RELATÓRIO AULA PRATICA 3 Imunodifusão radial

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Universidade Federal do Triângulo Mineiro 
 Curso de Biomedicina 
Disciplina de Imunologia Aplicada 
 
 
 
 
 
 
 
Relatório de aula prática 
P03: Imunodifusão Radial 
Prof.: Amanda Pifano Neto Quintal 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Carolliny Marjorie Ap. de Jesus 
Dylmadson Iago Brito de Queiroz 
Francielle Cordeiro dos Santos 
Karolayne Piedade Camargos 
Rafaela Moreira da Silva 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Uberaba 
 2022/1 
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Sumário 
1) Introdução ......................................................................................................................... 3 
2) Objetivos: .......................................................................................................................... 4 
3) Materiais e métodos: ........................................................................................................ 5 
3.1. Materiais: .............................................................................................................................................. 5 
3.2 Métodos: ................................................................................................................................................ 6 
4) Conclusão: ....................................................................................................................... 11 
5- Referências ...................................................................................................................... 12 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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1) INTRODUÇÃO 
 
Imunodifusão Radial: 
 
Trata-se de uma técnica de difusão de antígeno e anticorpo seguida de 
precipitação. Ao se adicionar um antígeno solúvel com um anticorpo também 
solúvel forma-se um agregado antígeno-anticorpo que é insolúvel e sofre 
precipitação. 
 
a) Imunodifusão Dupla de Ouchterlony: 
 
 Utiliza como meio de difusão o gel de agarose. Antígeno e anticorpo 
se difundem em todas as direções. Ao se encontrarem forma-se uma 
linha de precipitação. É de grande utilidade na identificação de 
microrganismos patogênicos e autoanticorpos em doenças auto-imunes. 
Porém somente pode ser utilizada em reações antígeno-anticorpo que 
formem precipitado, e requer grande tempo para que ocorra a difusão e 
precipitação. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
b) Imunodifusão Radial de Mancini: 
 
 Método realizado em gel de agarose com anti-soros específicos já 
incorporados ao gel. As amostras são aplicadas em “poços” circulares já 
feitas no gel. À medida que a difusão ocorre, a reação antígeno-anticorpo 
forma anéis de precipitação e a concentração de antígeno é proporcional 
ao raio do anel de precipitação. 
Ao medir o diâmetro do círculo de precipitado, utiliza-se com uma tabela 
contendo os valores de diâmetro relacionados com a concentração de 
antígeno. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
https://pt.slideshare.net/rwportela1/reaes-de-precipitacao 
fcav.unesp.br 
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2) Objetivos: 
 
 Com o objetivo de demonstrar a técnica de Imunodifusão radial e a 
aplicação dos conceitos adquiridos nas aulas teóricas, foram realizadas duas aulas 
práticas, sendo elas denominadas respectivamente: aplicação da técnica e a leitura 
da lâmina. 
 
Primeira aula prática: Teve como principal objetivo a explicação da parte 
teórica da pratica, métodos de realização sendo eles simples ou duplo, manuseio 
do gel de agarose e das diluições contendo antígenos e anticorpos, bem como 
aplicação dos mesmos na lâmina contendo o gel de agarose. 
 
Segunda aula prática: Teve como objetivo a leitura da lâmina e identificação 
da zona de equivalência para cada diluição aplicada. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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3) Materiais e métodos: 
3.1. Materiais: 
 
 Prática 1: Na bancada: luvas, pipeta, ponteiras, lâmina com gel de agarose 
puro em uma placa de Petri com algodão, esquema para perfuração do gel, soro 
contendo anticorpos de albumina, ponteira para perfurar o gel e um palito para a 
remoção do gel excedente que foi perfurado, diluições seriadas contendo os 
antígenos anti-albumina nas concentrações 1 a 50 mg/ml. 
 
 
Pratica 2: Placa de Petri com o algodão e a lâmina para leitura e interpretação. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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3.2 Métodos: 
 
Prática 1:Imunodifusão Radial Dupla 
 Para realizar o procedimento de Imunodifusão radial dupla, foi feito 
previamente o preparo do gel de agarose e aplicação do mesmo em uma lâmina 
de vidro, também a diluição seriada do antígeno de albumina e a preparação do 
anticorpo anti- albumina, pelo assistente do laboratório de imunologia. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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A professora Amanda fez uma introdução da técnica com exemplos no quadro, logo 
em seguida fomos instruídos a perfurar o gel seguindo o esquema de perfuração e 
remoção do gel excedente. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Identificar o ponto de inicio e o sentido que seria feita a aplicação das diluições 
contendo o anticorpo, marcando também onde houvesse extravasamento da 
amostra com antígenos anti-albumina, tivemos a oportunidade de realizar 
novamente a aplicação na segunda metade do gel, para que fosse feito sem 
extravasamentos para que obtivéssemos um resultado mais visível possível, sem 
contaminação das áreas próximas. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Início 
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Antes de iniciarmos fomos instruídos a como 
usar corretamente a pipeta, fazendo 
pipetagens com água pura. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Representação esquemática da aplicação 
do antígeno e anticorpo no gel. Indicando 
início, sentido e onde tivemos 
extravasamento e contaminação do gel. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Prática 2: Leitura e Interpretação 
Após aguardar o tempo necessário de aproximadamente 48 horas em temperatura 
ambiente, mas no nosso caso foram 72 horas o que não interferiu na visualização 
do resultado. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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No teste , houve a formação da linha de precipitação, mas não tivemos 
uma boa visualização devido o extravasamento e contaminação dos 
poços vizinhos. 
No teste 2 tivemos uma ótima visualização da linha de precipitação, que 
é onde se encontra a zona de equivalência. 
A intensidade que é formada a linha é diretamente proporcional a 
concentração de antígenos na amostra, sendo claramente percebido que 
na primeira amostra (1mg/dl) e na segunda amostra (5mg/dl) a linha é 
mais evidente quando comparada aos demais poços do gel onde foi 
aplicado as outras concentrações. 
 
 
 
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4) Conclusão: 
 
 Podemos concluir que essa técnica não se trata de uma técnica 
quantitativa para anticorpos e também a diferenciar a técnica de 
precipitação e aglutinação. Entendemos agora com mais clareza o que é 
a linha de precipitação que também chamamos de zona de equivalência, 
após a migração dos anticorpos em todas as direções do gel, observamos 
que a formação desta linha vai depender da concentração e da avidez 
dos anticorpos da amostra que está sendo analisada. 
Essa aula pratica contribuiu significativamente para o entendimento do 
gráfico e conceitos dado em aula, onde agora sabemos que na zona de 
excesso de antígeno é porque a amostra de soro contendo antígenos esta 
muito concentrada em relação ao anticorpo, então esta precisa ser 
diluída. A zona de excesso de anticorpo é quando há muito anticorpo para 
a quantidade de antígenos, também sendo necessário o ajuste com a 
diluição e por fim a zona de equivalência onde há um equilibro na 
concentração do antígeno e anticorpo, formando a linha de precipitação 
que observamos em nossa lâmina. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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5- Referências 
 
Aulas práticas e teóricas de Imunologia/ Imunodifusão radial com a professora 
Amanda. 
 
http://www.ciencianews.com.br/aulavirt/metodos.pdf 
 
https://www.fcav.unesp.br/Home/departamentos/patologia/HELIOJOSEMONTASSIER/tecnica-de-imunodifusao-v-f-set-24-17.pdf