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Microbiologia Veterinária 2 Introdução ➝ Sinais Clínicos: Efeitos das alterações do organismo que são observadas por outros indivíduos. Ex: Febre, inapetência¹, vômito, alteração da locomoção. ¹ sem apetite ➝ Período de incubação: Tempo que decorre desde a exposição ao patógeno até o aparecimento dos sinais clínicos. ➝ Infecção: Invasão de um organismo (hospedeiro) por outro. Pode apresentar ou não, a alteração das funções do corpo do hospedeiro (doença). ➝ Epidemiologia: ➝ Agente: 1. Infectividade: Capacidade do agente de se instalar no hospedeiro. 2. Virulência: Capacidade do agente de causar sintomas no hospedeiro. (doença) 3. Patogenicidade: Particularidade de um agente de conhecida virulência, de causar sintomas em um conjunto de hospedeiros, em um conjunto de condições ambientais. Célula Bacteriana ➝ Microrganismos com estrutura unicelular simples; ➝ Morfologia diferenciada conforme o gênero; ➝ De acordo com o meio, uma cepa² pode variar na forma e tamanho. ➝ Crescem de forma: - filamentosa: estrutura fina e alongada - agrupadas - em cadeias - micélios ² descendentes com semelhanças morfológicas de um ancestral comum. Morfologia Bacteriana ➝ Bastonetes: forma cilíndrica. Geralmente retos, variam de comprimento e largura. ➝ Víbrios: forma cilíndrica curvada (vírgula ou “S”). AGEN HOSPED AMBIE ➝ Espiroquetas: forma de espiral. ➝ Cocos: forma esférica. Possui diversos arranjos (aglomerados, cadeias, pares, cúbicos). ➝ Micélios: conjunto de hifas emaranhadas de um fungo. Podem permanecer em filamentos ou fragmentar-se. Estrutura Bacteriana Bactéria Gram positiva e Bactéria Gram negativa Meios Bacteriológicos ➝ Cultivo de microorganismos heterotróficos³. Utilizam certas matérias- primas, como: peptonas, extratos de carne e levedura. - Meio sólido: Ágar➝ agente solidificante. - Meio líquido: sem Ágar. - Meios enriquecidos: adição de sangue, soro ou extratos de tecidos animais ou vegetais ao caldo/ágar nutritivos. Permite o crescimento de heterotróficos fastidiosos⁴. -Meios seletivos: adição de substâncias químicas específicas ao ágar nutritivo. Previne o crescimento de um grupo de bactérias, sem intervir em outras. ³microrganismos que conseguem seu alimento a partir de seres vivos, causando-lhes doenças. ⁴microrganismos que necessitam de nutrientes específicos, como vitaminas, não se desenvolvendo bem em meios comuns. Crescimento Bacteriano ➝ Reprodução por Fissão Binária, onde uma célula se divide, formando duas. ➝ Tempo de geração: tempo necessário para que uma célula se divida, ou para que a população duplique. -Eschericha coli = 15 a 20 minutos -Mycobacterium bovis = algumas semanas Fases do Crescimento a- Fase de latência: Durante este período, pode não ocorrer multiplicação celular, mas verifica-se a síntese de novas enzimas que são necessárias à síntese de compostos essenciais ao crescimento. Pode ter uma duração extensa quando o meio contém um nutriente difícil de ser metabolizado. b- Fase exponencial: As células sofrem divisão e o seu número duplica após um determinado intervalo de tempo. Nessa fase todos os nutrientes estão presentes em excesso. Existe uma taxa de crescimento máxima, que depende do potencial genético do microrganismo, da composição do meio de cultura e das condições de crescimento (temperatura, pH, disponibilidade de água, etc.). c- Fase Estacionária: A velocidade de crescimento dos microrganismos diminui até atingir