Imunologia Clínica - 2Webaula - Profa Dra Juliana Gonçales

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WEBAULA 02
Profa. Dra. Juliana Prado Gonçales
Imunologia Clínica - Profª. Dra. Juliana Gonçales
Ensaios de Aglutinação e 
Imunoensaio Enzimático
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Ensaios de 
Aglutinação
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AGLUTINAÇÃO
“Formação de agregador visíveis decorrente 
do resultado da interação de anticorpos 
específicos e particular insolúveis com 
presença de determinantes antigênicos.” 
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✓Elevada sensibilidade;
✓Baixo custo;
✓Leitura visual;
✓Facilidade de execução
✓Reprodutibilidade dos lotes 
de reagentes;
✓ Baixa especificidade;
✓ Pouca estabilidade Ag-Ac
AGLUTINAÇÃO
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❑ No teste direto o antígeno faz parte da célula, ocorrendo a
aglutinação dessas células através da interação com um
anticorpo
✓ Anti-Toxoplasma e Anti-Trypanosoma – protozoário formolizado;
✓ Pesquisa de crioaglutininas – Mielomas e doenças auto-imunes;
✓ Tipagem sanguínea 
AGLUTINAÇÃO DIRETA
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AGLUTINAÇÃO DIRETA
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❑ Na inibição da aglutinação direta é utilizado a propriedade de
alguns antígenos virais aglutinarem determinados tipos de
hemácias.
✓ Baixo custo 
✓ Incubação do soro + solução antigênica;
✓ Suspensão de hemácias para a aglutinação viral
✓ Presença de aglutinação o teste é negativo
✓ Vírus hemaglutinantes - Sarampo, Rubeola, Influenza....
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO DIRETA
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❑ No teste indireto emprega-se a absorção de anticorpos ou
antígenos solúveis proteicos ou polissacarídeos em uma
superfície de micropartículas inertes (suporte)
AGLUTINAÇÃO INDIRETA
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❑ Competição entre o Ag solúvel do teste e o Ag da amostra para
ligação no sitio do anticorpo
✓ Teste de gravidez
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO INDIRETA
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Anemia auto imune
TESTE DE COOMBS
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Fator Rh e Eritroblastose fetal
TESTE DE COOMBS
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✓ A PCR mede processos inflamatórios ou infecção aguda;
✓ Diversas condições alteram os níveis dessa proteína;
✓ Antiinflamatórios, aspirina, corticoides, anticoncepcionais
✓ Risco de AVC, infarto, doenças infecciosas
✓ Valor de referência: <1.0 mg/L
PROTEÍNA C REATIVA
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PROTEÍNA C REATIVA
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✓ Detecta anticorpos contra a estreptolisina O produzida por
Streptococcus do grupo O;
✓ Febre reumática, glomerulonefrite
✓ Valor de referência: < 2 anos: <50 U/mL
• 2 – 4 anos: <160 U/mL
• >5 anos: <200 U/mL
ANTI-ESTREPTOLISINA O
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ANTI-ESTREPTOLISINA O
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✓ Auto anticorpo produzido por algumas doenças imunes
✓ Reação de Waaler-Rose;
✓ Tuberculose, sífilis, malária, leucemia, problemas hepáticos,
miocardite
✓ Artrite reumatoíde, Lúpus
✓ Valor de referência: ≤ 14 U/mL
FATOR REUMATOÍDE
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FATOR REUMATOÍDE
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❑ Reação de Ac+Ag produz floculação visíveis, principalmente
em microscópio
✓ Variante da Aglutinação indireta;
✓ VDRL – teste não treponêmico:
– Combinação de lectina, colesterol e cardiolipina;
– Teste não específico; 
– Reação Cruzada.
FLOCULAÇÃO
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FLOCULAÇÃO
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Imunoensaio 
Enzimático
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“Detecção do imunocomplexos fixo em um 
suporte sólido (placa, fita ou cassete), 
através do uso de um anticorpo conjugado 
a uma enzima” 
ELISA
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❑ ELISA - Enzyme-Linked Immunosorbent Assay:
✓ Reação Ag-AC monitorada através da atividade 
enzimática;
✓ Alta sensibilidade e especificidade;
✓ Reagentes estáveis;
✓ Leitura visual e fotométrica;
✓ Não utiliza radioisótopos; 
✓ Bom custo-benefício 
✓ Qualitativo e Quantitativo;
ELISA
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❑ AMOSTRA:
✓ Soro;
✓ Plasma;
✓ Saliva;
✓ Urina;
✓ Sobrenadante de cultura;
ELISA
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• ETAPAS TÉCNICAS:
✓ Sensibilização;
✓ Bloqueio;
✓ Lavagens;
✓ Amostra;
ELISA
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❑ ETAPAS TÉCNICAS:
✓ Conjugado;
✓ Substrato;
✓ Parada;
✓ Leitura
ELISA
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❑ ETAPAS:
ELISA
1.Sensibilização
2.Bloqueio
3.Amostra
4.Conjugado
5.Substrato 
6.Parada ou leitura 
IN HOUSE
Kit Comercial
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•ELISA DIRETO OU SANDUICHE 
ELISA
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• ELISA INDIRETO:
ELISA
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• ELISA DE COMPETIÇÃO:
ELISA
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ELISA
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ELISA
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•INTERPRETAÇÃO
ELISA
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OBRIGADA
“Nunca pare. Sempre continue, não importa o que aconteça e seja tirado de
você. Mesmo quando a vida é tão injusta, não desista.” - Assassin’s Creed II
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PRÓXIMOS
PASSOS
Imunofluorêscencia
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Ensaios automatizados
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	Slide 3: Ensaios de Aglutinação
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