PRINC_PIO_DAS_T_CNICAS_IMUNOL_GICAS

Prévia do material em texto

PRINCÍPIO DAS TÉCNICAS 
IMUNOLÓGICAS
Imunologia médica
CONCEITOS PRÉVIOS
Fonte: Abbas, 7ª ed
Fonte: Abbas, 7ª ed
LABORATÓRIO DE ANÁLISES 
CLÍNICAS
• IMUNODIAGNÓSTICO
• Evidenciar a interação antígeno-anticorpo
– Pesquisa do antígeno sérico
– Pesquisa do anticorpo sérico
Detecção de antígenos
VANTAGENS LIMITAÇÕES
- Vigilância de pacientes em risco pode
identificar infecções ANTES dos métodos
tradicionais e permitir adoção de
estratégias terapêuticas antecipadas.
- Reação cruzada entre microrganismos
relacionados limita a especificidade, e
testes falso-positivos são comuns
- Pode ser útil como indicador
prognóstico e para acompanhamento da
resposta à terapia.
Detecção de anticorpos
VANTAGENS LIMITAÇÕES
- Evidência de exposição prévia e
identifica populações de pacientes em
risco
- Não diferencia consistentemente
exposição prévia de doença ativa
COMO DETECTAR A INTERAÇÃO 
ANTÍGENO-ANTICORPO?
TESTES QUE UTILIZAM REAGENTES 
NÃO MARCADOS
Imunoprecipitação
Aglutinação
Floculação 
IMUNOPRECIPITAÇÃO
Antígeno - solúvel
•Zona de equivalência: Ag-Ac se 
ligam equimolarmente 
formando uma rede estável. 
•Excesso de antígeno: Os 
complexos podem ser 
dissolvidos quando há excesso 
de Ag pois o Ac fica livre para se 
ligar a novos Ag adicionados 
diminuindo a formação de 
complexos insolúveis.
•Excesso de Ac: Ocorre redução 
de imunocomplexos pois todo o 
Ag está precipitado e fica Ac livre 
no sobrenadante.
Pró-Zona
AGLUTINAÇÃO
ANTÍGENOS PARTICULADOS
TIPAGEM SANGUÍNEA
Anticorpos 
Antígenos 
eritrocitários 
(Hemácias)
CONCEITOS BÁSICOS
• ANTÍGENOS ERITROCITÁRIOS
• ANTICORPOS NATURAIS
Anti-B, anti-A, nenhum, anti-A e 
anti-B
Aglutinação do Látex: FR, PCR, 
ASLO
• ASLO:
• Partículas de látex revestidas com estreptolisina O
purificadas e estabilizadas;
• Mostram nítida aglutinação quando misturadas, em
uma área do cartão-teste, com um soro contendo
níveis elevados de anticorpos antiestreptolisina.
VDRL
Veneral Disease Research Laboratory
VDRL
• Sífilis- doença infecciosa humana produzida
por um espiroqueta, Treponema pallidum.
• Bactéria não cultivada- uso de ensaios
imunológicos para detecção da infecção.
• Testes não treponêmicos: VDRL e RPR
• Teste de floculação não-treponêmico
• Não contém a bactéria; e sim uma mistura de
lecitina, cardiolipina e colesterol (mimetiza a
bactéria)
• Pesquisa de anticorpos (reaginas) no soro,
plasma ou LCR.
• Presença de flocos visíveis a olho nu ou ao
microscópio: Reagente --- diluição em série
VDRL
TESTES QUE UTILIZAM REAGENTES 
MARCADOS
ELISA
IMUNOFLUORESCÊNCIA
QUIMIOLUMINESCÊNCIA
IMUNOCROMATOGRAFIA
TESTES RÁPIDOS
TESTE DE GRAVIDEZ
IMUNOCROMATOGRAFIA
BETA-hCG – Imunocromatografia
• O teste β-hCG é um teste imunocromatográfico
rápido, para detecção qualitativa de Gonadotrofina
Coriônica Humana β (β-hCG) em amostras de urina
ou soro humano, indicado para o diagnóstico
precoce da gravidez.
ELISA (imunoensaio enzimático)
“Cut-off”
Cut-off
• Valor de corte para definir quais amostras do 
ELISA serão positivas ou negativas.
• Como ele é calculado? Depende de cada kit.
• Exemplo: Se cut-off for 2x valor CN
• CN: 0,15. Então, 2x 0,15= 0,30 (cut-off)
• Resultados menores 0,30 (NEGATIVOS)
• Resultados maiores 0,30 (POSITIVOS)
IMUNOFLUORESCÊNCIA
WESTERN BLOT
Western blot
• O WB é uma reação que utiliza, como fase sólida, uma membrana de nitrocelulose que
possui, fixados, antígenos do HIV distribuídos de acordo com seu peso molecular.
• As proteínas e glicoproteínas virais, que atuam como antígenos, são separadas por
eletroforese – em gel de poliacrilamida, segundo seus pesos moleculares – e
transferidas para a membrana de nitrocelulose.
• A reação entre o antígeno adsorvido à membrana de nitrocelulose e os anticorpos da
amostra é revelada por um processo enzimático.
• Adiciona-se o conjugado 1, composto por uma anti-imunoglobulina humana conjugada
com biotina. Adiciona-se o conjugado 2, que é composto de avidina1 ou estreptavidina
ligada a uma enzima.
• Em seguida, adiciona-se o substrato (4-cloro-1-naftol). A degradação do substrato
origina um produto insolúvel e corado que permite, a olho nu, a visualização da reação
sobre a fita.
• Alguns conjuntos diagnósticos de WB para HIV-1 podem utilizar outros sistemas de
revelação, sem o emprego de avidina (ou da estreptavidina) e biotina.
RESULTADOS
RESULTADOS
RESULTADOS
	Slide 1: PRINCÍPIO DAS TÉCNICAS IMUNOLÓGICAS
	Slide 2: CONCEITOS PRÉVIOS
	Slide 3
	Slide 4: LABORATÓRIO DE ANÁLISES CLÍNICAS
	Slide 5: Detecção de antígenos
	Slide 6: Detecção de anticorpos
	Slide 7: COMO DETECTAR A INTERAÇÃO ANTÍGENO-ANTICORPO?
	Slide 8: TESTES QUE UTILIZAM REAGENTES NÃO MARCADOS
	Slide 9: IMUNOPRECIPITAÇÃO
	Slide 10
	Slide 11
	Slide 12
	Slide 13: AGLUTINAÇÃO
	Slide 14: TIPAGEM SANGUÍNEA
	Slide 15: CONCEITOS BÁSICOS
	Slide 16
	Slide 17
	Slide 18: Aglutinação do Látex: FR, PCR, ASLO
	Slide 19
	Slide 20: VDRL
	Slide 21: VDRL
	Slide 22: VDRL
	Slide 23
	Slide 24: TESTES QUE UTILIZAM REAGENTES MARCADOS
	Slide 25: IMUNOCROMATOGRAFIA
	Slide 26: IMUNOCROMATOGRAFIA
	Slide 27
	Slide 28: BETA-hCG – Imunocromatografia
	Slide 29
	Slide 30
	Slide 31: ELISA (imunoensaio enzimático)
	Slide 32
	Slide 33
	Slide 34
	Slide 35: Cut-off
	Slide 36: IMUNOFLUORESCÊNCIA
	Slide 37
	Slide 38: WESTERN BLOT
	Slide 39
	Slide 40: Western blot
	Slide 41: RESULTADOS
	Slide 42: RESULTADOS
	Slide 43: RESULTADOS