Leucopoiese e Granulopoiese

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Leucopoiese
Faz parte do sistema imune do organismo 
Tem papel fundamental em todas as formas de defesa do organismo, resposta inata, resposta adquirida (humoral, tecidual...)
Existem 5 tipos de leucócitos:
Divididos em agranulócitos (ou mononucleares) e granulócitos (polimorfonucleares)
Em caes e gatos, os neutrófilos estao presente em maior abundancia 
Leucopoiese tem inicio junto a formação do fígado na fase embrionária e com o tempo a leucopoiese hepática vai diminuindo e vai aumentando nos órgãos linfoides
Nos mamífero a leucopoiese pós natal ocorre principalmente na medula óssea, ou seja, ela é extravascular 
A leucopoiese ocorre a partir de uma célula tronco pluripotente que pode ser estimulada pelas poietinas (eosinopoietina, neutrofilopoietina, etc...), citocinas liberadas em algum foco, fatores estimulantes de colônia
A célula tronco pluripotente vai ser estimulada e vai dar origem as células tronco unidades formadoras de colonias linfoide e mieloide. 
Essas unidades formadoras de colônia podem dar origem a um tipo celular único (oligopotentes) ou podem dar origem a vários tipos celulares (multipotentes)
A linfoide é multipotente pois da origem aos linfócitos B e T
A mieloide também é multipotente e da origem as unidades formadoras de colonias paraeritrocitos, unidades formadoras de colonia paramegacariocitos e unidade formadora de colonias paragranulocitos e monócitos 
Tanto a unidade formadora de colonias paraeritrocitos quanto a megacariócitos, são unipotentes pois vao dar origem a um único tipo celular 
Já a unidade formadoras de colonias paragranulócitos e monócitos são multipotentes, pois tem capacidade de formação de diversos tipos celulares 
Eosinófilo é uma célula de processo alérgico 
As unidades formadoras de colônia linfoide podem seguir 2 trajetos:
· Podem continuar se multiplicando dentro da medula óssea e gerando precursores para linfócitos B que são responsáveis pela resposta imunológica humoral (aquela que o sangue vai gerar anticorpos) 
· Ou as unidades formadoras de colonias podem se encaminhar ao timo e vao dar origem aos linfócitos T que são responsáveis pela resposta tecidual (ou celular) 
Em mamíferos, a linhagem dos linfócitos B, é produzida na medula óssea, nas aves ocorre na Bursa de Fabricius
Granulopoiese (formação dos eosinófilos, neutrófilos e basófilos)
A célula tronco pluripotente se diferencia dando origem a unidade formadora de colônia mieloide que vai multiplicar e se diferenciar dando origem a unidade formadora de colônia granulócito monócito, a partir dai tem-se o caminho dos 3 granulocitos existentes na corrente sanguínea (eosinófilos, basófilos e neutrófilos)
a partir dessa ativação das unidades formadoras de colonias especificas, que vao novamente se diferenciar, dando origem aos mieloblastos que vao se diferenciar em pró-mielocitos (são morfologicamente indistintos, essa distinção ocorre a partir dos mielocitos)
nos mielocitos vao sofrer maturações em metamielocito, bastonete 
Precursores granulócitos 
Já possuem diferenciação morfológica 
A partir do metamielocito há só maturação para bastao no caso dos neutrófilos 
São iguais ate os mielocitos 
a) Pró-mielócito
b) Mielócito eosinofílico 
c) Metamielocito neutrofilico 
d) Forma em bastonete neutrofilico 
Granilopoiese- Neutrófilos 
São as células em maior quantidade nos caes a gatos e que vao atingir mais rapidamente o foco inflamatório 
O processo de proliferação e maturação ocorre de 3 a 4 dias 
Existem 3 compartimentos principais que 2 deles subdividem (ou sejam 6 compartimentos totais/totais):
Compartimentos medulares (ocorre na medula)
1- Proliferativo ou mitótico esse compartimento é constituído em células em divisão ativa, vai ter o blastos, pró-mielocitos e mielócitos 
2- Maturação ou pós-mitótico envolve os metamielocitos e os bastonetes 
3- Estoque ou reserva ou Armazenamento composto pelo segmentado (células maduras que vao ser liberadas na corrente sanguínea)
Em caes e gatos é normal ate 3% das formas imaturas em bastonetes podem ser encontrados na corrente sanguínea 
Não é normal encontrar em equinos e ruminantes de forma fisiológica 
Frente a uma grande demanda, podem ser encontrados formas imaturas 
Compartimentos vasculares
1- Marginal compostos por neutrófilos que estao aderidos transitoriamente pelo endotélio dos capilares (neutrófilos que estao sofrendo diapedese nos tecidos)
