Slide 4

Prévia do material em texto

WBA1035_v1.0
Bioquímica clínica
Métodos analíticos em 
laboratórios de bioquímica
Métodos analíticos bioquímicos
Bloco 1
Veronica Cristina Gomes Soares
Introdução
A determinação de um analito em qualquer amostra biológica baseia-se na reação do 
analito que se deseja avaliar, qualitativa ou quantitativamente, com um ou mais 
reagentes visando a formação de um produto, que pode ser identificado visualmente ou 
medido a partir de um equipamento – o espectrofotômetro.
Figura 1 – Comprimentos, cor e nomes das ondas em nanômetros
Fonte: adaptada de Shutterstock.com. 
Espectrofotômetro
As reações produzirão uma determinada cor, que ao passar, dependendo da 
cor, será escolhido um filtro (seletor) e uma parte da luz é absorvida e a outra 
chega ao detector. Quanto menos luz chega, significa que mais concentrada 
será a solução, maior a intensidade da reação, e quanto mais chega ao 
detector, menor a intensidade da reação. 
Figura 2 – Representação esquemática do funcionamento de um 
espectrofotômetro
Fonte: adaptada de Shutterstock.com. 
Fonte de luz. Colimador. Prisma. Seletor. Solução. Detector.
Transmitância versus Absorbância
• Transmitância: refere-se à quantidade de luz que passa 
completamente através da amostra.
• Quanto maior a concentração da amostra, maior 
quantidade de luz absorvida.
• Absorbância: refere-se à quantidade de luz que foi 
absorvida pela amostra.
• Quando a absorbância de uma solução aumenta, a 
transmitância diminui. 
Relação entre transmitância versus Absorbância
Quadro 1 – Relação de transmitância e absorbância
Fonte: elaborado pela autora.
P/Po % Transmitância Absorbância
1 100 0
0,1 10 1
0,01 1 2
Métodos analíticos em 
laboratórios de bioquímica
Lei de Lambert-Beer
Bloco 2
Veronica Cristina Gomes Soares
Lei de Lambert-Beer
De acordo com a Lei de Beer, a absorbância (A) é 
diretamente proporcional à concentração (c) da amostra e 
ao caminho óptico (b) do meio absorvente.
𝑨 = 𝒆. 𝒃. 𝒄
A = Absorbância.
e = Absortividade molar (L.mol-1.cm-1).
b = Caminho óptico.
c = Concentração.
Fatores que alteram a Lei de Lambert-Beer
A Lei de Lambert-Beer determina a absortividade molar 
das substâncias, determina a concentração de soluções.
As absortividades podem variar de acordo com:
• Solvente / Reagente.
• Composição da solução.
• Temperatura.
Finalidades da Lei de Lambert-Beer
• Pode-se usar a lei de Lambert-Beer para:
• Determinar a atividade de enzimas e 
fármacos.
• Avaliar reações enzimáticas pela cinética 
quando se avalia a diferença entre o início e o 
final das reações.
Tipos de reações
• Reações de ponto final: a concentração do produto permanece 
inalterada por um período maior e estabilidade do produto.
• Exemplos: dosagens químicas ou enzimáticas de ácido úrico, 
colesterol, glicose e triglicérides.
• Reações cinéticas: são as reações em que se medem a formação 
do produto em intervalos de tempo pré-estabelecidos.
• Reação de cinética contínua: medidas contínuas da formação do 
produto.
• Reações de cinética de tempo fixo: reações que usam tempo 
fixo de incubação, formação de produtos é interrompida por 
qualquer processo. 
Métodos analíticos em 
laboratórios de bioquímica
Métodos: quimioluminescente, 
eletroquimioluminescente e PCR
Bloco 3
Veronica Cristina Gomes Soares
Método quimioluminescente
É a emissão de luz acompanhada de emissão de calor em 
consequência de uma reação química. O produto final da reação é 
a emissão de luz e não uma reação colorimétrica.
O luminol é usado como reagente para determinar a leitura do 
produto final que, em contato com o sangue, por exemplo, utiliza 
o ferro da hemoglobina como catalisador para a reação de 
liberação de luz.
Ex.: laboratórios forenses.
Método analítico por 
eletroquimioluminescência
A Eletroquimioluminescência: reações químicas que 
geram luminescência a partir de um estímulo 
elétrico.
As reações quimioluminescentes que conduzem à 
emissão de luz a partir do complexo de ruténio são 
iniciadas eletricamente, em vez de quimicamente.
