Aula Prática Imunohematologia

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Aula Prática 8-Imuno 
hematologia 
 – UNISOSIESC 
Elaboração: Profa. Ms. Magda Helena S H Ferrazza 
Prof. Abadio Costa Junior 
 
 
Objetivos: Conhecer os princípios da Imuno-Hematologia e seu uso no auxílio 
da fenotipagem ABO e diagnóstico de anemias hemolíticas autoimunes. 
 
Conhecimentos: Conhecer as características da execução dos exames que 
utilizam os princípios de imuno-hemato. 
Compreender a importância da interpretação dos resultados. 
 
Habilidades: Ser capaz de executar os testes que utilizam técnicas imuno-
hematlógicas. Saber realizar as leituras e interpretações dos testes. 
 
Atitudes: Interesse e participação interativa nas aulas propostas. 
Saber trabalhar em equipe. Atenção com a execução da análise das fenotipagens 
e testes pesquisas de anticorpos e suas e interpretações. 
 
 
Quantidade por Equipe Descrição: Equipamentos, Materiais e Reagentes 
05 Tubos de EDTA 
05 Tubos Seco 
05 Tubos de ensaio 
01 Kit de reativos para Fenotipagem ABO 
01 Soro de Coombs 
01 Lâminas de vidro 
05 Pipeta automática 50 µ 
05 Pipeta automática 100 µ 
20 Ponteiras 
01 Banho Maria 370C 
 
Introdução 
 
 Os conhecimentos na área de Imuno-Hematologia eritrocitária propiciam 
uma transfusão sanguínea mais segura e melhora o diagnóstico laboratorial de 
quadros potencialmente graves e fatais como a doença hemolítica do feto e do 
recém-nascido (DHFN) e a anemia hemolítica autoimune (AHAI). 
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 Imuno-Hematologia é o termo utilizado para designar o estudo e 
classificação dos grupos sanguíneos através de reações imunológicas entre 
aglutinógenos e anticorpos. 
AGLUTINÓGENOS: O termo refere-se a estruturas presentes na membrana das 
hemácias, as quais são herdadas geneticamente dos pais e determinam os 
diversos grupos sanguíneos. 
ANTICORPOS: São proteínas responsáveis pela defesa imunológica do 
organismo (defendem o organismo contra corpos estranhos). 
 
 DETERMINAÇÃO SANGÜÍNEA ABO: A importante descoberta de que as 
hemácias humanas pertenciam a diferentes grupos sanguíneos foi realizada por 
Landsteiner em 1900, que identificou o sistema ABO. Este sistema foi então 
dividido em quatro grupos sanguíneos: A, B, AB e O; onde os indivíduos 
classificados como: 
"A" possuem aglutinógenos A nas hemácias e anticorpos contra B no plasma. 
"B" possuem aglutinógenos B nas hemácias e anticorpos contra A no plasma. 
"AB” possuem aglutinógenos A e B nas hemácias e não possuem anticorpos 
no plasma. 
"O" não possuem aglutinógenos nas hemácias e possuem anticorpos contra A 
e B no plasma. Para a determinação do tipo sanguíneo utilizamos a pesquisa 
de aglutinógenos nas hemácias(tipagem Direta), e para a confirmação destes 
mesmos grupos sanguíneos realizamos a tipagem Reversa, onde detectaremos 
os seus respectivos anticorpos. 
Na tabela a seguir poderemos observar a relação existente entre aglutinógenos 
e anticorpos correspondentes nos respectivos grupos sanguíneos. 
 
 
 
 
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 DETERMINAÇÃO DO FATOR RH: O fator Rh foi descoberto em 1940 por 
Landsteiner e Wiener. A partir daí foram descobertos aproximadamente 40 ou 
mais aglutinógenos diferentes no sistema Rh, porém na prática procura-se 
determinar a presença ou ausência de um deles, especificamente o aglutinógeno 
D. A presença do aglutinógeno "D" irá caracterizar o indivíduo como Rh Positivo 
e sua ausência como Rh Negativo. 
TESTE DA ANTIGLOBULINA DIRETO (COOMBS DIRETO): A principal 
finalidade deste teste é a detecção de hemácias revestidas de anticorpos, ou 
seja, hemácias sensibilizadas "in vivo". Ë muito utilizado na investigação de 
reações transfusionais, no diagnóstico de doença hemolítica perinatal e de 
anemias hemolíticas autoimunes. 
 
TESTE DA ANTIGLOBULINA INDIRETO(COOMBS INDIRETO) : Consiste na 
Pesquisa de Anticorpos Irregulares(P.A.I.), onde iremos determinar a ausência 
ou a presença de anticorpos livres no soro ou plasma de doadores e pacientes. 
Quando obtivermos um P.A.I. Positivo, será indicativo da presença de um 
anticorpo irregular no plasma deste paciente ou doador de sangue, o que nos 
levará a realização de um outro teste denominado de Identificação de Anticorpos 
Irregulares(I.A.I.), onde iremos determinar a especificidade deste anticorpo, ou 
seja, contra que aglutinógeno específico este anticorpo é voltado. 
 