É mobilizado rapidamente através de adrenalina ou corticoide (vai-se ter uma leucocitose , especialmente neutrofilica quando o animal estiver estressado, quando fizer uma atividade física intensa...pode ser associado a processos patologicos) 
2- Circulante são os neutrófilos que vao ser analisados no laboratório 
Compartimento tecidual
Onde o neutrófilo vai executar o seu papel 
Algumas considerações
Ciclo regulatório da granulopoese
MONOCITOPOIESE 
Formação dos monócitos 
LINFOPOIESE
MEGACARIOCITOPOIESE
Formação das plaquetas
CINETICA LEUCOCITÁRIA 
A medula é dividida fisiologicamente em compartimentos que respeitam uma hierarquia 
· Compartimento de proliferação ou mitótico: constituído de mieloblasto, pró-mielócito e mielócito (tipos celulares mais imaturos)
· Compartimento de maturação: metamielócito e bastões (as células não sofrem mais divisão, só sofrem maturação e condensação de seus núcleos)
· Compartimento de reserva: alguns bastões e segmentados (as células estao naturalmente capazes)
Fisiologicamente a medula tem um tempo que sob estimulo patogênico, ele vai diminuir e vai liberar mais rapidamente essas células na circulação. Esse tempo da medula varia entre as espécies.
Quando ocorre um estímulo para a liberação de leucócitos pela medula, o primeiro compartimento a ser mobilizado é o compartimento de reserva. Se esse compartimento não conseguir suprir a demanda d eleucoccitos, vai haver a mobilização do compartimento de maturação, tendo liberação de metamielocitos e mais bastões no sangue.
Na leucometria especifica ocorre a identificação dessas células e são descritas na formula de schilling que vai ser bas/eos/mie/bas/seg/lin/mon
Compartimentos vasculares:
O fluxo sanguíneo é dividido em 2 compartimentos: marginal e circulante 
· Marginal: se refere ao sangue que corre próximo a parede do vaso
· Circulante: sangue que corre dentro do vaso 
As células que vao ser analisadas vao ser as circulantes pois elas ficam soltas na corrente sanguínea e são puncionadas durante a coleta 
O compartimento que vai possuir uma maior quantidade de leucócitos é o marginal, pois ele entra em contato primeiro com o quimiotatico, facilitando a leucodiapedese 
Quando coleta o sangue o bisel da agulha fica no centro do vaso, aspirando o sangue circulante 
ESTUDO DOS LEUCOCITOS
São células esféricas e incolores 
Neutrófilos 
Geralmente se apresenta em maior quantidade no sangue (representam 60% dos leucócitos em cães e gatos)
Primeiro tipo celular a responder a maioria das infecções (resposta imune inata) principalmente infecções bacterianas (G+) e fúngicas 
Respondem a quimiotaxia 
Contém grânulos no citoplasma/limpído
Núcleo segmentado (2 a 5 segmentos) quanto mais novas, menos segmentos 
Diferente entre as espécies 
Esse tipo celular esta em uma concentração maior no sistema respiratório, urogenital e digestório (pois sempre existe um estimulo nesses sistemas, mesmo sendo baixos)
A meia vida do neutrófilo na circulação é muito curta, com isso, ele é o primeiro a apresentar alteração na sua morfologia sob algum estimulo antigênico 
Função dos neutrófilos: fagocítica, bactericida e secretora (criam um ambiente oxidativo para destruir os microrganismos que estão na região)
Bactericida
Não oxidativa ocorre através da ação de polipeptideos antimicrobianos presente nos seus grânulos dos neutrófilos. Proteinases neutrofilicas tem ação bactericida como a lisozima, a lactoferrina tem ação bacteriostática e as proteínas catiônicas tem ambas as ações 
Oxidativa produzem susbtancias oxidantes como peróxidos pela ativação da NADPH oxidase, transferência de oxigênio para fagossomoou meio extracelular gerando superóxido e peróxido de hidrogênio (estresse oxidativo) 
Secretora 
Neutrófilos possuem 2 tipos de grânulos no seu citoplasma 
Primários contem enzimas bactericidas 
Secundários contem fosfatase alcalina, colagenases, proteína conjugadora de ferro (lactoferrina), proteína de ligação com b12 e proteases neutras (elastase)
EOSINÓFILOS 
Possuem granulos eosinofilicos (apresentam tonalidade rósea)
Núcleos bilobulados/segmentados
Células predominantemente teciduais (trato gastrointestinal, pulmões e pele)
Possuem em seus grânulos uma neurotoxina que paralisia os parasitas (principalmente do trato gastrointestinal)
Principais funções:
Fagocitose e atividade bactericida 
Os eosinófilos controlam os níveis de histamina edema, rubor, calor e dor..
