Teste de Coombs - StatPearls - NCBI Bookshelf

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Estante NCBI. Um serviço da Biblioteca Nacional de Medicina, Institutos Nacionais de Saúde.
StatPearls [Internet]. Ilha do Tesouro (FL): StatPearls Publishing; 2022 Jan-.
Teste de Coombs
Samuel R. Theis ; Muhammad F. Hashmi .
Última atualização: 12 de setembro de 2022 .
Introdução
O teste de antiglobulina, também conhecido como teste de Coombs, é um procedimento
laboratorial de imunologia usado para detectar a presença de anticorpos contra glóbulos
vermelhos (hemácias) circulantes no corpo, que então induzem a hemólise. A destruição desses
glóbulos vermelhos (hemácias) por anticorpos direcionados contra eles é descrita
diagnosticamente como anemia hemolítica autoimune (AIHA). Muitas etiologias se enquadram
nessa classificação. 
O teste de antiglobulina pode ser um teste direto de antiglobulina (DAT) ou um teste indireto de
antiglobulina (IAT). O princípio do DAT é detectar a presença de anticorpos ligados diretamente
às hemácias, o que ocorre lavando uma amostra de sangue coletada em solução salina para isolar
as hemácias do paciente; este procedimento remove os anticorpos não ligados que podem
confundir o resultado. O IAT, por outro lado, é usado para detectar anticorpos não ligados a
hemácias, que podem estar presentes no soro do paciente. Com o teste direto de antiglobulina,
um reagente monoespecífico ou poliespecífico é então adicionado às hemácias lavadas para
detectar IgG ligada e/ou complemento C3. Na prática, muitos laboratórios usarão primeiro o
reagente poliespecífico que pode detectar IgG e C3; um resultado positivo será seguido por testes
monoespecíficos para caracterizar melhor o anticorpo.[1] Para o teste indireto de antiglobulina, o
soro de uma amostra de sangue é isolado e as hemácias nativas removidas. A amostra de soro
isolada é então incubada com hemácias estranhas de antigenicidade conhecida. O reagente de
antiglobulina é então adicionado e a presença de aglutinação indica um resultado positivo.
Coleta de amostras
A coleta de uma amostra de sangue para teste de antiglobulina requer um tubo anticoagulado
com ácido etilenodiaminotetracético (EDTA); na prática padrão, este tubo de coleta
tradicionalmente tem uma tampa lilás, vermelha ou rosa. O EDTA é usado para quelar o cálcio
sérico para evitar a fixação in vitro do fator C3 do complemento que, de outra forma, levaria a
um resultado falsamente negativo. [1]
Procedimentos
Várias modificações foram relatadas para a melhoria do teste de Coombs, incluindo o uso de
polietileno glicol (PEG) e o teste de gel de antiglobulina (AGT). [2] [3] Algumas vantagens do
AGT em comparação com o teste de Coombs padrão incluem melhor reprodutibilidade e teste
fácil. O AGT é o teste mais sensível para a detecção de anticorpos anti-GV no soro. É essencial
nos testes pré-transfusionais e no diagnóstico da doença hemolítica do recém-nascido. [4] O AGT
foi lançado na Europa em 1988. Tornou-se disponível nos EUA em 1995. Lapierre e
colaboradores desenvolveram esta tecnologia.
