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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD AULA ____ DATA: ______/______/______ VERSÃO:01 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular DADOS DO(A) ALUNO(A): NOME: Milena Pelicer Ribeiro MATRÍCULA:47010874 CURSO: Biomedicina POLO: UNIFAEL Machadinho RS PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): Juliana Prado Goncales ORIENTAÇÕES GERAIS: · O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e · concisa; · O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema; · Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado); · Tamanho: 12; Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm; · Espaçamento entre linhas: simples; · Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado). TEMA DE AULA: EXTRAÇÃO DE DNA RELATÓRIO: 1. Após realizar a atividade proposta pela professora, descrever detalhadamente o que ocorreu em cada etapa da extração de DNA do morango. Além de descrever o que está acontecendo visualmente, identificar o que acontece biologicamente com as células em cada uma das etapas. É obrigatório anexar pelo menos 1 foto de cada etapas do processo de extração. Etapas realizadas: · Lavar o morango e tirar as sépalas. · Colocar o morango no almofariz e macetar com o pistilo. · Adicionar em um Becker 150 ml de água destilada e 10 g de NaCl e 20 ml de detergente. · Homogeneizar. · Filtrar o extrato do morango com papel filtro. · Colocar o filtrado em um tubo de ensaio. · Adicionar álcool etílico gelado dentro do tubo de ensaio e homogeneizar. · Observar o DNA precipitado. NaCl (sal) proporciona ao DNA um ambiente adequado, o mesmo contribui com íons positivos que neutralizam a carga do DNA. Várias moléculas de DNA podem coexistir nesta solução. O detergente afeta as membranas pois são formadas por lipídeos, com essa ruptura das membranas, o conteúdo celular solta-se e se dispersa na solução. Álcool etílico, ao ser adicionado bem gelado na solução, é possível observar a precipitação da fita de DNA, isso ocorre, pois, a proteína DNA torna-se insolúvel em álcool, tornando possível sua visualização. TEMA DE AULA: ELETROFORESE RELATÓRIO: 1. Identificar todos os equipamentos e reagentes necessários para a realização da eletroforese Equipamentos: · Bandeja de gel. · Pentes. · Fonte de energia para a alimentação. · Transluminador ou caixa de luz. · Marcador de peso molecular. Reagentes: · Gel de agarose. · Amostras a serem analisadas. · Corante não mutagênico Safer. 2. Descrever cada etapa dessa metodologia Eletroforese em gel é uma técnica utilizada na separação de fragmentos de DNA. Após a coleta das amostras, as mesmas são introduzidas no gel, dentro de uma solução tampão especifica para eletroforese. Em seguida, as amostras são pipetadas em pequenas cavidades feitas com um pente no gel, dentro de uma bandeja. Durante o processo, é necessário que ocorra a migração, por isso, a cuba e a fonte de eletroforese exercem uma voltagem, corrente e potencia constante, fatores estes que irão determinar a manutenção do valor do pH. Ao fim do procedimento, as bandejas são visualizadas sob luz ultravioleta ou LED, por um equipamento denominado transluminador. 3. Justificar a aplicação das diferentes concentrações dos géis. O gel de agarose é a matriz na qual é aplicada a amostra e que permite realizar a separação dessas moléculas. Sua estrutura química possibilita a formação de gel altamente resistente, mesmo em baixas concentrações. O gel possui uma estrutura macrorreticular que pode ser ajustada simplesmente pela variação da concentração de agarose, isso permite a passagem das moléculas, atuando como peneiras moleculares, e fornece as condições ideais para a realização da eletroforese. Os géis de baixa percentagem de agarose são relativamente rígidos e fáceis de manipular, sendo usados para separa moléculas grandes como o DNA e o RNA, proteínas e complexos proteicos muito grandes. O que é preciso observar é que a concentração do gel deve ser apropriada ao tamanho do fragmento que se está interessado em analisar.
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