HIV: Estrutura, Infecção e Diagnóstico

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HIV
Estrutura Viral
Partícula esférica que mede de 100 a 120 nm de diâmetro 
Gênero Lentivirinae e família Retroviridae
Núcleo: duas cópias de RNA de cadeia simples, encapsuladas por uma camada proteica ou núcleo capsídeo, capsídeo e um envelope externo composto por uma bicamada fosfolipídica
Classificação
A classificação do HIV é feita por meio da análise filogenética de sequências nucleotídicas dos vírus 
A classificação atual é hierárquica e consiste em tipos grupos subtipos sub subtipos e formas recombinantes 
O HIV 1 e o HIV 2 são tipos distintos do vírus mais distantes filogeneticamente
A variação genética do HIV tem implicações tanto na biologia do vírus e sua transmissão quanto na reatividade e reação cruzada em testes diagnósticos que detectem a presença de anticorpos específicos para os antígenos virais.
Contaminação
SEXUAL
SANGUÍNEA
VERTICAL
OCUPACIONAL
Infecção
A maioria das infecções pelo HIV 1 ocorre através das mucosas do trato genital ou retal durante a relação sexual.
Nas primeiras horas após a infecção pela via sexual, o HIV e células infectadas atravessam a barreira da mucosa, permitindo que o vírus se estabeleça no local de entrada e continue infectando linfócitos T CD 4 ++(T CD 4 além de macrófagos e células dendríticas.
Alvo principal são Linfócitos T CD4 ativados. A via de entrada é através da interação do CD4 e co-receptores de quimiocinas (CCR5 e CXCR4)
Como em qualquer outra infecção viral, a primeira classe de anticorpo produzida durante uma resposta primária é a imunoglobulina M (IgM)
Devido à persistência do HIV, nosso organismo é continuamente exposto aos mesmos antígenos e a produção inicial de IgM é substituída pela produção de imunoglobulina G (IgG)
Entretanto ao contrário de outras doenças infecciosas, presença da IgM não permite diferenciar uma infecção recente de uma infecção crônica, tendo em vista que a IgM pode reaparecer em outros momentos durante o curso da infecção
HIV não tratado Diminuição brusca de CD 4 no TGI e Diminuição progressiva de CD 4 no sangue
Diagnóstico laboratorial
Os testes para detecção da infecção pelo HIV são principalmente empregados em três situações:
· para triagem sorológica do sangue doado e garantia da segurança do sangue hemoderivados e órgãos para transplante
· para os estudos de vigilância epidemiológica
· para realizar o diagnóstico da infecção pelo HIV
p24: O exame antígeno p 24 detecta uma proteína do HIV no sangue O exame em geral fica positivo de uma a quatro semanas após a infecção 
A proteína p 24 não pode ser detectada antes porque o vírus ainda não se replicou (criou cópias de si mesmo) para produzir uma quantidade suficiente da proteína
Imunoensaio de Triagem: 3ª Geração
O ensaio de 3 ª geração tem o formato sanduíche ou imunométrico. 
A característica desse ensaio é utilizar antígenos recombinantes ou peptídeos sintéticos tanto na fase sólida quanto sob a forma de conjugado. 
Esse formato permite a detecção simultânea de anticorpos anti-HIV IgM e IgG 
Em média a janela de soroconversão dos ensaios de terceira geração é de 22 a 25 dias
Imunoensaio de Triagem: 4ª Geração
O ensaio de 4 ª geração detecta simultaneamente o antígeno p 24 e anticorpos específicos anti HIV 
O componente de detecção de anticorpo tem o formato de sanduíche portanto detecta todas as classes de imunoglobulinas contra proteínas recombinantes ou peptídeos sintéticos derivados das glicoproteínas gp41 e gp120/160
Em média a janela diagnóstica dos ensaios de quarta geração é de aproximadamente 15 dias dependendo do ensaio utilizado
Testes Rápidos (TR)
Exemplos de TR para HIV :
(A) imunocromatografia ou fluxo lateral
(B) imunocromatografia de dupla migração ─ DPP
(C) imunoconcentraçãoFigura 1Exemplo de TR reagente para HIV
(D) fase sólida
Teste Complementar: Western Blot (WB)
O WB é uma reação que utiliza como fase sólida uma membrana de nitrocelulose que possui fixados antígenos do HIV distribuídos de acordo com seu peso molecular
Para ser considerado REAGENTE, é necessário reatividade (presença de bandas), em pelo menos duas das seguintes proteínas: p24, gp41 e/ou gp120/gp160!!!
