Protocolo de Aula Prática - Eletroforese

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ROTEIRO DE TREINO DE HABILIDADES 
Tema do Treino de Habilidades 
 
Preparo de Gel de Agarose 1% 
Data 
Aula 9 
Local onde acontecerá o 
Treino de Habilidades 
Laboratório de Biologia Molecular 
Tempo de duração do Treino 
de Habilidades 
50 minutos Horário 
Curso(s) 
 
Biomedicina 
 Turma(s) Nº de 
Alunos 
 
Docente(s) Unidade(s) 
Curricular(es) 
Tecnologia Genética: Diagnóstico Molecular e Bioinformática 
Observações Relevantes sobre a turma: 
 
I. Objetivos de Aprendizagem 
a. Empregar os conhecimentos teóricos sobre eletroforese para selecionar a melhor técnica de eletroforese para a análise dos produtos de PCR 
produzidos em aula prática. 
b. Praticar a técnica de eletroforese em gel de agarose. 
II. Materiais Necessários 
• EQUIPAMENTOS PARA CENÁRIOS DE PREPARO DE GEL: 
• Provetas de 50 mL 
• Erlenmeyers de 50 mL 
• Papel alumínio ou vidro de relógio para pesagem 
• Balança semi-analítica. 
• Espátula para pesagem. 
• Microondas. 
• Aparatos para montagem do gel. 
• Agarose. 
• TBE 1X. 
• EQUIPAMENTOS PARA CENÁRIOS DE APLICAÇÃO DE AMOSTRAS: 
• Luvas, máscaras e toucas descartáveis; 
• Cuba de eletroforese; 
• Fonte; 
• Gel pronto para treino de aplicação de amostras (adequar o número de géis de acordo com o tamanho da turma); 
• Amostras (pode ser fake); 
• Tampão de amostra (não deixar misturado, quero que eles misturem antes da aplicação); 
• Placa de ELISA com papel alumínio para homogeneização das amostras; 
• Pipetas P-10, P-100; 
• Ponteiras para Pipetas P-10, P-100; 
• Estantes para microtubos. 
III. Organização do Ambiente 
Organizar cenários contendo os materiais previamente descritos. Adequar a quantidade de cenários conforme o número de alunos da turma. 
Cenários para preparo de gel - tantos quantos aparatos para montagem de gel disponíveis – 1 aparato por cenário. 
Cenários para treino de aplicação de amostras – tantos quantas cubas disponíveis – 1 cuba por cenário. 
Os cenários para o preparo do gel devem estar em uma bancada diferente dos cenários para o treino de aplicação das amostras. 
OBSERVAÇÕES (CUIDADOS ESPECIAIS...): 
A utilização de brometo de etídeo ou gel red na construção dos géis fica a critério do professor. Se for utilizar, incluir este reagente nos materiais necessários 
para a aula. 
IV. Objetivos, Instruções e CheckList das estações de Aprendizagem 
Objetivo da Estação 1 de 
Aprendizagem: 
 
Instruções da Estação 1 de Aprendizagem: 
 
Você deverá lavar as mãos adequadamente, colocar touca, máscara, pró-pés e, por último calçar adequadamente as luvas. 
Após a paramentação, você deverá higienizar a bancada aonde irá trabalhar e todos os equipamentos que serão utilizados 
Preparar gel de agarose a 1%. para a sua prática. Após a higienização, você deverá seguir o passo a passo descrito no check-list para proceder a execução 
da prática. 
 
IMPORTANTE: os grupos devem seguir o check-list, para conferir se fizeram todos os passos necessários. Enquanto um 
aluno pratica, outro aluno confere o check-list. 
 
Check-list da Estação 1 de Aprendizagem: 
Preparo do Gel de Agarose 
1. Preparar a forma do gel, fixando o pente adequadamente. Verificar se está em uma superfície reta, para que fique 
uniforme. 
2. Pesar 0,5 g de agarose em um papel alumínio e transferi-la para um Erlenmeyer. 
3. Adicionar à agarose pesada 50 mL de TBE 1X. 
4. Aquecer por 1 minuto em microondas ou até que a solução fique límpida (cuidar para não transbordar). 
5. Resfriar a solução em água corrente. 
6. Verta o gel ainda liquido na forma e espere solidificar. 
7. Respond 
a às questões: 
a) Em qual direção o DNA migra durante a eletroforese? Por que? 
b) Qual o critério de escolha do tipo do gel? Qual a diferença entre o gel de agarose e de poliacrilamida? 
c) Qual gel você usaria para analisar: 
- DNA total: 
- fragmento de DNA de 200 pb: 
- fragmento de DNA de 20 pb: 
- dois fragmentos de DNA, um de 50 pb e um de 35 pb: 
d) Qual a importância da concentração do gel? O que ela impacta na análise? 
 
Objetivo da Estação 2 de 
Aprendizagem: 
 
Instruções da Estação 2 de Aprendizagem: 
 
Você deverá seguir o passo a passo descrito no check-list para proceder a execução da prática. 
 
 
 
Treinar a aplicação de amostras em 
gel de agarose 
IMPORTANTE: os grupos devem seguir o check-list, para conferir se fizeram todos os passos necessários. Enquanto um 
aluno pratica, outro aluno confere o check-list. 
 
Check-list da Estação 2 de Aprendizagem: 
Preparo do Gel de Agarose 
1. Revestir uma estante para microtubos com papel alumínio; 
2. Sobre essa superfície revestida, aplicar uma gota de tampão de amostra para cada amostra a ser aplicada em 
gel; 
3. Para cada gota de tampão de amostra aplicar 7 µL do produto de PCR. Com a própria ponteira, misturar peso 
molecular e produto de PCR; 
4. Pipetar cada uma das amostras nos poços do gel. Não esqueça de deixar espaço para o marcador molecular 
(pipetar 5 µL no poço do gel); 
5. Após a aplicação de todas as amostras, tampar a cuba e instalar os eletrodos; 
6. Ligue a fonte de energia e acerte a voltagem para 100; 
7. Ao longo da migração, observe que o peso molecular irá se mover pelo gel. Desligue a fonte antes de esse peso 
atingir o final do gel (OBS: na aula de hoje não iremos analisar o resultado da corrida).