Relatório Práticas de Imunologia

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Danielle Nunes Gomes (20015011)
Miquéias A. Santos Junior (20014501)
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS
Pipetagem
Tipagem Sanguínea (Lâmina e Tubo)
Teste de Coombs
Imunologia Clínica
Prof° Janyerson Dannys
2023.1
PIPETAGEM - AULA PRÁTICA 1
1.0. INTRODUÇÃO
A pipetagem e micropipetagem são técnicas fundamentais em laboratórios para
medir e transferir volumes precisos de líquidos. Essas técnicas são utilizadas em diversas
áreas, como biologia, química, medicina e outras. A pipetagem é a técnica utilizada para
transferir volumes maiores de líquidos, geralmente acima de 1 mL, enquanto a
micropipetagem é utilizada para volumes menores, na faixa de microlitros.
As pipetas e micropipetas são ferramentas precisas e sensíveis e devem ser
manuseadas com cuidado e precisão. Além disso, a escolha do tipo de pipeta ou
micropipeta adequado para cada aplicação é importante para obter resultados confiáveis
e precisos.
1.1. OBJETIVOS
Os objetivos das técnicas de pipetagem e micropipetagem são garantir precisão e
acurácia na medição de volumes de líquidos em trabalhos laboratoriais. Isso é importante
para evitar erros na preparação de soluções, reações químicas e análises biológicas. Além
disso, essas técnicas ajudam a economizar reagentes e amostras, pois permitem a
medição exata do volume necessário
1.2. MATERIAIS E MÉTODOS
● Micropipetas com ponteiras descartáveis
● Solução a ser pipetada
● Tubo Graduado
● Suporte para pipetas ou micropipetas
● Recipiente com água para descarte de ponteiras
Passo a passo uso da pipeta (figura 1)
1. Selecionamos a micropipeta com a capacidade necessária para a quantidade de
solução a ser pipetada.
2. Escolhemos a ponteira adequada para a micropipeta.
3. Ajustamos o volume desejado na micropipeta.
4. Colocamos a ponta da micropipeta na solução a ser pipetada
5. Pressionamos o êmbolo até o primeiro ponto de parada para aspirar a solução.
6. Retiramos a ponta da micropipeta da solução e colocamos no tubo graduado onde a
solução será transferida.
7. Pressionamos o êmbolo até o segundo ponto de parada para liberar a solução no
tubo graduado.
8. Retiramos a micropipeta do tubo graduado e descartamos a ponteira usada em
local apropriado.
(Figura 1) Uso delle micropipette (Ourboox, 2021)
Passo a passo teste de dissolução
1. Separou-se 7 tubos graduados e colocou-se 300 uL da amostra de cor forte (figura
2) no primeiro tubo e 100 uL de água destilada nos outros.
2. Foi coletado 100 uL da amostra do primeiro tubo e transferido para o segundo tubo
que contém água destilada.
3. Depois, após trocar a ponteira da pipeta, foi coletado
100 uL do segundo tubo e transferido para o terceiro.
4. Foi realizado esse processo para todos os outros tubos
5. Observamos a diferença entre os tubos, e os resultados
foram comparados com os dos colegas.
(Figura 2) Amostras utilizadas
1.3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
Foi relatado a diferença do uso dos tipos de pipetas do laboratório, seja em seu
manuseio ou em seus resultados. Também foi observado que podem haver diferenças nos
resultados com o mesmo equipamento, mostrando que o manuseio implica diretamente
nos resultados.
1.4. CONCLUSÕES
Nesta prática, foi possível observar a importância da técnica de micropipetagem em
trabalhos que necessitam de alta precisão na manipulação de líquidos em volumes
reduzidos. Foi possível realizar a transferência de soluções com precisão e acurácia,
seguindo os passos corretamente para evitar erros experimentais. A escolha da ponteira
adequada para a micropipeta, o ajuste do volume necessário e o enxágue da ponteira
após cada transferência foram fundamentais para garantir a qualidade dos resultados,
além da importância de seguir o manuseio correto do equipamento.