a fase em que o número de novos microrganismos é igual ao número de microrganismos que morrem. As causas dessa parada de crescimento podem ser devido ao acúmulo de metabólitos tóxicos, o esgotamento de nutrientes e o esgotamento de O2. d- Fase de morte: Ocorre a perda irreversível da capacidade de divisão celular (morte celular). A quantidade de microrganismos que morrem torna-se progressivamente superior àquela dos que surgem. Temperatura Bacteriana ➝ Bactérias psicrófilas: sua temperatura ótima de crescimento situa-se entre 15° C a 20° C (mas são capazes de crescer a 0° C ou menos). ➝ Bactérias mesófilas: crescem melhor numa faixa de 25 a 40° C. ➝ Bactérias termófilas: crescem melhor a temperaturas de 45 a 60° C. ➝ Bactérias psicrotróficas: são capazes de crescer a 0° C ou menos, embora sua temperatura ótima de crescimento seja entre 25° C a 40° C (mesófilas). Exigências Atmosféricas ➝ Bactérias aeróbias: crescem na presença de oxigênio livre. ➝ Bactérias anaeróbias: crescem na ausência de oxigênio livre. O oxigênio é tóxico para elas. Ex: bactéria causadora do tétano ( Clostridium tetani). Recomenda-se passar água oxigenada. ➝ Bactérias anaeróbias facultativas: crescem tanto na presença como na ausência do oxigênio livre. Ex: Escherichia coli. ➝ Bactérias microaerófilas: crescem na presença de quantidades pequenas de oxigênio livre. Acidez e Alcalinidade (ph) ➝ O pH ótimo de crescimento da maioria das bactérias localiza-se entre 6,5 e 7,5. ➝ Variações mínimas e máximas estão entre pH 4 e pH 9. Diagnóstico laboratorial ➝ Meios de cultivo para Aeróbias (maioria): Ágar Sangue + Ágar Mac Conckey ➝ Meio de cultivo para Anaeróbias: Ágar Sangue - Amostras com mais chances de ocorrer: Fístulas drenantes: conexão entre um órgão ou um vaso sanguíneo com outra estrutura que normalmente não estão conectados. Abscessos: acúmulo de pus que se forma no interior dos tecidos do corpo. Efusão pleural: acumulação anormal de líquido na cavidade pleural. Piometra: infecção bacteriana no útero, devido a um estímulo hormonal prolongado. Osteomielite: inflamação do osso causada por infecção por bactérias, fungos ou micobactérias, em especial o Staphylococcus aureus. - Amostras com menos chances de ocorrer (flora normal): Fezes, vagina, uretra distal, cavidade oral. Staphylococcus Reino: Bacteria Filo: Firmicutes Classe: Bacilli Ordem: Bacillales Família: Micrococaceae Gênero: Staphylococcus Espécies: aureus, intermedius, schleiferi, hyicus, epidermidis Características ➝ Bactérias piogênicas¹ ➝ Pele, nasofaringe, boca, trato intestinal ➝ Cocos de 0,5 a 1,5 𝞵m de diâmetro ➝ Gram positiva ➝ Cápsula variável ➝ Esporos e flagelos ausentes ¹ Que provoca pus. Fatores de virulência ➝ São mecanismos que permitem a invasão do hospedeiro ou evasão da bactéria ao sistema imune. ➝ Relacionados aos polissacarídeos e proteínas da parede celular das bactérias: - Teste de coagulase ligada, um fator de aglomeração: se a bactéria aglomerar, possui a coagulase ligada. Proteína A: Específica dos S.aureus. Neutraliza anticorpos IgG² (região Fc). Peptidoglicano: Tem alguma atividade de endotoxina, estimulando a febre e vasodilatação excessivas, devido à produção pelas células imunitárias de citocinas como a IL-1. Ácidos teicóicos: São fibrilas como o polissacarídeo A que servem para ancorar a bactéria, impedindo-a de ser arrastada (pelo sangue, urina, suor ou outros fluidos) da sua área de colonização. Também ativam a via alternativa do