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Prova Impressa GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:823741) Peso da Avaliação 1,50 Prova 65698274 Qtd. de Questões 10 Acertos/Erros 9/1 Nota 9,00 Uma das técnicas essenciais em biologia molecular é a capacidade de sequenciar o gene de um organismo. Esse sequenciamento é importante, pois identifica possíveis mutações, cadeias de transmissão e origem da chegada do vírus a uma região específica. De acordo com as técnicas empregadas para o sequenciamento de DNA, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas: ( ) Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de Sanger, em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese. ( ) O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita. ( ) O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes de sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de sequenciamento de DNA. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A V - F - F. B V - V - F. C F - F - V. D V - F - V. Para construir uma biblioteca de DNA, utiliza-se técnicas de clivagem com enzimas de restrição e clonagem em vetor. Com base nas etapas para construção de uma biblioteca de DNA, ordene os itens a seguir: I- Fragmentos de DNA são inseridos em vetores idênticos e ligados através da DNA ligase. II- Clivado do DNA com uma enzima de restrição, formando centenas a milhares de fragmentos de DNA. III- Inserção do vetor em células hospedeiras, produzindo a clonagem dos diferentes fragmentos. IV- Extrair e isolar o DNA genômico de uma célula, tecido ou até mesmo de um organismo. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A IV - II - III - I. B I - IV - III - II. C IV - II - I - III. VOLTAR A+ Alterar modo de visualização 1 2 D I - III - II - IV. A descoberta da estrutura do DNA, por James Watson, Francis Crick, Maurice Wilkins e Rosalind Franklin, em 1950, possibilitou o entendimento a respeito da replicação e transmissão da informação genética de uma célula à outra. Sobre o DNA, assinale a alternativa CORRETA: A O DNA é composto por cinco nucleotídeos, adenina, uracila, timina, guanina e citosina. B O DNA é uma estrutura em fita simples, composta pelos nucleotídeos adenina, timina, citosina e guanina. C O DNA é formado por duas fitas que não se complementam entre si. D O DNA é uma estrutura em dupla hélice, composta pela pentose, denominada desoxirribose, os nucleotídeos, adenina, timina, citocina e guanina, e fosfato. O gráfico a seguir ilustra uma curva de amplificação da PCR em tempo real. De acordo com a interpretação do gráfico, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas: ( ) A amostra A possui maior quantidade do gene avaliado, uma vez que possui menor Ct. ( ) A amostra C possui maior quantidade de amostra, pois quanto maior o Ct, maior a quantidade de material disponível para iniciar a amplificação do gene de interesse. ( ) A amostra B ultrapassou o Threshold após o ciclo 20, apresentando uma quantidade intermediária de amostra, quando comparadas às amostras A e C. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A F - F - V. B V - F - V. C V - F - F. D V - V - F. 3 4 [Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o sumário da aula prática, a hibridização é uma técnica que tem o princípio da complementariedade das bases nitrogenadas dos ácidos nucleicos como base (adenina com timina e citosina com guanina). Essa técnica consiste, de forma básica, em localizar sequências de interesse no genoma de quaisquer organismos, hibridizando-as ao próprio DNA da espécie. Considerando a aula prática de hibridização, assinale a alternativa CORRETA: A O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem necessidade de incubação. B Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho. C A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem o uso de scanner. D A técnica de FISH utiliza a marcação de vários genes. O processo de transcrição reversa, é uma das técnicas mais utilizadas na área de pesquisa de expressão gênica. Essa técnica é conhecida como RT-PCR, ou transcrição reversa, seguida por PCR. Com base no RT-PCR, analise as sentenças a seguir: I- O RT-PCR avalia a expressão diferencial do mRNA, o qual será convertido em DNA complementar (cDNA). II- A enzima transcriptase reversa (RT) é responsável pela síntese de uma fita de DNA, utilizando como molde uma fita simples de RNA. III- A técnica de RT-PCR é realizada em 40 ciclos, para formação de uma quantidade adequada de cDNA. Assinale a alternativa CORRETA: A Somente a sentença III está correta. B As sentenças I e III estão corretas. C Somente a sentença II está correta. D As sentenças I e II estão corretas. As bibliotecas de DNA e cDNA são essenciais para manter e replicar um fragmento clonado por tempo indeterminado. Sobre essas técnicas, associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Biblioteca de cDNA. II- Biblioteca de DNA. III- Hibridização em colônia. ( ) Técnica que detecta os fragmentos do DNA de interesse com sondas específicas em meio de cultivo sólido. ( ) Clonagem de fragmentos aleatórios do DNA, permitindo a sua identificação, isolamento e sequenciamento do genoma. ( ) Clonagem de mRNAs, em que cada célula/tecido pode originar uma biblioteca diferente, 5 6 7 considerando o padrão de expressão gênica específico, relacionado sempre a sua função. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A I - II - III. B III - II - I. C I - III - II. D II - I - III. Através da técnica de eletroforese, ocorre a separação de moléculas em populações de tamanhos semelhantes, as quais são visualizadas como bandas no gel através de marcadores específicos. Sobre os marcadores para técnica de eletroforese em gel, assinale a alternativa CORRETA: A O corante ideal para eletroforese de DNA e RNA é aquele que não se liga ao DNA ou ao RNA, ficando somente na solução tampão da técnica. B O marcador ideal é o brometo de etídio, um corante fluorescente, que se liga ao DNA ou RNA e possibilita a sua visualização através de luz ultravioleta (UV). C O corante mais utilizado para marcação de DNA é o azul de brometo. D O marcador ideal para a técnica de eletroforese em gel será aquele capaz de separar as bandas de DNA em diferentes tons de cores. [Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Conforme o sumário da prática, os ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas, que permitem que sejam isolados e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da expressão gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas infecções e doenças. Considerando esses aspectos, o primeiro passo para a maioria das técnicas citadas é o isolamento e a purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do DNA pode ser dividido em etapas. Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa CORRETA: A Na Etapa de Lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%. B O principal composto adicionado na Etapa de Ligação é a Proteinase K. C A primeira etapa é a Etapa de Ligação, em que adicionamos 250 µl de Proteinase K, 20 µl da amostra e 20 µl do tampão de lise S. D A segunda etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado álcool 96% no eppendorf, homogeneizado, e 640 µl são transferidos para o tubo spin. 8 9 O sequenciamento Shotgun, o qual é aplicado como estratégia para o sequenciamentode grandes sequências de nucleotídeos, especialmente genomas inteiros dos mais diversos organismos. Sobre o sequenciamento Shotgun, avalie as asserções a seguir e relação proposta entre elas: I- Devido ao grande volume de informação gerado por esse procedimento, é necessário que programas computacionais sofisticados sejam utilizados para a determinação da sequência do material em estudo. PORQUE II- Na técnica Shotgun, o material clonado é sequenciado diversas vezes, fornecendo uma quantidade de dados de cerca de 10 vezes o tamanho do material genético que está sendo estudado, assegurando que todos os nucleotídeos presentes no material genético sejam detectados e inseridos na sequência final do DNA. Assinale a alternativa CORRETA: A As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I. B As asserções I e II são proposições falsas. C As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I. D A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira. 10 Imprimir
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