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Bioquímica Clínica Técnicas Laboratoriais 1) O que é fundamental no uso das técnicas? Reconhecer instrumentos e as formas de manuseio das técnicas. 2) O que é a espectrofotometria? Se baseia na interação da matéria com a radiação eletromagnética calculando o quanto é absorvido x quanto é transmitido. 3) Como funciona o espectrofotômetro? Detecta luz resultante após incidência sobre uma solução com substâncias que se deseja identificar. 4) Quais são os componentes do espectrofotômetro: Fonte de luz, colimador (lente de direcionamento), monocromador (prisma que transforma a luz em comprimento de onda), cubeta (recipiente para amostra feita de material transparente, quanto mais límpida a amostra, melhor o resultado) e detector (detecta a luz e transforma pra máquina em forma de números) 5) Sobre os espectrofotômetros, explique o que é transmitância x absorbância: - Transmitância: Luz transmitida da amostra - Absorbância: Luz que foi absorvida pela amostra São inversamente proporcionais. 6) Descreva o procedimento: Homogeneizar, Incubar a 37º C durante 10 minutos, zerar com o branco, determinar a absorbância do teste (490 a 520 nm). Solução estável até 30 minutos. CÁLCULO: GLICOSE (Mg/dl): absorbância do teste / absorbância do padrão x 100 Ex.: 0,362 / 0,340 x 100 = 106 7) Quando usam métodos enzimáticos? Na determinação de lipídeos plasmáticos (colesterol e trigli.). Que, ao gerar o produto, pode reagir com algum reagente do meio, produzindo uma cor que será medida por espectrofotometria 8) Tipos de reações: - Cinética de ponto final: Pouca estabilidade e poucos interferentes - Cinética de dois ou mais pontos: Usada quando não há estabilidade ou há muitos interferentes. O tempo é importante. (Medir no tempo 10, 20, 40, 60 minutos). 9) O que é a turbidimetria? Mede a turvação em um sistema líquido. Massa celular e não quantidade de células. Nesse método é medido a perda da intensidade da luz devido o espalhamento das partículas suspensas nelas. 10) O que é imunoturbidimetria? O espectrofotômetro detecta a diminuição da intensidade da luz incidente após a passagem por uma solução de imunocomplexos, causada por absorção, dispersão ou desvio. Detecção de antígenos ou anticorpos. 11) Quais são os agentes de um ensaio bioquímico? - Padrão: Solução da substância alvo de concentração conhecida. (testa precisão). - Soro controle: Amostra com valor conhecido. (testa exatidão). - Amostra: desconhecido. 12) Tenho uma faixa linear para a glicose de 450mg/dL. Meu resultado foi 480mg/dL. Esse exame deve ser liberado? Não. No método de curva de calibração consideramos confiável até sua faixa linear (concentração máxima de dosagem). Por isso, deve-se diluir a amostra. Pode ser feito em 1:10. Ou seja, diluir 480mg em 10 de solução. 13) Explique a eletroforese: Processo de migração de um soluto ou partícula carregada, a qual está dissolvida em um líquido, sob influência. 14) Explique a imunofluorescência: Técnica em que se visualiza antígenos em tecidos por meio de corantes fluorescentes que emitem comprimento de onda.