Aulas práticas de imuno - sorologia e imunodifusão

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Aulas Práticas de Imunologia 
Diagnóstico: 
• Direto: 
o Coletar amostra de animal com sintomas clínicos, onde haverá antígeno, ácido nucleico do agente 
infeccioso. 
 
• Indireto: 
o Anticorpos = imunoglobulinas. 
▪ Soro: parte líquida, grande quantidade de IgG. Tubos sem anticoagulante; Testes sorológicos – 
pega Igs; 
▪ Plasma: EDTA, tubos com anticoagulante, exige centrifugação. 
Leucócitos – capa flogística, ou seja, concentrado de leucócitos. 
 
Diagnóstico direto: fecha diagnóstico. 
Diagnóstico com soro → sorologia. 
 
Exemplo - cinomose canina. 
• SC: secreção, pústulas, diarreias, SNC; 
• Período inicial: replicação intensa (IgM) = diagnóstico diferencial; 
• 3-4 semanas: detecta coisas diferentes ou não; 
• Sorologia pareada: duas amostras coletadas no intervalo de 3-4 semanas (pelo menos); 
• Soroconversão: os títulos de Igs subiram ≥ 4x. sugere que o animal teve a doença. 
 
IMUNODIFUSÃO EM ÁGAR GEL (IDGA) 
Usados para diagnóstico de: 
• Anemia infecciosa equina → animal fica infectado para sempre = é sacrificado; 
• Leucose bovina; 
• Brucelose; 
• Língua azul. 
 
Como é realizado: 
• Laboratórios credenciados e autorizados pelo ministério; 
• Queda na condição corporal, as vezes demora um pouco; 
• Transmissão – insetos hematófagos, cirurgias sem material esterilizado, agulhas, palpação retal = via sangue. 
 
Imunodifusão: 
• Faz orifícios no ágar (coloca proteínas do vírus) e o antígenos e anticorpos migram radialmente; 
• Onde antígeno encontra anticorpo e forma um precipitado de complexos imunes. 
 
Imunossupressão em gel ágar: tem antígeno e ve se o animal tem anticorpo. 
• Usa-se para verificar presença de anticorpos específicos; 
• Método qualitativo; 
• Possui boa especificidade, porém, tem falhas de sensibilidade; 
• Facil realização; 
• A precipitação dos complexos antígeno-anticorpo, permite a visualização do resultado; 
• Falso negativo = menos anticorpos. 
 
Materiais: 
• Placas ou lâminas; 
• Gel de ágar; 
• Solução para dissolver; 
• Antígeno mais purificado possível; 
• Um anticorpo conhecido; 
• Testa soro: 
o Pode usar plasma = coagula, mas possui anticorpos. 
 
Execução: 
1. Prepara a solução (1% em solução); 
2. Aquece e dissolve; 
3. Coloca na placa; 
4. Espera solidificar; 
5. Fazer orifícios com a roseta; 
6. Adiciona reagentes; 
7. Encuba durante 48-72 horas; 
8. Leitura. 
 
Linha inespecífica = antígenos não tão purificados, falha na especificidade. 
Só é postivo quando tem identidade = continuidade. 
Proteínas imunogênicas = IG = provocam resposta. 
Cria anticorpos contra anticorpos de outra espécie.