1.5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
KASVI. Boas práticas em pipetagem. Disponível em:
https://kasvi.com.br/boas-praticas-em-pipetagem/. Acesso em: 12 abr. 2023.
https://kasvi.com.br/boas-praticas-em-pipetagem/
TIPAGEM SANGUÍNEA (LÂMINA E TUBO) - AULA PRÁTICA 2
2.0. INTRODUÇÃO
A tipagem sanguínea é um teste laboratorial realizado para identificar as
características do sangue de uma pessoa, incluindo o grupo sanguíneo e o fator Rh. tipo
de sangue de uma pessoa é determinado pelos antígenos presentes na superfície dos
glóbulos vermelhos e pelos anticorpos presentes no plasma sanguíneo.
A tipagem sanguínea é importante para a doação e transfusão de sangue, pois, se
uma pessoa receber sangue de um tipo diferente do seu, pode ocorrer uma reação
imunológica que pode ser grave ou até mesmo fatal. Por isso, é necessário que os
profissionais de saúde façam a tipagem sanguínea antes de realizar uma transfusão de
sangue ou de um transplante de órgão.
2.1. OBJETIVOS
O objetivo desta aula prática foi realizar o teste de tipagem sanguínea em lâmina,
utilizando os reagentes Anti-A, Anti-B e Anti-AB, e em tubo, para determinar o grupo
sanguíneo ABO dos pacientes.
2.2. MATERIAIS E MÉTODOS
● Lâminas e tubos de ensaio
● 1 reagente 1 (Anti-A)
● 1 reagente 2 (Anti-B)
● 1 reagente 3 (Anti-AB)
● Amostras de sangue com EDTA
● Micropipeta automática com capacidade de 50 µL.
A suspensão de glóbulos foi preparada de 40% em solução salina a 0,9%, conforme
descrito no procedimento.
Teste em lâmina:
O teste de lâminas para tipagem sanguínea consiste em identificar os tipos de
antígenos presentes na superfície das hemácias, e é realizado através de uma série de
reagentes que reagem com os diferentes tipos de antígenos. Abaixo segue um passo a
passo do procedimento:
● Preparamos uma suspensão de glóbulos de 40% em solução salina à 0,9%.
● Adicionamos uma gota do reagente Anti-A no lado esquerdo da lâmina e uma gota
de reagente Anti-B no lado direito. Em uma segunda lâmina, colocamos uma gota
de reagente Anti-AB.
● Adicionamos uma gota da suspensão de hemácias a cada reagente.
● Misturamos os reagentes com a suspensão de glóbulos em uma área de 2x3 cm.
Movimentamos delicadamente a lâmina para promover a mistura. Foi nesse
momento que a aglutinação na lâmina contendo Anti-A pôde ser observada
macroscópicamente. A aglutinação começou em poucos segundos.
É importante ressaltar que o teste de lâminas deve ser realizado com cuidado e
precisão, seguindo os procedimentos corretos e utilizando os materiais adequados. O
objetivo é identificar o tipo sanguíneo do indivíduo e evitar transfusões sanguíneas
incompatíveis, que podem levar a reações graves ou até mesmo fatais.
Teste em Tubo:
● Prepararam-se suspensões a 3-5% dos glóbulos a serem testados em solução
salina à 0,9%.
● Adicionaram-se uma gota de reagente Anti-A, Anti-B e Anti-AB respectivamente em
três tubos de ensaio e identificaram-se os tubos.
● Acrescentou-se uma gota de cada suspensão de glóbulos vermelhos em cada um
dos tubos. Os conteúdos foram misturados bem.
● Os tubos foram centrifugados por 15 segundos a 3400 rpm.
● O botão de glóbulos vermelhos foi suspenso delicadamente e a presença ou
ausência de aglutinação foi examinada.
● Os resultados foram graduados e registrados. A força centrífuga aplicada foi a
mínima necessária para obter um sobrenadante claro e um botão de glóbulos
vermelhos nitidamente delineados, que pudesse ser ressuspenso facilmente. Este
teste é útil para determinar a compatibilidade sanguínea entre doadores e
receptores em transfusões sanguíneas e em outras investigações médicas.
É importante destacar que a força centrífuga aplicada deve ser a mínima necessária
para obter um sobrenadante claro e um botão de glóbulos vermelhos nitidamente
delineado, que possa ser ressuspenso facilmente. Esse teste é útil para determinar a
compatibilidade sanguínea entre doador e receptor em transfusões sanguíneas e para a
realização de outras investigações médicas.
