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Estudo Dirigido para o Primeiro Bloco do Curso Ao final desse bloco, esperamos que vocês se concentrem nos seguintes tópicos: 1) Saber identificar os diferentes açúcares, bases nitrogenadas que compõem os ácidos nucleicos; a. Desoxirribose – não tem hidroxila no carbono 2 b. Ribose – tem hidroxila no carbono 2 2) Saber identificar as ligações químicas nos nucleotídeos; a. Ligação covalente fosfodiester b. Ligação de hidrogênio c. Interações de Van der Whals 3) Descrever as principais características da forma B do DNA; Forma B (DNA-B) -Forma mais estável (padrão) com rotação para a direita. -Predominante no DNA cromossômico -10,5 bases por volta Forma A (DNA-A) Estrutura do DNA -Variante da forma B pela redução da umidade relativa em 75% -11 pares de bases por volta -Predominante em híbridos DNA-RNA ou RNA-RNA (dupla fita) Formas estruturais da dupla hélice Forma Z (DNA-Z) Estrutura do DNA -Rotação para a esquerda -12 pares de base por volta -Devido à sequencias repetidas C e G (G pode assumir conformação syn) -Suspeita-se que é importante para a regulação da expressão gênica e recombinação Formas estruturais da dupla hélice 4) Diferenciar dNTP de NTP; Nucleotídeo trifosfato (NTP): onde ocorre a ligação de três grupos de ácido fosfórico. Ex: Adenosina 5’ trifosfato (ATP); Guanosina 5’ trifosfato (GTP) e Uridina 5’ trifosfato (UTP). Adenosina 5’ trifosfato (ATP); Guanosina 5’ trifosfato (GTP) e Uridina 5’ trifosfato (UTP). Os Desoxirribonucleotídeos Fosfatados dNTP's são nucleotídeos do DNA formados por: Uma base azotada (Adenina, Citosina, Guanina e Timina), um açúcar (desoxirribose) e 3 grupos fosfato. Os dNTPs[editar | editar código-fonte] · dATP (desoxiAdenosina Trifosfatada), · dCTP (desoxiCitidina Trifosfatada), · dGTP (desoxiGuanosina Trifosfatada) e · dTTP (desoxiTimidina Trifosfatada), 5) Princípios dos testes de paternidade; 6) Explicar o experimento de Meselson-Stahl 7) Explicar a bioquímica da formação da ligação fosfodiéster; a. Uma ligação fosfodiéster é um tipo de ligação covalente que é produzida entre dois grupos hidroxila (–OH) de um grupo fosfato e duas hidroxilas de outras duas moléculas por meio de uma dupla ligação éster. 8) Explicar a descontinuidade da síntese de DNA; As duas cadeias moldes são antiparalelas, em uma delas a síntese da cadeia complementar ocorre no sentido 5´ => 3´, mas na outra cadeia essa síntese teria que se dar no sentido inverso, ou seja, 3´ => 5´. No entanto, as duas cadeias são sintetizadas pela polimerase III do DNA, que só catalisa o crescimento da cadeia no sentido 5´ => 3´. A explicação para esse paradoxo é que, na forquilha de replicação, uma das cadeias é sintetizada continuamente por uma polimerase que se move no mesmo sentido do deslocamento da forquilha. Já a cadeia com polaridade inversa é sintetizada no sentido inverso ao do deslocamento da forquilha de replicação, portanto, também no sentido 5´ => 3´. Isso é possível porque, nesse último caso, a polimeraze sintetiza segmentos polinucleotídicos curtos, que são, posteriormente, unidos para formar a nova cadeia contínua. a. 9) Descrever as 3 atividades da DNA Polimerase I de E. coli; a. Atividade processiva polimerasica 3’ ->5’ b. Atividade exonucleásica corretora de erros:5’->3’ c. Atividade exonucleásica revisora 3’->5’ 10) Saber a função das enzimas envolvidas na replicação do DNA; a. Helicase abre o DNA no garfo de replicação b. Proteínas ligadoras de fita simples recobrem o DNA ao redor do garfo de replicação para evitar que o DNA se enrole. c. Topoisomerase trabalha na região à frente do garfo de replicação para evitar enrolamento excessivo. d. Primase sintetiza primers de RNA complementares à fita de DNA. e. DNA polymerase III aumenta os primers adicionando nucleotídeos na extremidade 3', para fazer a maior parte do novo DNA. f. Primers de RNA são removidos e substituídos com DNA pela DNA polimerase I g. As lacunas entre fragmentos de DNA são fechadas pela DNA ligase. 11) Importância da metilação na replicação e reparo; a. A metilação do DNA (uma modificação química que se observa pela ligação de um grupo metil ao carbono 5 da citosina - Fig. 1), suprime a transcrição de determinados genes e também promove a alteração da estrutura da cromatina para formas mais condensadas. 12) Explicar a adição de sequências nos telômeros; 13) Descrever os mecanismos de reparo; a. DNA polimerases são as enzimas que constroem o DNA nas células. Durante a replicação do DNA (cópia), a maioria das DNA polimerases "verificam seu trabalho" a cada base que acrescentam. Esse processo é chamado revisão. Se a polimerase detecta que um nucleotídeo errado (incorretamente pareado) foi adicionado, ela irá removê-lo e substituí-lo imediatamente, antes de continuar com a síntese de DNA b. Imediatamente após a síntese de DNA, qualquer base mal pareada restante pode ser detectada e substituída em um processo chamadoreparo por mau pareamento. c. Se o DNA fica danificado, pode ser reparado por vários mecanismos, incluindo química reversa, reparo de excisão, e reparo de quebras de fita dupla. 14) Desenhar primers e calcular o Tm dos mesmos para uma reação de PCR; 15) Saber identificar sequência palindrômica; 16) Princípios do sequenciamento de DNA por terminação de cadeia; 17) Saber fazer um mapa de restrição simples;
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