Miccrobiologia - Aula 1

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Aprendemos que o teste confirmatório (LST meio de cultura) que é a 2ª parte do teste de contagem de coliformes totais, é sempre feito depois da 1ª parte do teste presuntivo. Deve-se obedecer sempre a ordem das etapas de análise. Seguimos corretamente durante a aula as Boas Práticas de Laboratório (BPL) usando álcool para passar na e na arquibancada, usando luvas, cabelos presos etc.
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DETERMINAÇÃO DA CONTAGEM DE COLIFORMES COM A TÉCNICA N.M.P 
EXPLICANDO A TECNICA (NMP): 
Teste confirmatório, Caldo VB (meio de cultura) NMP: permiti calcular a diferencia entre os tubos se são positivos ou negativos, o teste confirmatório ou fase confirmativa, repetese (transferência de alíquotas com alça de platina) dos tubos presuntivos positivos para tubos preparados da mesma forma que no anterior, porém contendo caldo verde brilhante. Todos os tubos são incubados a 35°C durante 24 a 48 horas e posterior identificação dos que tiverem crescimento (positivo) de coliformes totais, identificado pela ocorrência de produção de gás nos tubos de Durhan.
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Aprendemos que o teste presuntivo (LST meio de cultura) é 1ª parte do teste dos coliformes, depois da inoculação de 35°C a 37°C/48h, assim apresentando bolha de ar, passamos para a 2ª parte que é o teste confirmatório feito com o caldo verde (VB meio de cultura).
Elucidar a técnica de contagem N.M.P. para contagem em alimentos.
 EXPLICANDO A TECNICA (NMP)
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Teste Presuntivo, Caldo LST (meio de cultura) 1ml de cada diluição em um tubo de ensaio com o caldo LST10ml e tubo de duhran invertido com o tempo de incubação a 35°C, por 24 a 48 horas. O teste presuntivo ou fase presuntiva consiste em fazer a homogeneização e transferência de alíquotas e/ou diluições da amostra para tubos de ensaios contendo, no fundo, um tubo invertido para coleta de gás (tubo de Durhan), e o meio de cultura apropriado (caldo lauril triptose). Todos os tubos são incubados a 35°C durante 24 a 48 horas e posterior identificação dos que tiverem crescimento (positivo) de coliformes totais, resultado identificado pela ocorrência de reação ácida (coloração amarelada) ou produção de gás (retida no tudo de Durhan).
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As bactérias gram-positivas serão azul-violeta violeta, enquanto as gram-negativas serão vermelhas. A estrutura que as bactérias irão apresentar é outro aspecto que pode ser levado em consideração para diferenciar as bactérias gram-positivas das gram-negativas.
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Por meio da coloração de Gram é possível verificar, além da forma da bactéria, a cor que adquirem, sendo esse resultado importante para sejam definidas outras estratégias de identificação da espécie bacteriana e para que o médico indique um tratamento preventivo de acordo com as características observadas microscopicamente.
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Lâmina
Pipeta de pasteur
Alça de platina
Água destilada
Lugol
Álcool acetona
Safranina
Bico de busem
Pinça de madeira
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Pega-se a lâmina molha com uma gota de água destilada e com a alça raspa a amostra que na placa de petri passa na lâmina molhada para que venha amolecer e soltar-se da alça ficando na lâmina, após feito isso, leva a secar na chama, mas não muito perto, estando seca seguimos para os reagentes. Adicionamos violeta de cristal, esperamos 1 minuto, em seguida lavamos com água destilada e adicionamos solução Lugol, esperamos 1 minuto, então lavamos com água destilada e adicionamos álcool acetona, esperamos 30 segundos, em seguida lavamos com água destilada e adicionamos o contra corante safranina, esperamos 30 segundos, deixamos secar a lâmina e por fim levamos ao microscópio para visualizar.
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BARER, Michael R et al. Medical Microbiology: A guide to microbial infections - pathogenesis, immunity, laboratory investigation and control. 19 ed. Elsevier, 2018. 13.