Interpretação do resultado
Após a realização do teste de lâminas para tipagem sanguínea, é possível interpretar
os resultados da seguinte forma:
● Se houver aglutinação no lado esquerdo da lâmina, significa que o sangue do
indivíduo possui o antígenoA em sua superfície, e portanto é do tipo A.
● Se houver aglutinação no lado direito da lâmina, significa que o sangue do
indivíduo possui o antígeno B em sua superfície, e portanto é do tipo B.
● Se houver aglutinação em ambos os lados da lâmina, significa que o sangue do
indivíduo possui tanto o antígeno A quanto o antígeno B em sua superfície, e
portanto é do tipo AB.
● Se não houver aglutinação em nenhum dos lados da lâmina, significa que o sangue
do indivíduo não possui nem o antígeno A nem o antígeno B em sua superfície, e
portanto é do tipo O.
Limitações do teste
Assim como qualquer outro teste laboratorial, o teste de lâminas para tipagem sanguínea
também possui suas limitações. Algumas das principais limitações incluem:
1. Sensibilidade: O teste pode não detectar com precisão todos os antígenos
presentes nas hemácias, especialmente em casos de baixa concentração de
antígenos ou em amostras de baixa qualidade.
2. Especificidade: O teste pode reagir com outras substâncias presentes na amostra,
o que pode levar a resultados falsos positivos ou falsos negativos.
3. Interferências: Fatores como temperatura, pH e presença de substâncias
interferentes podem afetar os resultados do teste.
4. Interferências: Fatores como temperatura, pH e presença de substâncias
interferentes podem afetar os resultados do teste.
5. Limitação do tipo sanguíneo: O teste de lâminas pode não ser capaz de determinar
todos os tipos sanguíneos, como o fenótipo Duffy, o que pode levar a resultados
inconclusivos em algumas situações.
2.3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
Os resultados obtidos nos testes de lâminas para tipagem sanguínea indicaram a
presença dos tipos de sangue O e A (Figura 3 e 4).
(Figura 3) Teste positivo
para sangue O em tubo.
(Figura 4) Teste positivo para
sangue A em lâmina.
(Figura 5) Tabela de interpretação para
tipagem sanguínea.
2.4. CONCLUSÕES
Com base nos resultados obtidos através do teste de lâminas para tipagem
sanguínea, foi possível identificar os tipos sanguíneos presentes na amostra analisada
como sendo tipo O e tipo A. É importante destacar a importância deste teste para evitar
transfusões sanguíneas incompatíveis, que podem causar reações graves ou fatais nos
pacientes. Portanto, a realização da tipagem sanguínea é fundamental em situações de
transfusão de sangue, transplantes de órgãos e outras intervenções médicas que
envolvem o uso de sangue ou derivados. A precisão e a correta execução deste teste são
fundamentais para garantir a segurança e a saúde dos pacientes envolvidos.
2.5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Belli, M. Tipagem Sanguínea. Famivita. Disponível em:
https://www.famivita.com.br/conteudo/tipagem-sanguinea/. Acesso em: 12 abr. 2023
https://www.famivita.com.br/conteudo/tipagem-sanguinea/
TESTE DE COOMBS - AULA PRÁTICA 3
3.0. INTRODUÇÃO
O teste de Coombs, também conhecido como teste de antiglobulina ou teste de
aglutinação, é uma técnica laboratorial que permite a detecção de anticorpos presentes no
soro sanguíneo de pacientes que possam estar causando danos às hemácias. Existem
dois tipos principais de teste de Coombs: o direto, que detecta a presença de anticorpos
ou complementos fixados às hemácias, e o indireto, que identifica a presença de
anticorpos no soro do paciente.
3.1. OBJETIVOS
O objetivo desta aula prática foi aprender sobre o teste de Coombs, uma técnica
utilizada para detectar aloanticorpos ou componentes do complemento fixados às
hemácias "in vivo" ou "in vitro". Mais especificamente, foram abordados o Coombs direto,
que é utilizado para detecção de anticorpos já fixados às hemácias, e o Coombs indireto,
utilizado para pesquisar no soro do paciente a presença de aloanticorpos irregulares
voltados contra antígenos clinicamente significativos de importância transfusional e/ou
gestacional.
