PCR: Amplificação de DNA

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É um método in vitro rápido, 
sensível (de fácil contaminação) e 
versátil para amplificação seletiva 
de sequencias definidas de DNA a 
partir de amostras complexas de 
ácidos nucleicos. 
Gera uma quantidade de DNA 
suficiente para manipulação e 
analises subsequentes. 
 
 
Polimerização (formação de 
muitos) in vitro de DNA 
-Apenas moléculas de DNA; 
-Enzina DNA polimerase; 
-Amplificação de sequencias 
especificas/selecionada. 
Reação em cadeia: reação cíclica 
-Produtos de um ciclo são 
substrato para o ciclo seguinte 
Requer a ligação de pequenas 
sequencias de DNA 
(oligonucleotideos, primers) as 
sequencias complementares que 
flanqueiam a região alvo a ser 
amplificada, ou seja, são 
delimitadores químicos. 
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE 
 
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Requer a ação da enzima DNA 
polimerase para sintetizar novas 
copias idênticas a região alvo a ser 
amplificada. 
 
1- Desnaturação: Utiliza-se um 
equipamento que varia de 93 °C 
até 95°C e esse evento dura de 
30 secs a 1 min. Quebra as 
ligações e separa as fitas. 
2-Anelamento: Abaixa-se a 
temperatura e varia de 37°C a 
65°C e dura também de 30 secs 
a 1 min. Momentos em os primers 
serão conectados no segmento em 
que irá ocorrer a ampliação. 
3-Extensão/polimerização: Varia 
em torno de 72°C e dura cerca de 
1 min. Momento de atuação da 
DNA polimerase. 
 
 
-Clonagem; 
-Medicina forense; 
-Diagnostico molecular; 
-Detecção de mutações; 
-Identificação de espécies; 
-Analises de expressão genica; 
-Filogenia molecular. 
 
 
Primers 
 
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-O DNA tem a mesma composição 
química nos seres vivos o que 
muda é a sequência de pares de 
base. 
-As técnicas de fingerprinting 
visam elucidar essas diferenças 
mediante o uso da técnica de PCR 
associado a diversos aspectos 
metodológicos. 
-A visualização é feita em gel de 
agarose ou poliacrilamida: Cada 
técnica gera a geração de 
padrões de bandas que variam 
entre os diferentes grupos de 
organismos. 
 
-Teste de paternidade; 
-Identificação criminal; 
-Analises forenses; 
-Identificação de doenças; 
-Analises em projetos industriais. 
-Diferenciação de micro-
organismos. 
 
 
 
 
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