O AGT é rotineiramente usado para triagem de soros humanos para anticorpos anti-hemácias
humanas. O procedimento é o seguinte: [5] 
Use um microtubo de gel (contém anti-IgG)
Adicione 25 microlitros de soro ao microtubo
Informações e afiliações do autor
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Adicione 50 microlitros de solução de baixa força iônica (LISS) - glóbulos vermelhos
suspensos a uma concentração de 0,8% à câmara de reação do microtubo
Incubar a 37 graus Celsius por 15 minutos
Girar por 10 minutos em uma centrífuga a aproximadamente 70 xg
Após a centrifugação, a reação positiva é graduada de 0 a 4+
As reações negativas apresentam grânulos de hemácias no fundo do microtubo sem
aglutinação
Uma reação + é indicada pela aglutinação de eritrócitos na metade inferior da coluna de
gel
A reação dois + tem eritrócitos dispersos por todo o microtubo
Três + reação contém eritrócitos exibidos na metade superior da coluna de gel
Uma reação quatro + é indicada por uma faixa sólida de eritrócitos no topo da câmara do
microtubo
Indicações
O teste de Coombs é necessário quando a autoimunidade aos glóbulos vermelhos é considerada
no diagnóstico diferencial, incluindo anemia hemolítica quente e fria. A seguir estão algumas
indicações em que o teste de antiglobulina se torna útil:
Anemia hemolítica autoimune
Anemia hemolítica imune induzida por drogas
Reações transfusionais hemolíticas mediadas por aloanticorpos
Doença hemolítica do recém-nascido
Lúpus eritematoso sistêmico (sem anemia hemolítica)
Diagnóstico potencial
O diagnóstico potencial do teste de Coombs inclui teste pré-transfusional, reação transfusional
hemolítica e anemias hemolíticas autoimunes ou induzidas por drogas. [6] [7] Existem várias
causas de um teste de Coombs positivo, como:
Reações transfusionais hemolíticas
Autoanticorpos para antígenos intrínsecos de hemácias
Doença hemolítica do recém-nascido
Anticorpos induzidos por drogas
Aloanticorpos adquiridos passivamente, como plasma de doadores ou imunoglobulina
Proteínas Adsorvidas Não Especificamente
Ativação do complemento devido a infecção bacteriana, aloanticorpos ou autoanticorpos
Anticorpos produzidos por linfócitos passageiros
Achados normais e críticos
A notificação dos resultados do teste de aglutinação de antiglobulina pode ser qualitativa ou
quantitativa. Para métodos qualitativos, o intérprete examina o tubo de ensaio e atribui uma
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pontuação com base em uma escala graduada:
M: Campo misto – qualquer grau de aglutinação em um mar de células não aglutinadas
W: agregados siny, fundo turvo avermelhado
1: Pequenos agregados, fundo turvo avermelhado
2: Agregados de tamanho pequeno a médio, fundo claro
3: Vários agregados grandes, fundo claro
4: Agregado ou aglomerado de células
Em pacientes com anemia hemolítica autoimune, o grau de aglutinação geralmente se
correlaciona com a gravidade da hemólise. Se não houver aglutinação macroscópica, a amostra
será examinada microscopicamente para garantir a ausência de agregados. Uma amostra exposta
a um reagente que demonstre agregados de pelo menos 3 a 5 células ao exame microscópico é
considerada um resultado positivo. A aglutinação normalmente leva cerca de 5 a 10 minutos para
ocorrer após a adição do reagente. O teste direto de antiglobulina também pode ser medido
quantitativamente usando ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), citometria de fluxo ou
outras técnicas de imunoensaio. [8] [9] [10] [11]A medição quantitativa de uma amostra pode ser
necessária quando se deseja o isolamento de um anticorpo específico, como em casos de
hemólise autoimune devido a anticorpos diferentes de IgG ou C3.
Fatores interferentes
Quando realizado corretamente e utilizado no contexto clínico apropriado, o teste direto de
antiglobulina demonstrou demonstrar um valor preditivo positivo de 97% a 99%, embora um
estudo mais recente envolvendo pacientes hospitalizados tenha relatado uma taxa de falsos
positivos de até 7% a 8 % em pacientes sem evidência clínica ou histológica de hemólise. A
maioria desses falsos positivos mostra um baixo grau de aglutinação, embora até 1% desses
resultados possam demonstrar graus mais altos de aglutinação. [12] Em outro estudo consistindo
em uma coorte de indivíduos saudáveis não hospitalizados, a incidência de um resultado DAT
positivo sem evidência de hemólise foi de 0,1%; aproximadamente dois terços desta coorte
expressaram positividade para IgG. [13]
Várias outras variáveis de confusão podem afetar a precisão dos resultados dos testes DAT e IAT:
Tipo de anticorpo - a maioria dos testes de antiglobulina comerciais para anticorpos IgG,
complemento C3 ou ambos. Assim, resultados falso-negativos podem ocorrer em casos de
AIHA causada por autoanticorpos diferentesde IgG ou C3, como IgM ou IgA. [14] Nesses
casos incomuns, o DAT quantitativo pode ajudar na detecção.
Quantidade de anticorpo presente - em alguns casos raros, a anemia autoimune pode ser
induzida por níveis de anticorpo abaixo do limite de detecção de DAT, que é de
aproximadamente 150 a 500 moléculas de IgG por glóbulo vermelho. [15] [16] Por
exemplo, o estudo conduzido por Zupanska et al. foi capaz de demonstrar a fagocitose in
vitro de hemácias por monócitos em níveis de 150 a 640 moléculas de IgG3 e 1230 a 4240
moléculas de IgG1 por hemácia. [17] [18] Portanto, as hemácias podem sofrer fagocitose
quando opsonizadas por um nível de anticorpo abaixo do limiar de detecção, resultando
em um resultado falsamente negativo. [12]
Proteína sérica alta - certas doenças, como doenças mieloproliferativas, podem causar um
estudo de aglutinação falsamente positivo devido a níveis anormalmente altos de proteína
não relacionados à aglutinação anticorpo-GV. Fontes exógenas de excesso de proteína ou
imunoglobulina, como casos em que um paciente está recebendo imunoglobulina
intravenosa (IVIG), também podem resultar em um estudo falsamente positivo.
