Relatorio cientifico

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Histórico do DNA 
Algumas descobertas corridas no fim do século 19 formaram a base do que é conhecido hoje como genética. Em 1864, o monge Gregor Mendel trabalhou no cruzamento de diferentes tipos de ervilhas e identificou a transmissão de padrões definidos de herança(fatores de herança ) e também a definição de alelos. Os resultados desse trabalho determinaram as leis da hereditariedade, que foram ignorados e redescobertos após a a sua morte e os fatores de hereditariedade foram batizados de genes.Em 1869, o bioquímico suíço Johann Friedich Miescher, pesquisando sobre células brancas(linfócitos), encontrou no núcleo dessas células uma substância branca , ácida, rica em fósforo a qual chamou de nucleína. Somente em 1889, seu aluno Richard Altmann denominou esse substância e ácido nucleico.
Todos esses trabalhos e muitos outros chamaram a atenção para a molécula de DNA, a partir disso os esforços seriam no descobrimento de sua estrutura e comportamento da molécula. O que se sabia até o fim de 1940 era que o DNA era formado por nucleotídeos( grupo fosfato que se liga a uma desoxirribose que por sua vez se liga a uma base nitrogenada purica ou pirimidica). A disposição dessas unidades na molécula ainda era desconhecida e em 1949 Chargaff, analisando a composição dos 4 nucleotídeos em amostras de DNA verificou que a quantidade de adeninas era igual a de tíminas e a quantidade de citosinas era igual a de guaninas, isso ficou conhecido como regra de Chargaff. Alexander Todd, em 1952, demonstrou que os nucleotídeos formam no DNA uma cadeia por meio de ligações fosfodiester entre duas desoxirriboses. Esses dois trabalhos foram fundamentais para o auxílio da compreensão da estrutura tridimensional do DNA.
EM 1950, Wilkins e Rosalind Franklin com a tecnologia de raio x obtiveram boas fotografias de cristais da molécula de DNA.Watson e Crick tiveram acesso a essas fotografias e concluíram que a molécula de DNA é helicoidal(dupla hélice). A estrutura em dupla hélice elucidaria o mecanismo de duplicação da molécula de modo semiconservativo e de como a informação genética é mantida ao longo das gerações.
Ao longo do tempo forma desenvolvidas técnicas para identificar regiões específicas do DNA , amplificando regiões de interesse através da polimerase chain reaction , o que auxiliaria no diagnóstico médico e na pesquisa cientifica. Através da tecnologia de DNA recombinante foi possível o desenvolvimento de insulina humana recombinante, e o uso do PCR e da eletroforese é possível amplificar e visualizar sequencias gênicas de interesse em diagnóstico médico e cientifico(teste de paternidade, identificação de DNA bacteriano ou viral e suas variantes, identificação de cadáveres, auxilio na pericia forense, etc). Com a amplificação da regiões genicas também é possível isolar regiões especificas do genomas( por exemplo uma região com mutação) auxiliando no estudo de possíveis terapias gênicas que possam amenizar ou até mesmo curar algumas doenças genéticas hereditárias.
Objetivos do Experimento
Extração de amostra de DNA de fígado bovino. O objetivo do experimento é extrair DNA genômico de amostra de fígado bovino, além de identificar as etapas de extração na prática, compreendendo a função de cada etapa e dos reagentes.
Materiais usados:
Foram utilizados: Pipetas (P10, P100, P200, P1000), ponteiras, microtubos eppendorf de 1,5 ml , estantes para microtubos, fígado bovino em pedaços pequenos, placa de petri, bisturi e pinça, tampão de Lise e proteinase k, etanol absoluto gelado.
Equipamentos no laboratório: Banho Maria(55C ), microcentrifuga, capela de exaustão.
Método
Para a extração de DNA genômico foi utilizado o método de Satting Out. 
Adicionamos 500 uL de Buffer A à amostra de fígado triturado na placa de petri e homogeneizamos por 1 minuto. O buffer A é uma solução de Lise com proteinase K, ou se seja ocorre a degradação das proteínas sendo possível a ressuspensão das células.
Em seguida adicionamos SDS 10%, 50 uL e homogeneizamos por 1 minuto. O SDS( Sodium Duodecil Sulfato) é um detergente iônico e nessa etapa ocorre a Lise das membranas plasmáticas e nucleares.
Após essa etapa colocamos o tubo eppendorf em banho maria por 10 minutos a 56C, sendo que o aquecimento contribuirá com o processo de lise. Em seguida, após o aquecimento adicionamos 300 ul de NaCl 5M(solução de cloreto de sódio concentrada) e homogeneizamos por 1 minuto. A adição de NaCl 5M contribui para a formação de um sobrenadante, sendo a molécula de DNA menos densa do que as proteínas.
Centrifugar a amostra a 8000 rpm por 5 minutos. Transferir 400ul do sobrenadante que se formou para um tubo limpo. Ao sobrenadante, adicionar 800uL de etanol absoluto gelado e homogeneizar por inversão durante 1 minuto. O etanol não interage bem com a molécula de DNA que sofre retração formando um agregado.
Centrifuga-se a 8000 rpm por 5 minutos para obter o pellet de DNA, o sobrenadante formado é descartado. Ao pellet, adiciona-se 500ul de etanol 70% gelado e homogeneizar. Centrifuga-se novamente por 5 minutos a 8000 rpm e descartar o sobrenadante formado. O eppendorf com o pellet deve ser levado à capela de exaustão por 20 minutos.
Após a secagem adicionar 150 ul de água Milliq ao pellet e homogeneizar até obter uma solução de DNA homogênea. Para auxiliar na solubilização também foi adicionado 50ul de solução TE.
Referência bibliográficas
SNUSTAD& SIMMONS. FUNDAMENTOS DE GENÉTICA. 7 ED. RIO DE JANEIRO: GUANABARA KOOGAN , 2017
MENCK, CARLOS F. M. GENÉTICA MOLECULAR BÁSICA. ED: GUANABARA KOOGAN