Possuem grânulos com substancias alcalinas (agressivas e diversos tipos de antígenos)
Contem reserva de plasminogênio (responsável pela fibrinólise) e de fator XII (importante na coagulação) 
Leucotrienos, histamina, PAF (fator ativador de plaquetas) tem quimiotaxia 
Efeito antitumoral
Induzem apoptose de células tumorais in vitro 
neoplasia a infiltração local por eosinófilos melhora o prognostico 
Lesão tecidual
Grânulos apresentam efeitos citotóxicos 
Persistência de eosinofilia injurias em tecido cutâneo, respiratório, neurológico, gastrointestinal e cardíaco 
Diferenças entre as espécies
Nos gatos, os grânulos tem formato de microbastonetes 
BASÓFILOS 
Em baixíssima quantidade no sangue periférico
Diretamente relacionado ao mastócito tecidual
Possuem grânulos biofílicos
Possuem núcleo segmentado 
Principais funções:
Os basófilos possuem grânulos ácidos e são carreadores de lipase, heparina e histamina, contribuindo para as reações de hipersensibilidade imediata e processos alérgicos 
São atraídos ao tecido-alvo por quimiotaxia a partir da degranulação de mastócitos e eosinófilos 
Estimulam células T, fazendo com que estas produzam uma resposta Th2 (imunoglobulinas)
Apresentam defesas contra helmintos estimulação de células T a produzirem uma resposta Th2 (secreção de IgE)
Na ausência de basófilos a produção de citocinas Th2 por células T é a mínima ou ausente 
Morfologia granular, assim como seu numero, varia entre as espécies 
Caes tem pequena quantidade de grânulos de coloração violeta-escura
Gatos apresentam grandes grânulos ligeiramente acinzentados, que formam um arranjo semelhante a uma “calçada de pedras” podem apresentar basófilos sem evidenciação de grânulos
Os basófilos de grandes animais são preenchidos com grânulos violeta-escuros tao numeroso que geralmente se sobrepõem as estruturas do núcleo 
MONÓCITO 
São os maiores entre os leucócitos 
Citoplasma mais basofilico, cromatina mais frouxa.. 
Podem ser consideradas células intermediárias em um tecido continuo de maturação 
Monócito (sangue) macrófago (células de Kupffer, histiócito, célula microglial, macrófago alveolar, célula mesenquimal, célula gigante multinucleada, etc) 
Função 
Possuem grande potencial fagocitário e digestivo de antígenos/células indesejadas 
Efeito citotóxico de células tumorais e eritrócitos velhos/alterados
Auxilia na necrose tecidual, degradando células e organelas desnecessárias
Atuam como célula apresentadora de antígenos. antes de matar o antígeno por completo, ele vai selecionar um componente do antígeno e vai acoplar na membrana citoplasmática e apresenta esse fragmento ao linfócito no qual pode virar um linfócito T ou B (B pode criar anticorpos) promovendo uma resposta tecidual ou humoral 
Produzem substancias biologicamente ativas (reguladores da hematopoiese que podem ser considerados hormônios)
Célula efetora da resposta imune celular 
LINFOCITOS 
São os menores. Seu núcleo é o maior e oval. Citoplasma geralmente basófilo 
Atuam tanto na resposta imune celular quanto na humoral 
Podem se tornar células de memoria e também produzem citocinas 
Fazem o reconhecimento e combate de antígenos 
Os linfócitos B vão ser maturados principalmente na medula óssea e no baço e os linfócitos T vão ser maturados principalmente no Timo, linfonodos..