complemento, diminuindo a opsonização (feita pela opsonina c3b) e estimulam os macrófagos a segregarem citocinas. Cápsula: Protege muitas estirpes³ contra fagocitose e o sistema imunitário. ² Imunoglobulina G (IgG) é um anticorpo. A região Fc realiza ativação de complemento (quando unida ao antígeno) e auxilia a fagocitose por se ligar a macrófagos. Com a ativação do complemento, há geração de quimiotaxia de neutrófilos, aumento da permeabilidade vascular e amplificação da resposta inflamatória. ³cepas. Exotoxinas: ➤ Coagulase: Enzima que coagula o sangue ao transformar o fibrinogênio em fibrina. A formaçãode coágulos em volta das bactérias dificulta o seu reconhecimento e fagocitose pelas células do sistema imunitário. Diferencial para Staphylococcus aureus. Teste de Coagulase Livre Toxinas: Hemolisinas que provocam a lise celular (destruição). ➤ Toxina alfa (𝛂): produzida pelo Staphylococcus aureus, destrói vários tipos de células. ➤ Toxina beta (𝛃): produzida apenas pelo Staphylococcus aureus, destrói vários tipos de células. ➤ Toxina delta (𝛅): produzida pela maioria dos estafilococos. Destrói, por lise celular (explosão dos conteúdos), eritrócitos e muitos outros tipos de células. ➤ Toxina gama (𝛄): Formam poros na membrana celular de leucócitos, destruindo-os por lise. Meio de cultura ágar sangue (para identificar a dispersão da toxina). ➤ Leucocidina: Citotóxica, destrói neutrófilos e macrófagos (juntamente com a toxina gama). ➤ Estafilocinase ou Fibrolisina: produzido pelo Staphylococcus aureus. Dissolve os coágulos de fibrina, o que é útil se forem tão grandes que impeçam a sua multiplicação e invasão. ➤ Catalase: protege as bactérias dos ataques com superoxidantes produzidos como defesa pelos leucócitos. A enzima catalase transforma o peróxido de oxigênio (presente na "água oxigenada" usada como asséptico) em água e oxigênio inofensivos. ➤ Lipase: todos os Staphylococcus aureus e 30% dos outros produzem- nas. Dissolvem lípidos neutralizando defesas lipídicas (que repelem água e causam desidratação das bactérias) como o sebo da pele e mucosas. ➤ Penicilinase: produzida pelas cepas resistentes ao antibiótico penicilina. Ela degrada o antibiótico. É espalhada por troca de plasmídeos contendo o gene nas trocas sexuais bacterianas. ➤ Hialuronidase: degrada a matriz extra- celular humana, composta de ácido hialurónico, facilitando a invasão dos tecidos (lesão tecidual). ➤ Enterotoxinas (A e F): produzidas em alimentos durante a fase de crescimento. São peptídeos de pequeno peso molecular. São resistentes às enzimas digestivas e ao calor, não sendo destruídas pelos processos de cocção e esterilização. Agem na parede do estômago, nos receptores do nervo vago. Características de Crescimento ➝ Meios de cultivo: Ágar sangue e Ágar salt manitol 7,5%. ⤷ S. aureus degrada o Manitol, deixando o meio amarelo ➝ Características das colônias: - 12 horas a 37ºC; - Redondas, opacas e lisas; - 1 mm de diâmetro; - Coloração branca, amarela ou acinzentada. ➝ Aeróbicas (O2) ou Anaeróbicas Bioquimismo ➝ Catalase positiva (Staphylococcus). Os estafilococos são catalase positivos, enquanto que os estreptococos são catalase negativos. A enzima catalase converte o peróxido de hidrogênio em oxigênio e água. A liberação do oxigênio se observa pela formação de bolhas. ➝ Oxidação e fermentação de carboidratos. ➝ Exsudato purulento (pus): restos de bactérias e neutrófilos
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