Aula 8 -Testes diagnósticos para Banco de Sangue

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Testes diagnósticos para 
Banco de Sangue
Profa. Alessandra Barone
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Objetivo da aula: 
• Identificar os principais testes de triagem e confirmatórios utilizados para o 
diagnóstico de doenças hemotransmissíveis em Banco de Sangue
• Reconhecer os principais antígenos pesquisados para Hepatite B e HIV
• Identificar os procedimentos utilizados em Banco de sangue para doadores 
reagentes.
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Material de suporte:
• Sangue coletado no Brasil vai passar pelo teste NAT – TV Brasil
• https://www.youtube.com/watch?v=nopDcsWrJZ4
• PCR e eletroforese:
• https://www.youtube.com/watch?v=q1QFpB33Bwg
• ELISA:
• https://www.youtube.com/watch?v=RRbuz3VQ100&feature=youtu.be
https://www.youtube.com/watch?v=nopDcsWrJZ4
https://www.youtube.com/watch?v=RRbuz3VQ100&feature=youtu.be
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Obrigatória a realização de exames laboratoriais de alta sensibilidade em todas 
as doações.
• O que são testes de alta sensibilidade??????
• O sangue total e seus componentes não podem ser transfundidos antes da 
obtenção de resultados finais não reagentes tanto para sorologia quanto para 
NAT
13/02/2014
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Hepatite B
• Hepatite C
• HIV-1 e HIV-2
• Doença de Chagas
• Sífilis
• HTLV-I e HTLV-II
• Malária
• Citomegalovírus
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Hepatite B:
• RDC 158: art.130 
• § 6º São os testes para detecção de hepatite B:
• I - detecção do antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBV) - HBsAg;
• II - detecção de anticorpos contra o capsídeo do HBV - anti-HBc (IgG ou IgG + IgM); e
• III - detecção de ácido nucleico (NAT) do HBV.
• Pesquisa de HBsAg (ag superfície) e anti-HBc (ac para ag central) 
• Janela imunológica de 54-56 dias com métodos de imunoenzimático e 
quimioluminescência.
• Janela imunológica de aproximadamente 10 dias para NAT
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• HBsAg – Detecta antígenos de superfície do vírus da hepatite B 
• Anti-HBs – Detecta anticorpo contra o antígeno de superfície do vírus 
da hepatite B 
• Anti-HBc IgM – Detecta anticorpo IgM contra o antígeno CORE do vírus 
da hepatite B 
• Anti-HBc – Detecta anticorpo total (IgG + IgM) contra o antígeno CORE
do vírus da hepatite B 
• HBe Ag – Detecta antígeno “e” do vírus da hepatite B (replicação viral)
• Anti-HBe – Detecta anticorpo contra o antígeno “e” do vírus da hepatite 
Quadro agudo Análise da evolução clínica da infecção 
Cinética da evolução dos marcadores 
sorológicos durante a hepatite B aguda
Cinética da evolução dos marcadores 
sorológicos durante a hepatite B crônica
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Hepatite C – anti HCV:
• RDC 158 – art.130 
§ 7º São os testes para detecção de hepatite C:
I - detecção do anticorpo contra o vírus da hepatite C (HCV) ou detecção combinada de 
anticorpo + antígeno do HCV; e
II - detecção de ácido nucleico (NAT) do HCV.
• Janela imunológica de até 70 dias para teste imunoenzimático ou por 
quimioluminescência
• Janela imunológica de 10 dias para NAT
Cinética de evolução dos marcadores sorológicos 
na hepatite C
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• HIV
• RDC 158 art. 130
• § 8º São os testes para detecção de AIDS:
• I - detecção de anticorpo contra o HIV ou detecção combinada do anticorpo contra o HIV 
+ antígeno p24 do HIV; e
• II - detecção de ácido nucleico (NAT) do HIV.
• § 9º O teste de que trata o inciso I do § 8º incluirá, obrigatoriamente, a 
pesquisa de anticorpos contra os subtipos 1, 2 e O.
Ministério da Saúde: 
http://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/diagnostico_hiv_2014.pdf
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• HIV 
• Triagem sorológica com utilização de dois testes distintos.
• Elisa e quimioluminescência
• Casos positivos: Teste confirmatório IF
• As amostras com resultados indeterminados ou negativos ao teste de IF 
podem ser submetidas ao teste de Western Blot
• Amostra reagente = presença de, no mínimo, 2 (duas) bandas dentre as gp
160/120, gp 41 e p24
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Doença de Chagas
• RDC 158 art. 130
• § 10 - O teste para doença de Chagas será por meio da detecção de anticorpo anti-T.cruzi
por método de ensaio imunoenzimático (EIE) ou quimioiluminescência (QLM).
• Janela sorológica: 57-100 dias
• Reação cruzada com Leishmaniose
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• HTLV I e II – Vírus linfotrópico humano
• Retrovírus que infecta linfócito T
• Pode ocasionar Paraparesia Espástica Tropical e Leucemia
• RDC 158 art. 130
• § 12 - O teste para infecção por HTLV I/II será mediante a detecção de anticorpo contra o 
HTLV I/II.
• Teste imunoenzimático ou por quimioluminescência
• Teste confirmatório não obrigatório.
• Janela imunológica: 36 a 72 dias (ELISA)
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Sífilis - Treponema pallidum (gram-negativa)
• RDC 158 art.130
• § 11 - O teste para sífilis será por intermédio da detecção de anticorpo antitreponêmico
ou não-treponêmico.
