Avaliação I - Individual

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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:823741)
Peso da Avaliação 1,50
Prova 67096333
Qtd. de Questões 10
Acertos/Erros 10/0
Nota 10,00
O processo de transcrição reversa, é uma das técnicas mais utilizadas na área de pesquisa de 
expressão gênica. Essa técnica é conhecida como RT-PCR, ou transcrição reversa, seguida por PCR. 
Com base no RT-PCR, analise as sentenças a seguir:
I- O RT-PCR avalia a expressão diferencial do mRNA, o qual será convertido em DNA 
complementar (cDNA).
II- A enzima transcriptase reversa (RT) é responsável pela síntese de uma fita de DNA, utilizando 
como molde uma fita simples de RNA. 
III- A técnica de RT-PCR é realizada em 40 ciclos, para formação de uma quantidade adequada de 
cDNA.
Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a sentença III está correta.
B As sentenças I e II estão corretas.
C As sentenças I e III estão corretas.
D Somente a sentença II está correta.
A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) se refere à replicação in vitro de um 
fragmento de DNA. Sobre o PCR, assinale a alternativa CORRETA:
A A enzima DNA polimerase humana é uma das principais responsáveis pelo sucesso da técnica
in vitro.
B O processo do PCR não necessita da utilização de nucleotídeos.
C O processo de replicação in vitro, depende do uso de primers (oligonucleotídeos sintéticos), com
sequências de 18 a 22 nucleotídeos, que seja complementar ao gene de interesse.
D A ligação dos primers à fita de DNA é denominado como desnaturação.
O processo de replicação do DNA é relativamente simples, envolvendo diversas enzimas para 
que a síntese de uma nova fita de DNA seja realizada. Com base nas enzimas envolvidas no processo 
de replicação in vivo, analise as sentenças a seguir:
I- A enzima DNA polimerase realiza a adição de novos nucleotídeos à nova fita do DNA que está 
sendo sintetizada, podendo atuar de modo independente do sentido da fita (3'-5' ou 5'-3'), já que não 
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necessitam de iniciadores.
II- As primases são enzimas responsáveis por adicionar primers (iniciadores) à fita de DNA que está 
sendo sintetizada, pois a DNA polimerase necessita de uma extremidade 3' disponível para a inserção 
do novo nucleotídeo. 
III- As enzimas, DNA girase e helicase, são as responsáveis por abrir a dupla fita de DNA, e cortar as 
pontes de hidrogênio entre os nucleotídeos, permitindo, assim, a separação da fita e síntese de uma 
nova fita.
Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a sentença III está correta.
B As sentenças II e III estão corretas.
C Somente a sentença II está correta.
D As sentenças I e II estão corretas.
Com o desenvolvimento das técnicas de clonagem de DNA, tornou-se possível a construção de 
bibliotecas de DNA e cDNA. Sobre as bibliotecas, assinale a alternativa CORRETA:
A A biblioteca de cDNA contém éxons e íntrons, já que são clonados todos os fragmentos de
DNA, incluindo o não codificante.
B Uma biblioteca de DNA contém somente os íntrons de uma molécula de DNA, sendo
extremamente específico para identificar o conteúdo expresso em uma célula ou tecido.
C As bibliotecas de mRNA são originadas a partir da fragmentação do DNA com enzimas de
restrição e, posteriormente, da clonagem do DNA.
D As bibliotecas de cDNA contêm somente os éxons de uma molécula de mRNA, que
posteriormente é convertido em cDNA pela técnica de transcrição reversa.
A hibridização in situ foi elaborada com o objetivo de isolar e identificar fragmentos, através do 
anelamento entre duas fitas simples de origens distintas, sejam elas DNA ou RNA. Sobre essa 
técnica, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Northen-blotting.
II- Southern-blotting.
III- Hibridização in situ.
( ) Técnica que utiliza sondas de ácidos nucleicos, com marcação química, no local em que a 
molécula de interesse deve ser encontrada (RNA dentro da célula, DNA específico em cromossomos). 
( ) Técnica que avalia padrões de sequências de nucleotídeos de genes do DNA e utiliza sondas de 
DNA molde, os quais são marcados com radiação ou quimicamente. 
( ) Nesta técnica, o RNA mensageiro (mRNA) é utilizado a fim de buscar comparar situações 
distintas, como, por exemplo, utilizar amostras controle como padrão para expressão do gene de 
interesse e, assim, comparar com a amostra de interesse. 
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A I - III - II.
B III - II - I.
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C II - I - III.
D I - II - III.