Método analítico por eletroquimioluminescência
Figura 3 – Representação do método eletroquimioluminescente
Fonte: http://www.roche.com.br/portal/roche-brazil/eletroquimioluminescencia.
A B C D E
Diagnóstico no século 21
Recuperação celular: por centrifugação.
Lise celular: detergentes.
Desproteinização: uso de enzimas.
Extração de ácidos nucleicos.
Purificação de ácidos nucleicos.
Para iniciar as técnicas de diagnóstico por DNA é preciso 
isolamento e purificação do material genético.
PCR
Estudos 
epidemiológicos.
HIV. Gripes.
Microrganismos 
patológicos.
Determinação de 
contaminantes 
de água.
Análise de 
alimentos.
Doenças 
genéticas.
Identificação de 
pessoas, plantas 
e animais.
Esta técnica é utilizada para:
Teoria em Prática
Bloco 4
Veronica Cristina Gomes Soares
Aplicação da bioquímica clínica
A depressão é um quadro grave para muitos 
pacientes, e algumas teorias são relativas ao 
aumento ou diminuição de neurotransmissores. 
Os medicamentos têm sido a estratégia mais 
utilizada, mas as trocas constantes podem 
atrapalhar e levar a não melhorar o paciente.
Os exames farmacogenéticos podem 
individualizar e melhorar o tratamento.
Carla, 42 anos, há mais de dez anos tem sido tratada como 
depressão refratária. Já utilizou várias classes de 
antidepressivos, sem melhora aparente, por mais de três 
meses. Após este período, novos surtos e recaídas 
acontecem.
Quais exames poderiam ser solicitados?
Reflita sobre a seguinte situação
Norte para a resolução
Avalie os possíveis exames. Entre no site conect gene e 
avalie quais os possíveis 
exames.
Dicas do(a) Professor(a)
Bloco 5
Veronica Cristina Gomes Soares
Prezado aluno, as indicações a seguir podem estar disponíveis 
em algum dos parceiros da nossa Biblioteca Virtual (faça o login
por meio do seu AVA), e outras podem estar disponíveis em sites 
acadêmicos (como o SciELO), repositórios de instituições 
públicas, órgãos públicos, anais de eventos científicos ou 
periódicos científicos, todos acessíveis pela internet.
Isso não significa que o protagonismo da sua jornada de 
autodesenvolvimento deva mudar de foco. Reconhecemos que 
você é a autoridade máxima da sua própria vida e deve, 
portanto, assumir uma postura autônoma nos estudos e na 
construção da sua carreira profissional.
Por isso, nós o convidamos a explorar todas as possibilidades da 
nossa Biblioteca Virtual e além! Sucesso!
Leitura Fundamental
• Validação do método espectrofotométrico da 
pentoxifilina em comprimidos revestidos de 400 mg.
Referência:
HONDA, Akimi M.; MAGALHÃES, João F. Validação do 
método espectrofotométrico da pentoxifilina em 
comprimidos revestidos de 400mg. RBCF, Rev. bras. ciênc. 
farm.(Impr.), p. 165-170, 2001.
Indicação de leitura 1
Farmacogenética: princípios, aplicações e perspectivas.
Referência:
METZGER, I. F.; SOUZA-COSTA, D. C.; TANUS-SANTOS, J. E. 
Farmacogenética: princípios, aplicações e perspectivas.
Medicina, Ribeirão Preto, v. 39, n. 4, p. 515-521, 2006.
Indicação de leitura 2
Dica do(a) Professor(a)
Conectgene: 
aplicativo para 
análises genéticas.
Varsomics: 
plataforma para 
análises genéticas.
Aplicativos para IOS e Android:
BELLÉ, L. P.; SANDRI, S. Bioquímica aplicada: Reconhecimento e 
Caracterização de Biomoléculas. São Paulo: Érica, 2014.
BROWN, T. A. Bioquímica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2018. 
CAMPBELL, M. K.; FARRELL, S. O. Bioquímica. 2. ed. São Paulo: Cengage
Learning, 2015.
PINTO, W. J. Bioquímica clínica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2017.
SOUZA, D. G.; BRAGHIROLLI, D. I.; SCHNEIDER, A. P. H. Bioquímica
aplicada. Porto Alegre: SAGAH, 2018.
VOET, D. VOET, J. G. et al. Bioquímica. 4. ed. Porto Alegre: Artmed, 2013.
Referências
Bons estudos!