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Secretaria de Estado de Ciência, Tecnologia e Inovação Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro Centro de Biociências e Biotecnologia Av. Alberto Lamego, 2000 - Parque Califórnia – Campos dos Goytacazes/ RJ - 28013-602. Correio eletrônico: biomolcederj@uenf.br BIOLOGIA MOLECULAR 2021/01 INSTRUÇÕES SOBRE A APO - EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO Caros Mediadores Presenciais, A aula prática (APO-Atividade Presencial Obrigatória) da nossa disciplina será sobre as moléculas da hereditariedade. Será realizada uma EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO de morango, bananas ou cebolas. O objetivo desta APO é mostrar aos estudantes que é possível realizar essa prática simples e levá-la a estudantes do ensino médio, mesmo em escolas com pouca infraestrutura. Por esse motivo, essa prática é realizada com reagentes e materiais que podem ser encontrados na vida cotidiana. Ao final da aula, com a ajuda dos Mediadores Presenciais, os alunos terão ciência de que é possível falar sobre o DNA, e obtê-lo em uma prática, simples, divertida e de baixo custo, além de despertar o interesse dos estudantes, como futuros professores. Alguns estudantes pedirão para observar a estrutura do DNA ao microscópio, cabe aos mediadores que em microscópios óticos simples não é possível essa visualização sem processamento adicional. Será necessário explica que para tal visualização são necessárias o uso de técnicas de citogenética, onde o DNA cromossômico é extraído com protocolos refinados e ajustados para a fase celular onde é possível a visualização cromossômica, fazendo um comparativo com a simplicidade da aula prática realizada. Adicionalmente, ao explica o experimento poderão abordar os conceitos de degradação, compactação e desnaturação de DNA. O material para aula prática está detalhado no anexo deste documento e em tempo será postado na plataforma. Finalmente, o estudante deverá escrever um relatório de aula prática e entregar ao Mediador Presencial. A nota deste relatório compõe a N1, junto com a APX1 e outras duas atividades online. Assim sendo, todas as notas devem ser enviadas para a coordenação até a data da realização da AP1. Importante: Devido à pandemia, a nossa aula prática será realizada por meio de live (plataforma, Meet, Skype entre outros aplicativos) ou por meio de vídeos gravados e/ou disponibilizados pelos nossos mediadores presenciais. Qualquer dúvida estamos à disposição e obrigado por fazerem parte do nosso time. Secretaria de Estado de Ciência, Tecnologia e Inovação Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro Centro de Biociências e Biotecnologia Av. Alberto Lamego, 2000 - Parque Califórnia – Campos dos Goytacazes/ RJ - 28013-602. Correio eletrônico: biomolcederj@uenf.br Atenciosamente, Equipe da disciplina Biologia Molecular Prof. Vanildo Silveira – Coordenador Leandro Fernandes – Mediador à Distância Vinicius Mussi – Mediador à Distância Secretaria de Estado de Ciência, Tecnologia e Inovação Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro Centro de Biociências e Biotecnologia Av. Alberto Lamego, 2000 - Parque Califórnia – Campos dos Goytacazes/ RJ - 28013-602. Correio eletrônico: biomolcederj@uenf.br ANEXO EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO ATIVIDADE PRESENCIAL OBRIGATÓRIA (APO) Para essa atividade serão necessários os seguintes materiais: 1) Detergente de cozinha; 2) Sal de cozinha (NaCl); 3) Álcool; 4) Copos descartáveis de 50mL (cafezinho); 5) Colheres de chá descartáveis; 6) Recipiente para macerar o tecido; 7) Tecidos vegetais (banana, cebola ou morango); 8) Bastão de vidro; 9) Funil; 10) Pano “Perfex”. Solução de extração: 1) Prepare a solução em um copinho de café. 2) Prepare uma solução contendo duas colheres de chá bem cheias de detergente, meia colher de chá de sal de cozinha e complete o voluma do copinho de café com água (+/- 50 mL de água, um copo de cafezinho cheio). Misture bem até a completa dissolução dos materiais. Procedimentos: 1) Macere o tecido vegetal até formar uma massa homogênea. 2) Em seguida, adicione a “Solução de extração” ao material macerado até atingir a consistência de uma papa rala. 3) Continue macerando por mais 2 minutos para que o DNA entre em solução. 4) Após esse período, filtre o material com o auxílio do pano “Perfex” e o funil e colete a parte aquosa. 5) Para obter o DNA, adicione à parte aquosa previamente purificada, duas vezes o volume correspondente de álcool (Ex: se após a filtração for obtido um volume correspondente a meio copo de cafezinho (25 mL), adicione um copo de cafezinho cheio (50 mL de álcool). 6) O álcool faz com que o DNA saia de solução, formando um aglomerado. 7) Em solução, ao contrário do DNA encontrado no núcleo das células, o DNA está completamente desnaturado (distendido). Por esse motivo, após a adição do álcool, as moléculas de DNA desenovelado (como linhas esticadas) se embolam formando grumos. 8) Assim, durante a precipitação alcoólica observa-se o aspecto fibroso do DNA, que pode ser retirado da solução com o auxílio de um bastão de vidro. 9) O produto assim obtido pode ser utilizado para diversos estudos. Equipe da disciplina Biologia Molecular Prof. Vanildo Silveira – Coordenador Leandro Fernandes – Mediador à Distância Vinicius Mussi – Mediador à Distância
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