[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Conforme o sumário da prática, os 
ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas, que permitem que sejam isolados 
e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, 
baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a 
detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da 
expressão gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em 
cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas 
infecções e doenças. Considerando esses aspectos, o primeiro passo para a maioria das técnicas 
citadas é o isolamento e a purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do 
DNA pode ser dividido em etapas. 
Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa CORRETA:
A Na Etapa de Lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%.
B O principal composto adicionado na Etapa de Ligação é a Proteinase K.
C A primeira etapa é a Etapa de Ligação, em que adicionamos 250 µl de Proteinase K, 20 µl da
amostra e 20 µl do tampão de lise S.
D A segunda etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado álcool 96% no
eppendorf, homogeneizado, e 640 µl são transferidos para o tubo spin. 
"A PCR pode ser precedida por uma reação de transcrição reversa (RT) para a obtenção de cDNA a 
partir de RNA (RT-PCR), representando, por exemplo, uma possibilidade de análise de expressão 
gênica em células ou tecidos" (SANTOS, 2004, s.p.). Sobre os componentes essenciais para a 
realização da técnica de PCR e RT-PCR, analise as sentenças a seguir:
I- Para o processo de PCR convencional, utiliza-se a fita molde de DNA, os nucleotídeos ou dNTPs, 
os primers e a Taq DNA polimerase.
II- Para o processo de RT-PCR, é utilizada uma enzima denominada como termoestável, como a Taq 
DNA polimerase.
III- Para o processo de RT-PCR, utiliza-se a fita molde de mRNA, os nucleotídeos ou dNTPs, primers 
oligodT e enzima transcriptase reversa.
Assinale a alternativa CORRETA:
Fonte: SANTOS, Carlos Ferreira dos et al. Transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase: 
princípios e aplicações em odontologia. J. Appl. Oral Sci., v. 12, n. 1, p.1-11, 2004.
A As sentenças II e III estão corretas.
B As sentenças I e II estão corretas.
C As sentenças I e III estão corretas.
D Somente a sentença I está correta.
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A transcrição reversa é uma reação que ocorre pela ação da enzima transcriptase reversa ou RT. Essa 
enzima é uma DNA polimerase dependente de RNA, ou seja, ela é capaz de sintetizar uma fita de 
DNA utilizando como molde a fita simples de RNA. Sua descoberta se deu a partir da observação de 
que, quando os retrovírus, cujo material genético é um RNA, infectam um hospedeiro, o RNA viral é 
convertido em DNA. Sobre a RT-PCR, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
I- Para o processo de transcrição reversa são necessários Oligonucleotídeos sintéticos, os quatro 
dNTPs, a amostra de RNA e os cofatores enzimáticos. Ao invés da Taq DNA polimerase, essa técnica 
utiliza a enzima transcriptase reversa.
PORQUE
II- O objetivo final da técnica é originar o DNA complementar ou cDNA, que é formado por essa 
enzima.
Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
B As asserções I e II são proposições falsas.
C As asserções I e II sãoproposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
D A asserção I é uma proposição verdadeira, mas a II é uma proposição falsa.
O qPCR (PCR em tempo real) utiliza corantes fluorescentes ou sondas específicas, que emitem 
fluorescência quando se encontram ligados ou intercalados à fita de DNA no meio de reação da PCR. 
Considerando esse fator, a fluorescência, é proporcional à quantidade de material disponível para 
iniciar a amplificação. Sobre os parâmetros para quantificação do qPCR, avalie as asserções a seguir 
e a relação proposta entre elas:
I- O threshold, também conhecido como linha de corte, demonstra o momento em que a fluorescência 
apresentada está livre de ruídos, sendo essencialmente a representação da amplificação da amostra 
teste.
PORQUE
II- O equipamento é capaz de determinar em que momento a fluorescência detectada é proveniente 
apenas das amostras que estão sendo amplificadas e, assim, determinar a linha de corte.
Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
B As asserções I e II são proposições falsas.
C A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
D As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
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[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo o sumário da aula prática, as 
amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e 
armazenadas em tubos, ambos “livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse 
– nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ºC ou - 80 ºC). Todos os procedimentos 
devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de 
nucleases nos fluidos corporais das mãos. De acordo com o processo de extração de DNA e RNA 
identificado na prática, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Etapa de Lise.
II- Etapa de Ligação.
III- Etapa de Lavagem.
IV- Etapa de Eluição.
( ) Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de 
sangue no mesmo tubo e, por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e 
homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
( ) Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, 
pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. 
( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo 
tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue 
novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 µl do 
tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo 
de coleta e centrifugue novamente.
( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo 
tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e 
centrifugue a amostra.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A I - II - IV - III.
B IV - III - II - I.
C I - II - III - IV.
D II - III - IV - I.
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