Detecção Direta do HIV: PCR
1. HIV qualitativo (PCR)
2. HIV quantitativo (Real Time PCR) = carga viral
· Carga viral <10 000 cópias de RNA por ml: baixo risco de progressão ou de piora da doença
· Carga viral 10 000 - 100 000 cópias de RNA por ml: risco moderado de progressão ou de piora da doença
· Carga viral > 100 000 cópias de RNA por ml: alto risco de progressão ou de piora da doença
Contagem de células CD4+ em sangue periférico
As células mais atingidas são os linfócitos T CD4+. E é alterando o DNA dessa célula que o HIV faz cópias de si mesmo. Depois de se multiplicar, rompe os linfócitos em busca de outros para continuar a infecção
· > 500 células/mm3: estágio da infecção pelo HIV com baixo risco de doença.
· 200 - 500 células/mm3: estágio caracterizado por surgimento de sinais e sintomas menores ou alterações constitucionais. Risco moderado de desenvolvimento de doenças oportunistas 
· 50 - 200 células/mm3: estágio com alta probabilidade de surgimento de doenças oportunistas
· < 50 células/mm3: estágio com grave comprometimento de resposta imunitária.
· Imunoensaio de 4 ª geração como teste de triagem e um teste molecular como teste complementar para amostras reagentes na triagem. 
· O IE de triagem apesar de ser de 4 ª geração é menos sensível do que o teste molecular confirmatório. Portanto amostras reagentes no teste de triagem e positivas no teste molecular representam infecção pelo HIV. 
· No entanto uma amostra reagente no IE de triagem, mas negativa no teste molecular, pode representar infecção em um indivíduo com Carga Viral abaixo do limite de detecção. 
· Permite o diagnóstico mais precoce da infecção pelo HIV. 
· Vantagem: permite o diagnóstico mais precoce da infecção pelo HIV
Vacina
Por que é tão difícil criarmos?
As vacinas imitam infecções naturais, nesse período o corpo produz anticorpos que matam o vírus. 
Porém, diferente de outras infecções, o HIV não estimula esse tipo de resposta o nosso sistema imune, genericamente falando, fica “cego” ao vírus e não produz resposta imune efetiva
Falta de bons modelos animais para estudarmos as mudanças e mutações constantes do HIV.
Porém: HVTN 702· Maior teste clínico para avaliar a eficácia de uma Vacina Preventiva contra o HIV
· Número de voluntários: 5.400 homens e mulheres (18 - 35 anos)
· Início do Teste: Novembro 2016 | Fim do Teste: Julho 2021
· Duas Vacinas em Teste: ALVAC HIV (canarypox vector based vaccine) e uma vacina formada por dois componentes da glicoproteína gp120
Artigo demostrando que o DNA do HIV pode ser eliminado do genoma de modelos animais através da CRISPR-Cas 9 e, além disso acabar com a infecção. Os pesquisadores inativaram geneticamente o HIV em ratos transgênicos reduzindo a expressão de RNA viral dos genes em 60% a 95%. O próximo passo será repetir esse estudo em primatas.
CRISPR em Embriões Humanos: 
A partir da FIV, os cientistas selecionaram os melhores embriões para ter o gene CCR5 parcialmente desativado!