3.2. MATERIAIS E MÉTODOS
Foram utilizados diversos materiais e equipamentos durante a aula prática de teste de
COOMBS. Para a preparação das amostras, foram utilizados
● Tubos e lâminas
● Reagentes BIO PEG (reagente 1)
● Anti IGG HUMANA (reagente 2)
● Salina a 0,9%
As amostras analisadas foram o soro do paciente (amostra 1) e as hemácias do
doador (amostra 2). Para a realização das pipetagens, foram utilizadas micropipetas de
50uL. Os materiais foram organizados em uma estante para facilitar o manuseio durante a
aula prática.
Parte experimental
● As hemácias teste foram lavadas 3 a 4 vezes em salina e uma suspensão de 3 a
5% foi preparada em salina.
● Identificaram-se dois tubos (IgG, Poli) e adicionou-se 1 gota de suspensão de
hemácias em cada tubo.
● Adicionou-se de 1 a 2 gotas do soro antiglobulina correspondente a cada tubo.
● Misturaram-se e centrifugaram-se os tubos de 3000 a 3600 rpm por 15-20
segundos.
● Ressuspendeu-se gentilmente e examinaram-se a aglutinação. Registraram-se os
resultados.
● Os resultados negativos foram confirmados adicionando o controle de Coombs,
centrifugando e observando a aglutinação:
Coombs Indireto
● Foram marcados dois tubos identificados como I e II, ambos com o número da
amostra teste;
● Em cada tubo, foram adicionadas 2 gotas de soro do paciente e 1 gota do reagente
de hemácia de triagem I e II, respectivamente;
● Foi acrescentado 2 gotas de Bio PEG em cada tubo, homogeneizado e não foi
centrifugado;
● Os tubos foram incubados a 370C por 15 minutos;
● Não houve centrifugação.
● As hemácias foram lavadas 3 vezes com salina, agitando sempre os tubos para que
ocorra o desprendimento total do botão formado no fundo do tubo antes de
acrescentar novamente a salina;
● Foi feita a decantação completa do sobrenadante final, desprezando o botão
formado e adicionando 1 gota de soro antigamaglobulina anti-IgG;
● Homogeneizado e centrifugado por 15 segundos a 3400 rpm;
● Foi examinada a aglutinação das hemácias e registrados os resultados de acordo
com a ausência ou presença aglutinação, anotando sempre a intensidade de
aglutinação.
3.3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
Não foram detectados aloanticorpos irregulares no soro do paciente, voltados contra
antígenos clinicamente significativos de importância transfusional e/ou gestacional. É
importante ressaltar que um resultado negativo não descarta totalmente a possibilidade da
presença desses anticorpos, e que testes adicionais podem ser necessários para
confirmar o resultado.
3.4. CONCLUSÕES
Esta aula prática permitiu a realização de testes de Coombs direto e indireto, que são
fundamentais para a detecção de anticorpos ou componentes do complemento fixados às
hemácias. Com o uso de reagentes e equipamentos específicos, foi possível realizar as
etapas necessárias para cada método, como a preparação de suspensões de hemácias,
adição de reagentes e soro do paciente, centrifugação e observação de aglutinação.
Os resultados obtidos durante a aula prática demonstraram a importância desses
testes para a identificação de aloanticorpos irregulares voltados contra antígenos
clinicamente significativos de importância transfusional e/ou gestacional. A ausência de
aglutinação indicou resultados negativos, enquanto a presença de aglutinação indicou
resultados positivos, os quais devem ser interpretados e confirmados de acordo com os
protocolos estabelecidos.
Dessa forma, a realização dessa aula prática foi essencial para a compreensão dos
princípios dos testes de Coombs direto e indireto e sua relevância para o diagnóstico e
tratamento clínico de diversas condições, como anemia hemolítica autoimune, doença
hemolítica do recém-nascido e transfusão sanguínea.
3.5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Câmara, B. Teste de Coombs Direto. Biomedicina Padrão. Publicado em: 28 dez. 2018.
Disponível em:
https://www.biomedicinapadrao.com.br/2010/11/teste-de-coombs-direto.html?m=1. Acesso
em: 18 abr. 2023.
https://www.biomedicinapadrao.com.br/2010/11/teste-de-coombs-direto.html?m=1