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Infecção - o soro de indivíduos infectados com determinados microrganismos pode gerar
um resultado de aglutinação falso positivo. Exemplos incluem o vírus da imunodeficiência
humana (HIV), malária, vírus da hepatite C (HCV) e, em casos raros, o vírus da hepatite E
(HEV). [19]
Síndrome antifosfolípide - a reatividade cruzada entre os anticorpos antifosfolípides e as
membranas das hemácias pode resultar em teste DAT falsamente positivo, conforme
relatado por Win et al. [20]
Geléia de Wharton - em amostras de sangue de cordão umbilical neonatal, a presença de
geléia de Wharton rica em mucopolissacarídeos demonstrou produzir resultados falso-
positivos de antiglobulina.
Segurança e educação do paciente
O paciente deve ser informado de que o teste de Coombs é um procedimento relativamente
seguro. Os riscos associados ao teste são os mesmos da coleta de amostra de sangue padrão. Os
pacientes não precisam jejuar antes do teste.
Significado clínico
O teste de antiglobulina, particularmente o teste qualitativo direto de antiglobulina, é
clinicamente útil nos casos em que há suspeita clínica de hemólise de hemácias induzida por
autoanticorpos. O teste DAT normalmente envolve o uso de um reagente poliespecífico que
consiste em IgG e complemento C3. O teste indireto de antiglobulina é clinicamente útil para a
detecção de anticorpos circulantes que têm o potencial de induzir hemólise de hemácias; este
teste é mais comumente utilizado para fenotipagem de hemácias e na triagem de prova cruzada
para transfusão de sangue. Um resultado positivo de antiglobulina requer análise no contexto
clínico para fazer um diagnóstico preciso. Os custos de saúde e a carga de tempo de laboratório
podem ser minimizados pela primeira triagem com um reagente poliespecífico antes de
confirmar o anticorpo com análise monoespecífica ou quantitativa. Raramente, hemólise
autoimune pode ser suspeitada mesmo na ausência de teste DAT positivo; neste caso, o teste
DAT quantitativo pode ajudar a identificar subtipos de anticorpos menos comuns além de IgG ou
C3. Na ausência de outras variáveis de confusão (ver “Fatores interferentes ” acima), teste de
antiglobulina positivo indica a presença de hemólise por anticorpos direcionados contra hemácias
nativas. Existem várias áreas principais de importância clínica:
Anemia hemolítica autoimune (AIHA): A AIHA é tradicionalmente a causa mais
reconhecida de teste de antiglobulina positivo e tem sido objeto de extensos estudos. A
classificação “AIHA” serve como um descritor abrangente que unifica um grande grupo de
diagnósticos com diferentes etiologias que causam hemólise por meio de anticorpos contra
hemácias. [21] A classificação pode ser dicotomizada ainda mais considerando fatores
como aglutinação quente versus fria e causa primária versus secundária. AIHA também
pode ser induzida por drogas ou sindrômica (consulte “Síndrome de Evans”). A
caracterização adicional de doenças que se enquadram nessa classificação está além do
escopo desta entrada.
Reação transfusional hemolítica mediada aloimune (AHTR): AHTR ocorre quando uma
amostra pós-transfusão desenvolve um aloanticorpo recém-encontrado. A formação de um
aloanticorpo pode ocorrer tão rapidamente quanto em 2 a 3 dias. [22] O desenvolvimento
de aloanticorpos resulta em um teste DAT positivo, mas pode ou não estar associado à
hemólise. [1]
Tipagem do grupo sanguíneo ABO: Em transfusões de sangue e transplantes de células-
tronco hematopoiéticas, o teste indireto de antiglobulina pode ser usado para identificar o
fenótipo de hemácias para minimizar as chances de incompatibilidade do doador.
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Doença hemolítica do feto e do recém-nascido (HDFN): HDFN ocorre quando a IgG
materna se forma contra antígenos fetais, principalmente o antígeno Rh ou Kell. O tipo
mais comum de HDFN é devido à incompatibilidade ABO, que ocorre em
aproximadamente 15% a 25% das gestações e tende a ser menos grave. [23] A incidência
de teste DAT positivo em ABO HDFN é muito baixa em torno de 1% e, desse grupo,
apenas aproximadamente 23% dos recém-nascidos desenvolverão icterícia clinicamente
significativa; portanto, DAT é um mau preditor positivo de recém-nascidos que precisarão
de tratamento. [1] [23] [24]
Perguntas de revisão
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Referências
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