Cinética distinta dos demais leucócitos: capacidade de recirculação 
Alta durabilidade no organismo (meses a anos)
Função
Estimulam o crescimento e proliferação de linfócito T citotóxico a produzir citocinaspromove ação pró-inflamatoria e ativação de linfócitos B
Produzem anticorpos contra o antígeno (plasmócito) resposta imune especifica 
Ativam macrófagos, iniciam a resposta inflamatória (NK) e fazem auto-estimulação (IL-2)
Leucograma é composto por
1. Contagem dos leucócitos totais ou leucometria global
2. Contagem diferencial ou leucometria especifica (relativa ou absoluta)
Formação de camadas pós centrifugação Os leucócitos tem um peso molecular mediano quando comparado aos outros componentes sanguíneos (forma-se uma faixa contendo esse aglomerado de leucócito denominado capa leucocitária) 
a contagem dos leucócitos totais determina numero de leucócitos em volume de sangue (conta-se os 4 quadrantes laterais)
a contagem diferencial é feita no esfregaço sanguíneo, deve-se contar quantos leucócitos de cada tipo tem 
a contagem total também utiliza diluente (liquido de turk que tambem gera hemólise, facilitando a contagem)
Para a contagem da Leucometria global: 
Multiplicar o numero de leucocitos contabilizados por 50 
Para a contagem de leucometria específica 
Feito através da formula de Schiling
Basófilos eosinófilos formas imaturas dos neutrófilos (da forma menos imatura madura)
(o 70% representa a contagem na leucometria relativa)
Relativa aquela estabelecida logo após a contagem, estabelece o percentual de cada tipo celular encontrada 
Absoluta a que é utilizada para fazer interpretação dos achados laboratoriais 
· Feita a partir da leucometria relativa 
· A absoluta é feita com regra de 3 
· Sempre utilizada para fazer a interpretação do leucograma 
Interpretação do leucograma 
O leucograma é a aparte do hemograma que pesquisa alteraçãoes quantitativas e/ou morfológicas das series leucocitárias 
Ele é composto da contagem global de leucócitos e suas contagens diferenciais, consideradas em seu numero relativo e absoluto 
Através do leucograma é permitido identificar o processo patológico no organismo mas dificilmente define um diagnostico definitivo no organismo 
Termos utilizados:
· Leucocitose: aumento no número total de leucócitos 
· Leucopenia: diminuição do número total de leucócitos 
Alterações quantitativas 
Neutrofilia: aumento do número de neutrófilos
(
Neutropenia: diminuição do numero de neutrófilos
(granulopoiese, leucemias,
Eosinofilia: aumento do numero de eosinófilos
(casos de parasitismo...)
Eosinopenia: diminuição do numero de eosinófilos
 (estresses, inflamações agudas)
Aneosinofilia: ausência de eosinófilos
Basofilia: aumento do numero de basófilos 
· A presença dos basófilos na circulação é rara
· Por isso a ausência dos basófilos é normal
Monocitose: aumento do numero de monócitos
· Associados a quadros de inflamação aguda ou crônica, associadas a processos neoplásicos, hemólises (sem que houver um maior numero de fagocitose, os monócitos vao aumentar)
Monocitopenia: diminuição do numero de monócitos 
· Não tem relevância clinica 
Linfocitose: aumento do numero de linfócitos 
· Doenças que causam estimulo antigênico crônico (erlichia)
· Estresses agudos mediado pela adrenalina 
· Casos de leucemia 
Linfopenia: diminuição de linfócitos na circulação
· Estresses crônicos mediados pelo cortisol
· Doenças virais agudas (cinomose,parvovirose, fiv, FelV)
· Propiciam uma destruição dos linfócitos circulantes e atrofia dos órgãos linfoides
· Associados também a Enteropatias (perdas de fluidos linfoides)
Alterações qualitativas
DNNE: desvio nuclear de neutrófilos a esquerda 
· Ocorre quando o organismo não responde de forma adequada a infecção 
· É caracterizado quando existe forma jovens de neutrófilo além do permitido para a espécie na circulação 
Pode ser classificado de acordo com a intensidade e através do tipo presente:
1. Discreto: sóbastões 
2. Moderado: quando tem metamielocito
3. Acentuado: quando tem mielócito 
Reação leucimoide: 
O prognostico da leucocitose (indica processo agudo) é mais favorável que a leucopenia (indica processo crônico) 
DNND: desvio nuclear de neutrófilos a direita 
Ocorre quando há um retardo da leucodiapede. Os neutrófilos maduros ficam mais tempo na circulação
Animais mais idosos também podem apresentar 
Hiperadrenocorticismo
Interpretação de leucograma