PROVAS DE COMPATIBILIDADE: As provas de compatibilidade pré-
transfusionais, também denominadas de " provas cruzadas", são realizadas com 
o intuito de confirmar se o sangue a ser transfundido é realmente compatível com 
o do receptor. Deve-se observar rigorosamente a tipagem ABO, visto que a 
maioria dos acidentes transfusionais graves ocorrem por este tipo de 
incompatibilidade. 
Abaixo iremos demonstrar um esquema que pode ser utilizado nas transfusões 
de concentrado de hemácias. 
 
 
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REFERÊNCIAS 
 
 
1-BRAUNWALD, E.; FAUCI, A.S.; KASPER, D.L.; HAUSER, S.L.; LONGO, 
D.L.; JAMESON, J.L (ed):Harrison`s Principles of Internal Medicine, 15th 
Edição. New York, Ed. McGraw-Hill; 2001. 
 
2.MILLER, O.; GONÇALVES, R.R.:Laboratório para o clínico, 8ª edição. São 
Paulo, Editora Ateneu;1995. 
 
 
PARTE EXPERIMENTAL 
 
 
1- Tipagem sanguínea e fator Rh em Lâmina 
 
Procedimento: (passo a passo) 
 
1.º) coloca-se numa lâmina de microscopia, lado a lado, uma gota de soro anti-
A e outra de soro anti-B. 
2.º) Sobre cada gota de soro coloca-se uma gota do sangue a ser identificado. 
Observando-se o resultado, temos: 
a) se não houver aglutinação em nenhum dos lados, o sangue em exame é do 
grupo O. 
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b) se houver aglutinação nos dois lados, o sangue é do grupo AB. 
c) se houver aglutinação somente com o soro anti-A, o sangue é do grupo A. 
d) se aglutinar somente com o soro anti-B, o sangue é do grupo B. 
3.º) em uma outra Lâmina colocar uma gota de soro anti Rh e sobre o soro 
colocar uma gota do sangue a ser identificado. 
a) se houver aglutinação o sangue é Rh positivo e se não houver aglutinação o 
sangue provavelmente será Rh negativo, mas neste caso é necessário realizar 
a prova de Fator Dfraco (Fator Du). 
 
 
 
Exercício 
 
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2- Teste do D fraco 
 
 
1- Preparar uma suspensão de 3 a 5 % das hemácias a serem 
classificadas (1ml de salina e 50 microlitros de amostra de sangue 
previamente testada). 
2- Colocar em cada um dos dois tubos devidamente identificados, RH 
e CONTROLE respectivamente 1 gota (50 microlitros) de reativo 
anti- D e 1 gota de do controle Rh. 
3- Acrescentar 1 gota da suspenção de hemácias em cada tubo. 
4- Deixar em banho maria por 15 minutos. 
5- Acrescentar o equivalente a 3 ml de salina e centrifugar por 1 
minuto a 1000 rpm. 
6- Virar os tubos descartando a salina, tomando o cuidado para não 
desprezar o botão que se formou no fundo do tubo. 
7- Acrescentar o equivalente a 3 ml de salina e centrifugar por mais 1 
minuto a 1000 rpm. 
8- Virar os tubos descartando a salina, tomando cuidado para não 
desprezar o botão que se formou no fundo do tubo. 
9- Acrescentar o equivalente a 3 ml de salina e centrifugar por mais 1 
minuto a 1000 rpm. 
10- Virar os tubos descartando a salina, tomando cuidado para não 
desprezar o botão que se formou no fundo do tubo. 
11- Secar a parede do tubo com papel toalha, acrescentar 2 gotas de 
Soro de Coombs em cada tubo, centrifugar por mais 1 minuto a 
1000 rpm. 
12- Ressuspender o botão de hemácias em cada tubo e observar a 
presença ou não de aglutinação. 
13- O tubo com controle de Rh deverá ser sempre negativo e o teste 
caso não aconteça a presença aglutinação será reportado como 
Rh D NEGATIVO fator D fraco NEGATIVO. Caso aconteça a 
presença de aglutinação o resultado reportado será Rh D 
NEGATIVO fator D fraco POSITIVO. 
 
 
3- Teste Coombs Direto 
 
O teste de Coombs direto é usado no diagnóstico de doenças autoimunes e 
doença hemolítica do recém-nascido. Ele detecta anticorpos ligados à superfície 
das hemácias. 
TÉCNICA 
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a) Preparar uma suspensão salina (5%) das hemácias a seremtestadas (1ml 
de salina e 50 microlitros de amostra de sangue), 
b) Colocar 2 gotas desta suspensão em 1 tubo, adicionar solução fisiológica e 
centrifugar a 3.000 R.P.M. por um minuto; 
c) desprezar (com cuidado) o sobrenadante deixando o “ botão” de hemácias no 
fundo do tubo; 
d) repetir a operação mais duas vezes. Na última operação, com auxílio de papel 
de filtro, procurar desprezar toda a solução salina. Quando se tratar de sangue 
umbilical, lavar as hemácias no mínimo oito vezes; 
e) adicionar duas gotas de soro de Coombs; 
f) centrifugar à baixa rotação (1.000 rpm) por 15 segundos; 
g) leitura: agitar levemente o tubo e observar se há aglutinação dos eritrócitos. 
 
 
 
 
 
Entendimento da Aula 
 
1-Quais as principais utilidades do estudo da Imuno-Hematologia? 
2-O que significa fenótipo Dfraco? 
3- Quais as finalidades dos testes de Coombs direto e indireto?