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NUTRIÇÃO, METABOLISMO E CRESCIMENTO MICROBIANO CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS QUANTO AO ESTADO FÍSICO - Podem ser líquidos (sem ágar), semissólidos ou sólidos ◦ Líquidos: obtenção de biomassa e de metabólicos em reatores ◦ Sólidos: permite obter culturas puras CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS QUANTO À COMPOSIÇÃO - Sintéticos: composição química exata é conhecida - Complexos: composição química não é exata ◦ Úteis para cultura de microrganismos com requerimentos nutricionais complexos ou desconhecidos ◦ Hidrolisados de proteínas preparadas por digestão preoteolítica parcial de carne, caseína, soja ou gelatina, extrato de carne ou de levedura CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS QUANTO À FINALIDADE - MEIOS DIFERENCIAS ◦ Permitem distinção entre diferentes tipos de microrganismos pelo microscópio ◦ Produção de enzimas: DNAse – adição substrato e verificação ◦ Ágar sangue: meio complexo, enriquecido, não seletivo ▪ Meio diferencial porque permite verificar a existência ou não de hemólise colônias envolvidas por zonas claras devido a lise de células vermelhas - MEIOS DE ENRIQUECIMENTO ◦ Meios líquidos favorecem o reconhecimento de determinadas espécies aumentando a sua quantidade relativamente a outras, facilitando o isolamento de um microrganismo de interesse ◦ Ex: enriquecimento de salmonela - MEIOS DE CULTURA SELETIVOS ◦ Permitem o crescimento de certas espécies de bactérias ◦ Isolar bactéria que habita trato intestinal ◦ Fermentação da lactose bactérias que fermentam açúcares produzem ácidos que reagem com vermelho de metila formando colônias rosas colônias não fermentadoras permanecem incolores EFEITOS AMBIENTAIS NO CRESCIMENTO MICROBIANO - Importância: biomassa e controle - Organismos são diversos quanto a sua tolerância ao meio ambiente - Podemos manipular o meio favorecer ou inibir o crescimento microbiano a partir da manipulação das condições ambientais pH - Neutrófilos: crescem na faixa de pH entre 5-8 - Acidófilas: valores <5 TEMPERATURA - Psicrófilas:12-17 - Mesófilas: 28-37 temperatura próxima a temperatura do corpo do animal causam mais doenças - Extremas: >80 - Psicrotróficas: 20-30 - Termófilas: 50-90 - Afeta a taxa de crescimento por afetar a taxa de reações enzimáticas celulares - Temperatura desnatura proteínas e DNA - Temperatura pode afetar os padrões metabólicos, requerimentos nutricionais e a composição celular - Vida é conhecida na faixa de 0 a 130 - Membrana citoplasmática formada por fosfolipídeos - Quando aquece lipídeo ele vai ficando líquido - Fusão de membrana - Temperaturas mais altas membrana é mais resistente com fosfolipídeos que tem ponto de fusão mais alto ou sejam mais rígidos - É possível que a bactéria altere sua composição dependente do meio - Não só para se tornar resistente a temperatura, mas a outros extremos (álcool) ATMOSFERA GASOSA - O2 e CO2 são os gases principais que afetam o crescimento - Aeróbios ◦ Estritos: só crescem com O2 respiração aeróbica ◦ Microaerófilo: também usam O2, mas em níveis menores - Anaeróbios ◦ Aerotolerantes: não necessitam de O2 mas podem tolerar sua presença fermentação ◦ Facultativos: crescem tanto na presença quanto na ausência de O2 fermentação, respiração aeróbica ◦ Estritos: não toleram O2 (letal) fermentação, respiração anaeróbica - Por que o O2 é toxico para os anaeróbios O2 é altamente oxidante e excelente aceptor de e- na respiração - Enzimas que inativam o O2 tóxico catalase, peroxidase ◦ Anaeróbios não tem essas enzimas ◦ Aeróbios tem - Característica de microrganismos quanto ao metabolismo de O2 CULTIVO DE ANAERÓBIOS - Uso de agentes redutores nos meios de cultura - Remoção mecânica do oxigênio, sendo substituído por nitrogênio e CO2 - Uso de sistemas geradores de anaerobiose adiciona bicabornato de sódio e boroidreto de sódio que reagem com a água liberando H e CO2 com um catalisador de paládio DISPONIBILIDADE DE ÁGUA - Água deve estar disponível para o metabolismo e crescimento - Os solutos diminuem a entropia e água é menos livre para escapar AS CÉLULAS PODEM ESTAR EM UM MEIO: - Isotônico: não há movimento de água para dentro ou para fora da célula - Hipertônico: concentração de solutos fora da célula é maior que no interior água flui para fora da célula (plasmólise) ◦ Para não perder água, a célula produz solutos - Hipotônico: a concentração de soluto no interior da célula é maior que fora dela água flui para dentro da célula (pode inchar e romper) EFEITOS DA CONCENTRAÇÃO DO ÍON SÓDIO NO CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS - Em relação a necessidade de sal: ◦ Não halófitos: não necessitam de sal e não toleram a presença no meio ◦ Halotolerantes: não necessitam de sal mas toleram ◦ Halófilos: necessitam em uma concentração moderada ◦ Halófilos: necessitam em altas concentrações CRESCIMENTO MICROBIANO - Aumento no número de células e não no tamanho ◦ Colônias grupo de células visualização sem utilização de microscópio ◦ São formadas a partir de uma célula individual - As bactérias dividem-se em duas por fissão binária e aumentam seu número de forma geométrica (crescimento exponencial) - Tempo de geração: é o intervalo de tempo necessário para que a célula se duplique ◦ Varia de acordo com sua constituição genética e condições do meio - Curva de crescimento bacteriano: quando uma bactéria é semeada em um meio apropriado, nas condições apropriadas, o seu crescimento segue uma curva definida e característica - Métodos para a medida de crescimento microbiano ◦ Contagem do número de microrganismos ▪ Direta: ao microscópio ótico ▪ Indireta: contagem em placa membrana filtrante e incubação ◦ Determinação da massa celular METABOLISMO BACTERIANO - Catabolismo: produção de energia ◦ Substrato quebrado em produtos ◦ Energia do catabolismo é armazenada em ATP - Anabolismo: reações de síntese consumo de energia - Movimentar flagelo, transporte de substâncias precisa de energia força próton motora (não precisa da hidrólise de ATP) - Oxirredução ◦ Oxidação: remoção de e- de um átomo ou molécula (em geral acompanhada da perda de H+) ◦ Redução: molécula ganha um ou mais e- (ou H+) - Energia das ligações: energia é armazenada na forma de compostos com ligações fosfato de alta energia - Sintropia: grupos que dependem muito um do outro