Técnicas de Extração e Sequenciamento de DNA e RNA

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07/06/2023, 22:32 Avaliação I - Individual
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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:823741)
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Prova 65440480
Qtd. de Questões 10
Acertos/Erros 8/2
Nota 8,00
[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Conforme o sumário da prática, os 
ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas, que permitem que sejam isolados 
e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, 
baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a 
detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da 
expressão gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em 
cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas 
infecções e doenças. Considerando esses aspectos, o primeiro passo para a maioria das técnicas 
citadas é o isolamento e a purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do 
DNA pode ser dividido em etapas. 
Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa CORRETA:
A Na Etapa de Lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%.
B A primeira etapa é a Etapa de Ligação, em que adicionamos 250 µl de Proteinase K, 20 µl da
amostra e 20 µl do tampão de lise S.
C A segunda etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado álcool 96% no
eppendorf, homogeneizado, e 640 µl são transferidos para o tubo spin. 
D O principal composto adicionado na Etapa de Ligação é a Proteinase K.
Uma das técnicas essenciais em biologia molecular é a capacidade de sequenciar o gene de um 
organismo. Esse sequenciamento é importante, pois identifica possíveis mutações, cadeias de 
transmissão e origem da chegada do vírus a uma região específica. De acordo com as técnicas 
empregadas para o sequenciamento de DNA, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as 
falsas:
( ) Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de 
Sanger, em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese. 
( ) O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo 
adicionado à nova fita. 
( ) O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes de 
sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de sequenciamento de DNA.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A F - F - V.
B V - F - F.
C V - V - F.
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D V - F - V.
Os ciclos do PCR (reação em cadeia da polimerase) são críticos para o sucesso da técnica. Em 
torno de 20-40 ciclos são programados no termociclador, a fim de se obter milhares de cópias de 
DNA. Sobre os ciclos do PCR associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Desnaturação.
II- Anelamento.
III- Extensão.
( ) Estágio em que os primers se ligam à fita do DNA na sua sequência complementar.
( ) Estágio inicial, em que ocorre abertura da dupla fita, liberando os nucleotídeos de cada uma das 
fitas simples. Esta etapa ocorre em uma alta temperatura, em cerca de 95º C.
( ) Estágio correspondente à adição de nucleotídeos pela DNA polimerase específica, denominada 
como Taq DNA polimerase, em uma temperatura de 72º C.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A I - III - II.
B II - I - III.
C III - II - I.
D I - II - III.
O sequenciamento Shotgun, o qual é aplicado como estratégia para o sequenciamento de 
grandes sequências de nucleotídeos, especialmente genomas inteiros dos mais diversos organismos. 
Sobre o sequenciamento Shotgun, avalie as asserções a seguir e relação proposta entre elas:
I- Devido ao grande volume de informação gerado por esse procedimento, é necessário que 
programas computacionais sofisticados sejam utilizados para a determinação da sequência do 
material em estudo. 
PORQUE
II- Na técnica Shotgun, o material clonado é sequenciado diversas vezes, fornecendo uma quantidade 
de dados de cerca de 10 vezes o tamanho do material genético que está sendo estudado, assegurando 
que todos os nucleotídeos presentes no material genético sejam detectados e inseridos na sequência 
final do DNA. 
Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
B As asserções I e II são proposições falsas.
C A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
D As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
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O gráfico a seguir ilustra uma curva de amplificação da PCR em tempo real. De acordo com a 
interpretação do gráfico, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) A amostra A possui maior quantidade do gene avaliado, uma vez que possui menor Ct. 
( ) A amostra C possui maior quantidade de amostra, pois quanto maior o Ct, maior a quantidade de 
material disponível para iniciar a amplificação do gene de interesse. 
( ) A amostra B ultrapassou o Threshold após o ciclo 20, apresentando uma quantidade 
intermediária de amostra, quando comparadas às amostras A e C. 
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A V - F - V.
B V - V - F.
C F - F - V.
D V - F - F.
