas (ex. peroxidase) 
são usados para identificar 
antígenos específicos em 
cortes histológicos 
Pode ser direto ou indireto 
Densenvolvimento da cor 
marrom onde há anticorpos 
ligados 
O tecido pode ser primerio 
visualizado por microscopia 
de luz 
Titulação do soro 
Diluição máxima do 
soro até detecção de 
sinal positivo 
Medição dos complexos 
imunes 
Testes de ligação secundária 
A ligação entre os antígenos e anticorpos são seguidos 
por um efeito secundário 
Precipitação 
Hemaglutinação 
Lise celular 
Neutralização 
 
Imunoprecipitação 
Se os anticorpos se ligam a antígenos solúveis, pode 
haver precipitação, dependendo da proporção entre 
antígeno-anticorpo 
Imunoprecipitação 
Presença de 
imunocomplexos 
e antígenos livres 
Zona de equivalência 
Presença de 
anticorpos livres 
Imunodifusão 
Geldifusão 
No poço central é 
adicionado anticorpo e 
nos dois acima um 
antígeno na mesma 
concentração 
Ocorre uma difusão 
radial 
Há formação de 
precipitado na 
concentração de 
equivalência entre o 
antígeno e o anticorpo 
AGID – 
Imunodifusão em 
ágar 
(Ouchterlony) 
Imunodifusão radial (Mancini) 
Anticorpos são misturados ao gel e quantidades 
diferentes de antígenos são adicionados aos poços 
Imunoeletroforese 
Mais indicado para uma mistura complexa de antígenos 
(25-40 antígenos) 
Aglutinação 
Formação de aglomerados de 
pequenas massas de células 
IgM>IgG 
Diferença para a precipitação: 
tamanho da partícula antigênica 
Mais sensível que precipitação 
Conjugação de antígenos a 
particulas inertes como hemácias, 
bactérias ou látex 
 
Aglutinação 
Hemoaglutinação 
Inibição da Hemaglutinação 
Alguns vírus aglutinam 
hemácias 
Anticorpos contra esses 
vírus podem bloquear 
essa aglutinação 
Identificação dos vírus 
Quantificação dos níveis 
de anticorpos 
Fixação do complemento 
Mensurar os níveis de anticorpos pela lise de hemácias 
causadas pelo complemento 
Soroneutralização 
Bloqueio da infecção dos vírus sobre as células por 
interfirir nos sítios de ligação