• Um teste não treponêmico
• VDRL - Veneral Disease Research Laboratory
• RPR - Rapid Plasma Reagin
• Um teste treponêmico (antitreponêmico)
• TPHA – Treponema pallidum Hemagglutionation
• ELISA
• FTA-ABS -Fluorescent Treponemal Antibody Absorption
NAT
• RDC 158 Art.130
• § 4º É permitido o emprego de pool de amostras para testes de pesquisa de 
ácido nucléicos (NAT) para detecção de infecções transmissíveis pelo sangue.
• § 15- No caso da realização dos testes NAT em pool, o grupo de amostras que 
apresentar resultado positivo deve ser desmembrado e suas amostras testadas 
individualmente para identificação do(s) agente(s) infeccioso(s) em questão, 
considerando a possibilidade de desmembramento cruzado.
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Malária:
• RDC 158. Art. 132. Nas regiões endêmicas de malária, com transmissão ativa, 
independente da incidência parasitária da doença, será realizado teste para 
detecção do plasmódio ou de antígenos plasmodiais.
• Nas regiões endêmicas com transmissão ativa : parasitológico/hematológico –
gota espessa
• Nas regiões endêmicas sem transmissão ativa : sorológico - IFI
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Citomegalovírus
• Art. 131. O serviço de hemoterapia realizará exames laboratoriais de alta 
sensibilidade a cada doação, para detecção de citomegalovírus (CMV) em 
todas as unidades de sangue ou componentes destinados aos pacientes nas 
seguintes situações:
• I - submetidos a transplantes de célula progenitora e de órgãos, com sorologia 
não reagente para CMV;
• II - recém-nascidos de mães CMV negativo ou com resultados sorológicos 
desconhecidos que tenham peso ao nascimento inferior a 1.200g; e
• III - transfusão intrauterina.
Lobato-Silva, Dorotéa de Fátima. Citomegalovírus: epidemiologia baseada em dados de soroprevalência. 2016
Se um teste sorológico deu reagente, devemos 
realizar outro teste?
SIM!
• RDC 158 - Art. 135
• § 2º Quando a soroconversão/viragem for detectada somente pelo teste 
sorológico, é necessária a realização de testes com a mesma amostra, para 
confirmação do resultado inicial, conforme o caso:
• I - HBsAg: realizar teste de neutralização, ou 1 (um) segundo teste com reagente 
de outra origem ou de outro fabricante ou com outra metodologia;
• II - Anti-HBc: realizar 1 (um) segundo teste com reagente de outra origem ou de 
outro fabricante ou com outra metodologia;
• III - Anti-HCV: realizar 1 (um) segundo teste de detecção de anticorpo com 
reagente de outra origem ou de outro fabricante ou com outra metodologia, ou 
teste com reagente que detecte de maneira combinada antígeno e anticorpo do 
HCV; 
• IV - Anti-HIV: realizar 1 (um) segundo teste de detecção de anticorpo ou detecção 
combinada do anticorpo contra o HIV + antígeno p24 do HIV, com reagente de 
outra origem ou de outro fabricante ou com outra metodologia; e 
• V - Anti-HTLV I/II: realizar1 (um) segundo teste de detecção de anticorpo com 
reagente de outra origem ou de outro fabricante ou com outra metodologia, ou 
teste de detecção de ácido nucléico (NAT) do HTLV I/II.
Se o paciente teve testes sorológicos e NAT 
positivos, devemos realizar testes confirmatórios?
NÃO!
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• RDC 158 art. 135
• § 1º Quando a soroconversão/viragem for detectada pelo teste de 
detecção de ácido nucleico (NAT) do HIV, HCV e/ou HBV, isoladamente 
ou em associação com o teste sorológico, não é necessária a realização 
de testes para confirmação do resultado inicial.
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Testes de triagem reagentes para doador antigo:
• Identificar a data da última doação e verificar o destino dos componentes 
plasmáticos.
• Determinar o descarte imediato da bolsa de plasma ou de crioprecipitado que 
esteja armazenada em qualquer serviço de hemoterapia .
• Descartar a produção de reagentes (painéis, controles)
• Caso a unidade de plasma tenha sido enviada para o fracionamento industrial, 
a indústria que recebeu o plasma deve ser comunicada por escrito.
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• Encaminhar a amostra de sangue da última doação, em que foi identificada a 
soroconversão, para a realização dos testes confirmatórios. 
• Exame confirmatório reagente:
• Convocar o doador para a coleta de uma nova amostra, repetir os exames 
nessa mesma amostra e informá-lo sobre o resultado dos exames.
• Caso os exames confirmem o diagnóstico, excluí-lo temporária ou 
definitivamente, dependendo da doença.
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• No caso dos marcadores HIV, HCV, HBV (HBsAg), HTLV I/II, deve-se proceder à 
investigação dos receptores das doações realizadas em até 6 (seis) meses 
anteriores a última doação não reagente/negativa.
• No caso do marcador Anti-HBc (HBV), deve-se investigar os receptores para última 
doação não reagente/negativa se caso esta tiver ocorrido em até 12 (doze) meses
Teste inicial
Reagente Não-reagente
Repetição em duplicata
Reagente em 
1 ou nos 2 
testes
Não reagente 
nos 2 testes
Descartar a 
bolsa
Convocar o 
doador
Liberar a bolsa para uso
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• O serviço de hemoterapia deve informar à autoridade de vigilância em saúde e 
vigilância epidemiológica competente sobre os doadores com resultados 
reagentes/positivos dos testes laboratoriais de repetição para doenças 
transmissíveis pelo sangue.
Testes diagnósticos para Banco de Sangue
• O serviço de hemoterapia deve manter plasmateca ou soroteca de cada doação, 
com as amostras devidamente identificadas, registradas e armazenadas em 
temperatura igual ou inferior a 20ºC negativos, por período mínimo de 6 (seis) 
meses.