[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o sumário da aula prática, a hibridização é uma técnica 
que tem o princípio da complementariedade das bases nitrogenadas dos ácidos nucleicos como base 
(adenina com timina e citosina com guanina). Essa técnica consiste, de forma básica, em localizar 
sequências de interesse no genoma de quaisquer organismos, hibridizando-as ao próprio DNA da 
espécie.
Considerando a aula prática de hibridização, assinale a alternativa CORRETA:
A Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho.
B A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem o uso de scanner.
C A técnica de FISH utiliza a marcação de vários genes.
D O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem
necessidade de incubação.
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As bibliotecas de DNA e cDNA são essenciais para manter e replicar um fragmento clonado por 
tempo indeterminado. Sobre essas técnicas, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Biblioteca de cDNA.
II- Biblioteca de DNA.
III- Hibridização em colônia.
( ) Técnica que detecta os fragmentos do DNA de interesse com sondas específicas em meio de 
cultivo sólido.
( ) Clonagem de fragmentos aleatórios do DNA, permitindo a sua identificação, isolamento e 
sequenciamento do genoma. 
( ) Clonagem de mRNAs, em que cada célula/tecido pode originar uma biblioteca diferente, 
considerando o padrão de expressão gênica específico, relacionado sempre a sua função.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A III - II - I.
B I - III - II.
C II - I - III.
D I - II - III.
Para construir uma biblioteca de DNA, utiliza-se técnicas de clivagem com enzimas de restrição 
e clonagem em vetor. Com base nas etapas para construção de uma biblioteca de DNA, ordene os 
itens a seguir:
I- Fragmentos de DNA são inseridos em vetores idênticos e ligados através da DNA ligase. 
II- Clivado do DNA com uma enzima de restrição, formando centenas a milhares de fragmentos de 
DNA.
III- Inserção do vetor em células hospedeiras, produzindo a clonagem dos diferentes fragmentos. 
IV- Extrair e isolar o DNA genômico de uma célula, tecido ou até mesmo de um organismo.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A IV - II - I - III.
B I - IV - III - II.
C I - III - II - IV.
D IV - II - III - I.
O processo de transcrição reversa, é uma das técnicas mais utilizadas na área de pesquisade 
expressão gênica. Essa técnica é conhecida como RT-PCR, ou transcrição reversa, seguida por PCR. 
Com base no RT-PCR, analise as sentenças a seguir:
I- O RT-PCR avalia a expressão diferencial do mRNA, o qual será convertido em DNA 
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complementar (cDNA).
II- A enzima transcriptase reversa (RT) é responsável pela síntese de uma fita de DNA, utilizando 
como molde uma fita simples de RNA. 
III- A técnica de RT-PCR é realizada em 40 ciclos, para formação de uma quantidade adequada de 
cDNA.
Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a sentença II está correta.
B As sentenças I e III estão corretas.
C Somente a sentença III está correta.
D As sentenças I e II estão corretas.
A hibridização in situ foi elaborada com o objetivo de isolar e identificar fragmentos, através do 
anelamento entre duas fitas simples de origens distintas, sejam elas DNA ou RNA. Sobre essa 
técnica, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Northen-blotting.
II- Southern-blotting.
III- Hibridização in situ.
( ) Técnica que utiliza sondas de ácidos nucleicos, com marcação química, no local em que a 
molécula de interesse deve ser encontrada (RNA dentro da célula, DNA específico em cromossomos). 
( ) Técnica que avalia padrões de sequências de nucleotídeos de genes do DNA e utiliza sondas de 
DNA molde, os quais são marcados com radiação ou quimicamente. 
( ) Nesta técnica, o RNA mensageiro (mRNA) é utilizado a fim de buscar comparar situações 
distintas, como, por exemplo, utilizar amostras controle como padrão para expressão do gene de 
interesse e, assim, comparar com a amostra de interesse. 
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A II - I - III.
B III - II - I.
C I - III - II.
D I - II - III.
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